Приложение С (справочное). Международные межлабораторные сличения тестов на фитотоксичность

Приложение С
(справочное)

Международные межлабораторные сличения тестов на фитотоксичность

В 2011 году 28 лабораторий из 12 стран приняли участие в международном межлабораторном сличении данного тестирования, проведя измерение среднего процентного показателя замедления роста средней длины корней (а также средней длины самого длинного корня) для испытания с использованием 250 мг борной кислоты (борная кислота) на 1 кг контрольной почвы. Искусственная почва (5.3) использована в качестве негативного контроля (контрольная почва 1).

В 2015 году восемь лабораторий из шести стран приняли участие в международном межлабораторном сличении данного тестирования, проведя измерение среднего процентного показателя замедления роста средней длины корней, а также средней длины самого длинного корня для испытания с использованием двух проб загрязненных природных почв (почва 1 и почва 2) и одной пробы отходов (почва с отходами). Последняя проба представляла собой древесные отходы, которые оказались настолько токсичными, что семена ни одного из трех видов тест-растений не взошли. Вследствие этого принято решение смешать его со стандартной почвой LUFA 2.2, которая выбрана в качестве негативного контроля (контрольная почва 2) для данного межлабораторного сличения. В итоге для кольцевого тестирования изготовлена смесь, состоящая на 75 % из почвы LUFA и на 25 % из отходов, которая обозначена как почва с отходами.

Свойства и состав проб двух загрязненных природных почв и отходов приведены в ссылочных материалах [40]-[42], а данные по стандартной почве LUFA 2.2 - в таблице данных стандартных почв Сельскохозяйственного научно-исследовательского института (LUFA) Шпейера, Германия.

Критерии валидности установлены на основе результатов первого международного межлабораторного сличения. Следовательно, для данного сличения результаты 28 участников подвергнуты статистическому анализу для выявления выбросов и вычисления общего среднего X отклонений повторяемости и воспроизводимости s_r и s_R, в соответствии с ИСО 5725-2.

Для второго международного межлабораторного сличения применены установленные критерии валидности. Восемь лабораторий выполнили данные критерии для Lepidium sativum и Sinapis alba, но одна лаборатория не выполнила два критерия для Sorghum saccharatum. Таким образом, получено восемь достоверных результатов для двудольных видов и семь результатов для однодольных видов. Настоящие данные также подвергнуты статистическому анализу в соответствии с ИСО 5725-2.

Обобщенные результаты двух международных межлабораторных сличений приведены в таблицах С.1-С.3.

В рамках обоих сличений, учитывая валидные результаты, высокий процент всхожести получен всеми участниками для трех тестируемых видов как в контрольных планшетах, так и в планшетах с пробами (борная кислота, почва 1, почва 2 и почва с отходами).

В ходе второго международного межлабораторного сличения почва 1 не продемонстрировала токсичности ни для двух двудольных, ни для одного однодольного вида тест-растений; почва 2, в свою очередь, оказала значительное воздействие как на замедление роста корней, так и на длину самого длинного корня трех видов растений; почва с отходами определена как нетоксичная для Lepidium sativum, однако оказала легкое (но значимое) токсичное воздействие на рост корней Sinapis alba и легкое (но статистически незначимое) воздействие на длину корней Sorghum saccharatum.

Таблицы С.4 и С.5 содержат процентные показатели воздействия для борной кислоты (первое сличение), почвы 2 и почвы с отходами (второе сличение).

Процентные показатели повторяемости и воспроизводимости средней длины корней и средней длины самого длинного корня являются достаточно низкими (по большей части менее 20 %) и, таким образом, весьма удовлетворительными.

Кроме того, второе межлабораторное сличение также подтверждает выводы первого кольцевого тестирования, а именно вывод о том, что на основе измерения длины самого длинного корня из трех планшетов-повторений получены результаты, аналогичные результатам измерения длины всех корней в каждом планшете: в рамках первого международного межлабораторного сличения благодаря коэффициенту определения для корреляции между средней длиной корня и длиной самого длинного корня, основанному на исследовании 51 пары данных, объясняется 93 % изменчивости данных; в рамках второго международного межлабораторного сличения, охватывающего 25 пар данных, - 88 % изменчивости данных.

Измерение только самого длинного корня вместо измерения всех корней в качестве критерия воздействия в действительности значительно экономит время.

И наконец, второе кольцевое тестирование показало, что критерий валидности, приведенный в предложении ISO/DIS, а именно 70 % прорастание семян, а также минимальная длина корней 30 и 40 мм для самых длинных корней в контрольных пробах являются значимыми критериями приемлемости данного тестирования на фитотоксичность.

Таблица С.1 - Результаты межлабораторных тестов: среднее количество проросших семян

	N	no	X	sr	CVr	SR	CVR
Lepidium sativum
Контрольная почва 1	26	2	9,2	0,8	8,5	0,8	8,9
Борная кислота	27	1	9,4	0,6	6,8	0,7	7,8
Контрольная почва 2	8	0	9,4	0,7	7,9	0,7	7,9
Почва 1	5	3 а	9,9	0,4	3,7	0,4	3,7
Почва 2	7	1	9,7	0,4	4,5	0,5	5,0
Почва с отходами	7	1	9,9	0,4	3,8	0,4	3,8
Sinapis alba
Контрольная почва 1	26	2	9,4	0,7	7,9	0,8	8,5
Борная кислота	23	5	9,6	0,5	4,9	0,6	6,1
Контрольная почва 2	8	0	9,5	0,7	7,2	0,7	7,2
Почва 1	6	2	9,7	0,7	6,9	0,7	6,9
Почва 2	8	0	9,4	0,8	8,1	0,8	8,1
Почва с отходами	6	2	9,4	0,5	5,6	0,7	7,6
Sorghum saccharatum
Контрольная почва 1	25	3	9,2	0,7	7,6	0,8	8,3
Борная кислота	25	3	9,0	0,8	8,7	0,8	8,8
Контрольная почва 2	7	0	8,5	1,2	13,5	1,2	13,5
Почва 1	6	1	8,4	1,2	14,2	1,2	14,2
Почва 2	6	1	8,3	1,5	18,3	1,5	18,3
Почва с отходами	7	0	8,4	1,1	13,0	1,4	17,0
N - количество лабораторий после исключения выбросов. no - количество выбросов. X - среднее количество проросших семян. sr - стандартное отклонение повторяемости. CVr - вариационный коэффициент повторяемости, %. SR - стандартное отклонение воспроизводимости. CVR - вариационный коэффициент воспроизводимости, %. а) Данный показатель является статистическим артефактом, не имеющим практической значимости. В действительности среднее количество проросших семян для восьми лабораторий (включая статистические выбросы) составляет 9,4, как и для контрольной почвы 2.

Таблица С.2 - Результаты межлабораторных тестов: средняя длина корней

	N	no	X	sr	CVr	SR	CVR
Lepidium sativum
Контрольная почва 1	28	0	51,0	5,8	11,3	8,3	16,3
Борная кислота	27	1	27,7	3,3	11,9	4,7	17,1
Контрольная почва 2	8	0	56,2	3,6	6,3	5,8	10,2
Почва 1	8	0	57,7	3,3	5,7	8,1	14,0
Почва 2	7	1	33,6	2,4	7,1	3,7	11,1
Почва с отходами	8	0	53,9	4,1	7,6	4,8	8,9
Sinapis alba
Контрольная почва 1	26	2	50,4	5,1	10,1	9,3	18,4
Борная кислота	27	1	28,2	3,4	12,1	5,6	19,8
Контрольная почва 2	8	0	59,5	7,3	12,2	9,9	16,6
Почва 1	8	0	60,9	5,8	9,5	9,8	16,2
Почва 2	7	1	33,6	4,1	12,1	4,8	14,3
Почва с отходами	8	0	47,0	5,8	12,2	8,0	17,0
Sorghum saccharatum
Контрольная почва 1	28	0	47,7	7,2	15,2	14,7	30,7
Борная кислота	25	3	32,4	2,9	8,8	6,7	20,6
Контрольная почва 2	7	0	33,2	4,5	13,5	4,5	13,5
Почва 1	6	1	33,2	3,3	10,0	4,9	14,7
Почва 2	7	0	21,9	4,7	21,6	5,8	26,5
Почва с отходами	7	0	26,5	4,1	15,6	8,0	30,3
N - количество лабораторий после исключения выбросов. no - количество выбросов. X - средняя длина корня, в мм. sr - стандартное отклонение повторяемости. CVr - вариационный коэффициент повторяемости, %. SR - стандартное отклонение воспроизводимости. CVR - вариационный коэффициент воспроизводимости, %.

Таблица С.3 - Результаты межлабораторных тестов: средняя длина самых длинных корней

	N	no	X	sr	CVr	SR	CVR
Lepidium sativum
Контрольная почва 1	27	1	65,0	4,9	7,6	8,8	12,6
Борная кислота	27	1	38,3	4,1	10,6	4,9	12,8
Контрольная почва 2	8	0	71,8	4,1	5,7	6,1	8,4
Почва 1	7	1	75,3	3,2	4,2	7,6	10,1
Почва 2	8	0	38,0	3,5	9,2	9,7	25,6
Почва с отходами	8	0	67,8	3,6	5,3	4,9	7,3
Sinapis alba
Контрольная почва 1	27	1	78,6	9,3	11,9	19,6	25,0
Борная кислота	26	2	46,1	4,1	8,8	8,3	17,9
Контрольная почва 2	8	0	82,5	4,2	5,1	7,3	8,9
Почва 1	7	1	80,3	4,6	5,8	8,2	10,3
Почва 2	6	2	45,7	4,2	9,1	4,2	9,1
Почва с отходами	8	0	71,0	6,1	8,6	6,1	8,6
Sorghum saccharatum
Контрольная почва 1	27	1	78,6	9,3	11,9	19,6	25,0
Борная кислота	26	2	46,1	4,1	8,8	8,3	17,9
Контрольная почва 2	6	1	49,5	6,9	14,0	7,4	14,9
Почва 1	6	1	53,7	6,6	12,3	12,2	22,8
Почва 2	7	0	31,5	5,7	18,1	9,0	28,6
Почва с отходами	6	1	47,2	5,7	12,0	11,2	23,7
N - количество лабораторий после исключения выбросов. no - количество выбросов. X - средняя длина самого длинного корня, в мм. sr - стандартное отклонение повторяемости. CVr - вариационный коэффициент повторяемости, %. SR - стандартное отклонение воспроизводимости. CVR - вариационный коэффициент воспроизводимости, %.

Таблица С.4 - Результаты межлабораторных тестов: процентный показатель воздействия на среднюю длину корня

	N	no	X	sr	CVr	SR	CVR
Lepidium sativum
Борная кислота	27	1	45,0	6,7	14,8	8,6	19,1
Почва 2	7	1	38,7	4,3	11,0	9,6	24,8
Sinapis alba
Борная кислота	27	1	43,8	6,9	15,8	11,1	25,3
Почва 2	7	1	43,8	6,9	15,8	8,1	18,4
Почва с отходами	8	0	23,3	9,4	40,3	12,0	51,5
Sorghum saccharatum
Борная кислота	25	3	30,5	5,8	18,9	10,8	35,4
Почва 2	7	0	34,2	14,2	41,5	17,1	50,0
N - количество лабораторий после исключения выбросов. no - количество выбросов. X - средний показатель воздействия на среднюю длину корней, %. sr - стандартное отклонение повторяемости. CVr - вариационный коэффициент повторяемости, %. SR - стандартное отклонение воспроизводимости. CVR - вариационный коэффициент воспроизводимости, %.

Таблица С.5 - Результаты межлабораторных тестов: процентный показатель воздействия на длину самого длинного корня

	N	no	X	sr	CVr	SR	CVR
Lepidium sativum
Борная кислота	28	0	41,8	6,0	14,4	7,4	16,6
Почва 2	8	0	42,9	4,2	9,7	8,4	19,7
Sinapis alba
Борная кислота	27	1	44,4	6,4	14,5	8,2	18,6
Почва 2	7	1	45,1	5,2	11,4	5,7	12,8
Sorghum saccharatum
Борная кислота	27	1	41,2	5,3	12,9	7,5	18,1
Почва 2	7	0	37,9	11,4	30,0	19,1	50,3
N - количество лабораторий после исключения выбросов. no - количество выбросов. X - средний показатель воздействия на длину самого длинного корня, %. sr - стандартное отклонение повторяемости. CVr - вариационный коэффициент повторяемости, %. SR - стандартное отклонение воспроизводимости. CVR - вариационный коэффициент воспроизводимости, %.

Подробные отчеты о двух межлабораторных сравнительных испытаниях тестов на фитотоксичность приведены в [44].