Приложение А (справочное). Требования к ПЦР-лаборатории

Приложение А
(справочное)

Требования к ПЦР-лаборатории

А.1 Лаборатория должна быть разделена на зоны (отдельные комнаты или помещения) для каждой из стадий ПЦР-диагностики.

А.2 Рабочая зона ПЦР-лаборатории в соответствии с этапами ПЦР-испытания должна включать следующий минимальный набор изолированных помещений:

- приема и регистрации лабораторной пробы;

- первичной обработки лабораторной пробы, подготовки анализируемой пробы (I зона, отдельный ламинар);

- выделения НК из анализируемой пробы (I зона, отдельный ламинар).

Примечание - Помещения, где проводят работы по выделению и амплификации НК, располагают как можно дальше от помещения для детекции и учета результатов ПЦР с целью исключения движения воздушного потока и предотвращения контаминации продуктами амплификации (ампликонов), поскольку в процессе ПЦР фрагменты ДНК накапливаются в огромных количествах и являются идеальными продуктами для реамплификации;

- приготовления реакционных смесей, постановки ПЦР (II зона);

- гибридизационно-флюоресцентной детекции и учета результатов испытания методом Real Time PCR (III зона).

Рисунок 1 - Схема ПЦР-лаборатории

A.3 Работа в ПЦР-лаборатории должна быть организована в одном направлении: от зон выделения и амплификации НК к зоне детекции и учета результатов ПЦР. В разных зонах лаборатории должны работать разные сотрудники.

А.4 Не допускается выполнение ПЦР-испытаний в помещениях для проведения работ другими лабораторными и генно-инженерными методами (клонирование, секвенирование, рестрикционный анализ).

Все работы по подготовке испытуемых проб и выделению НК проводят в ламинарном боксе II, III классов защиты.

А.5 Каждая рабочая зона должна иметь свой набор лабораторной мебели, оборудования, реагентов, автоматических пипеток, расходных материалов, лабораторной посуды, защитной одежды, обуви, уборочного инвентаря и др. Имущество должно иметь маркировку, использование его в других помещениях или для проведения других работ запрещено.

А.6 Для проведения ПЦР-испытаний необходимо использовать только одноразовые микропробирки и наконечники. Для предотвращения аэрозольного загрязнения автоматических пипеток используют наконечники с антиаэрозольным фильтром. Пробирки и наконечники для автоматических пипеток используют однократно. При переходе от одной пробы к другой обязательно меняют наконечники с целью предотвращения перекрестной контаминации в процессе выделения ДНК, РНК или при раскапывании реакционной смеси.

А.7 Работы по подготовке реакционной смеси для ПЦР, внесению выделенных НК в ПЦР-смесь проводят в ПЦР-боксах, оснащенных ультрафиолетовыми лампами.

Регулярно следует проводить мониторинг помещений, оборудования, рабочих поверхностей, дверных ручек на наличие продуктов амплификации.