Приложение N 3. Рекомендации для медицинских организаций Республики Татарстан по подготовке образцов сыворотки крови для исследования на ВИЧ, гепатиты В и С, доставке их в иммунодиагностические лаборатории и оформлению сопроводительных документов

Приложение N 3
к приказу Минздрава РТ
от 3 декабря 2019 г. N 2381

Рекомендации
для медицинских организаций Республики Татарстан по подготовке образцов сыворотки крови для исследования на ВИЧ, гепатиты В и С, доставке их в иммунодиагностические лаборатории и оформлению сопроводительных документов

Настоящие рекомендации подготовлены в соответствии с Национальным стандартом Российской Федерации ГОСТ Р 53079.4-2008 Технологии лабораторные клинические. "Обеспечение качества клинических лабораторных исследований" (часть 4, правила ведения преаналитического этапа), утвержденным приказом Федерального агентства по техническому урегулированию и метрологии от 18.12.2008 N 554-ст.

1. Отбор образцов биологического материала

Требования к исследуемому материалу:

Лабораторному серологическому исследованию подлежит сыворотка в количестве не менее 3 мл, не содержащая примеси эритроцитов, бактериальных проростов, хилеза, гемолиза. Кровь отбирается в процедурном кабинете в сухие чистые центрифужные или вакуумные пробирки для серологических исследований в соответствии с инструкцией к ним. После образования сгустка (не позднее 2 часов) проводят обязательное центрифугирование при 1,5-3 тыс. об./мин. в течение 10-15 мин с целью отделения сыворотки от сгустка. Отделившуюся сыворотку переносят отдельным наконечником в промаркированную пробирку. В случае использования пробирок с разделительным гелем обязательно проводится центрифугирование в течение 10 мин. при 3 тыс. об./мин. для обеспечения отделения гелем сыворотки от сгустка. Если сыворотка после центрифугирования в другую пробирку не переносится, то максимальный срок хранения образцов в пробирках с разделительным гелем 48 часов. Недопустима доставка в лабораторию гемолизированных и хилезных сывороток - это увеличивает риск получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов и задерживает выдачу результата за счет бракеража.

Пробирки плотно закрывают пробками, маркируют, соблюдая правило двойной идентификации - сокращенное наименование медицинской организации/порядковый номер в штативе и списке (например, РНД/1) и устанавливают в штативы, которые помещают в контейнер для транспортировки, помеченный знаком "Биологическая опасность" (на крышке и сбоку). Порядковые номера на пробирках должны соответствовать нумерации в общем списке и на единичных направлениях.

В случае нарушения требований к исследуемому материалу и сопроводительной документации делается запись в лабораторном журнале бракеража, при этом исследование не проводится.

2. Сопроводительный документ

Ответственное лицо медицинской организации составляет общее "Направление на исследование крови на ВИЧ, гепатиты В и С", в комплект сопроводительной документации входят два экземпляра общего направления и единичное направление на каждого пациента. Направления должны быть напечатаны или написаны разборчиво, без сокращений (по паспорту или иному документу, удостоверяющему личность обследуемого) и содержать в обязательном порядке:

- наименование медицинской организации-направителя;

- вид исследования ("ВИЧ", "ВИЧ, гепатиты В и С", "гепатиты В и С", "Повтор на ВИЧ" и др.);

- порядковый номер образца сыворотки крови;

- фамилия, имя, отчество (при наличии) пациента в именительном падеже (полностью);

- дата рождения полностью (число, месяц, год рождения);

- код контингента;

- адрес места регистрации (по паспорту) и проживания с указанием района города, района республики. При направлении на обследование иностранного гражданина, в регистрационных данных необходимо указывать гражданство (страну);

- место работы, учебы, детское дошкольное учреждение;

- дата взятия крови;

- место для печати результата исследования (заполняется в иммунодиагностической лаборатории).

На бланке общего направления должны быть проставлены: наименование и печать медицинской организации, ее адрес, телефон; в конце списка - фамилия (разборчиво) и подпись ответственного лица, дата отправки материала на исследование.

При наличии технической возможности, все назначения формируются в системе AIDSNET, что позволяет сократить время ожидания результата исследования.

В случае нарушения требований к оформлению сопроводительной документации, в лабораторном журнале бракеража делается соответствующая запись, лабораторное исследование не проводится.

Комплект сопроводительных документов в файловой папке вместе с образцами сывороток крови направляется в диагностическую лабораторию. По окончании выполнения анализов и внесения результатов исследования, один экземпляр общего направления остается в лаборатории, второй экземпляр и единичные направления с проставленными результатами исследования возвращаются в медицинскую организацию, где общий список хранится в папке у ответственного лица, а индивидуальные бланки результатов исследований поступают к врачу, выдавшему направление.

3. Доставка материала в лабораторию

Сыворотка крови для серологических исследований на ВИЧ, гепатиты В и С должна быть доставлена в диагностическую лабораторию не позднее 5 (пяти) дней от даты забора крови при условии хранения сыворотки в специальном холодильнике при температуре 2-8 градусов С. Для соблюдения температурного режима доставки оптимальным является использование сумок-холодильников и хладоэлементов. Материал принимают и регистрируют в специальном журнале и/или лабораторной информационной системе (далее - ЛИС).

В экстренном порядке (в течение 2х дней) должны быть доставлены в серологическую лабораторию ГАУЗ "РЦПБ СПИД и ИЗ МЗ РТ" г. Казань образцы сыворотки крови детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей (с указанием номера ВП или ВУ матери), и повторные пробы сыворотки крови лиц с положительным результатом иммуноблота на ВИЧ. В те же сроки доставляются образцы плазмы крови детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, напрямую в лабораторию молекулярно-биологических исследований ГАУЗ "РЦПБ СПИД и ИЗ МЗ РТ" г. Казань (дети до снятия с учета по перинатальному контакту по ВИЧ-инфекции по достижении ими возраста 18 месяцев).

Обследование ВИЧ-инфицированных пациентов согласно действующим стандартам медицинской помощи проводится:

- на иммунный статус, а также, исследование биоматериала на оппортунистические заболевания - в лабораториях ГАУЗ "РЦПБ СПИД и ИЗ МЗ РТ" и его филиалов в г. Казань, г. Набережные Челны и г. Альметьевск в соответствии с закреплением районов Республики Татарстан (Приложение N 2);

- на вирусную нагрузку ВИЧ и резистентность ВИЧ к АРВП - в лабораторию молекулярно-биологической диагностики ГАУЗ "РЦПБ СПИД и ИЗ МЗ РТ" г. Казань;

- на общеклинические исследования в том числе, общий анализ крови и мочи, биохимические и гемостазиологические исследования - по месту жительства (кроме лиц, проживающих в г. Казань, г. Набережные Челны и г. Альметьевск, обследование которых осуществляется в подразделениях ГАУЗ "РЦПБ СПИД и ИЗ МЗ РТ").

В серологическую лабораторию ГАУЗ "РЦПБ СПИД и ИЗ МЗ РТ" г. Казань доставляются напрямую образцы сыворотки крови следующих пациентов:

- детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей (до снятия с диспансерного учета по перинатальному контакту по ВИЧ);

- повторные, от лиц с положительным результатом иммуноблота;

- повторные от лиц с сомнительным результатом иммуноблота, у которых выявлены антитела к gp 160, взятые через 2 недели после первичного забора крови;

- повторные от лиц с положительным результатом исследования на наличие антигена р24, взятые через 2 недели после первичного забора крови;

- ВИЧ-инфицированных лиц, прикрепленных к ГАУЗ "РЦПБ СПИД и ИЗ МЗ РТ" г. Казань, обследуемых согласно стандартам медицинской помощи при их диспансеризации.

4. Результаты лабораторных исследований

Скрининговые лабораторные исследования должны быть проведены не позднее следующего рабочего дня с момента поступления материала в лабораторию.

При получении отрицательного результата иммуноферментного и/или хемилюминесцентного анализа сыворотка считается отрицательной. Результат проставляется в единичном и общих направлениях и выдается курьеру медицинской организации.

При получении положительного результата анализ проводится в двух повторах из того же образца сыворотки. В случае двух отрицательных результатов сыворотка считается отрицательной. При выявлении хотя бы одного положительного результата из двух повторных исследований в скрининговом тесте сыворотка направляется на подтверждение.

Верификация положительных результатов на маркеры ВИЧ, гепатитов В и С проводятся с целью подтверждения специфичности скринингового теста. В скрининговой лаборатории проводится дополнительное исследование положительных образцов в подтверждающих тестах на HBs-Ag, антиген/антитела к вирусному гепатиту С, без подтверждения положительный результат не выдается.

Верификация положительных в скрининге проб на ВИЧ, полученных в лабораториях Республики Татарстан, независимо от формы собственности, проводится только в референс-лаборатории ГАУЗ "РЦПБ СПИД и ИЗ МЗ РТ", при этом медицинская организация-направитель получает общее направление с пометкой "в работе по ВИЧ".

В случае поступления в лабораторию сыворотки неудовлетворительного качества или в недостаточном количестве лаборатория проставляет пометку "ПОВТОРИТЬ ЗАБОР КРОВИ". При получении результата: "повторить забор крови на ВИЧ" в медицинской организации проводится повторный забор крови у пациента в кратчайшие сроки, и сыворотка в количестве не менее 3 мл отправляется в иммунодиагностическую лабораторию, сделавшую запрос. Повторные образцы направляются в лабораторию отдельно от общей партии сывороток и сопровождаются своим комплектом документов (два общих списка и единичным направлением) с пометкой "Повтор на ВИЧ". Повторные образцы сыворотки на выявление маркеров гепатитов В и С не сопровождаются отдельным списком и могут быть включены в общую партию.

Срок выполнения верификационных исследований на ВИЧ - не позднее 5 рабочих дней от даты поступления материала. Результаты исследования вносятся в единую информационную систему AIDSNET и доступны для ответственных лиц медицинской организации-направителя.

В случае необходимости дополнительного экспертного исследования (недостаточного количества сыворотки для проведения экспертных исследований в полном объеме, а также в случае обнаружения антигена р24 ВИЧ при отрицательном или сомнительном результате иммуноблота и др.) делается запрос повторного забора крови пациента, при этом пометка ПЗК проставляется в графе "результат исследования", в этих случаях до исследования повторной пробы обследование пациента не считается завершенным, статус пациента по ВИЧ считается неопределенным.

При положительном результате на антиген р24 ВИЧ при отрицательном или сомнительном результатах иммуноблота необходимо повторное обследование пациента через 2, 4 и 6 недель методом иммуноблота на ВИЧ.

При сомнительном результате иммуноблота на ВИЧ пациент берется на диспансерное наблюдение с повторным обследованием для определения статуса по ВИЧ через 2 недели, 3 и 6 месяцев.

При отрицательных результатах иммуноблота и исследования на р24 пациенту выдается отрицательный результат исследования на ВИЧ.

5. Алгоритм первичного обследования на ВИЧ