Приложение А (справочное). Примеры схем исследования

Приложение А
(справочное)

Примеры схем исследования

А.1 Общая схема проведения функциональных/поведенческих испытаний, оценки нейропатологии и массы мозга приведена на рисунке А.1. Схема распределения животных изложена в разделе 5.2 настоящего стандарта (PND - послеродовой день).

Рисунок А.1 - Общая схема исследования функционально-поведенческих, нейропатологических показателей и массы мозга

А.2 Ниже приведены примеры возможных способов распределения животных и сведения данных в таблицу. Примеры приведены для иллюстрации того, что распределение подопытных животных в соответствии с разными моделями испытаний может быть выполнено несколькими способами.

А.3 Пример 1 (см. таблицу А.3.1)

А.3.1 Одну группу из 20 детенышей разного пола/уровня дозы (т.е. одного самца и одну самку из помета) используют для испытания предотъемного поведенческого онтогенеза. Из этих животных 10 детенышей разного пола/уровня дозы (т.е. одного самца или одну самку из помета) гуманно умерщвляют в PND 22. Мозг извлекают, взвешивают и обрабатывают для патологогистологической оценки. Дополнительно собирают данные по массе мозга, используя нефиксированный мозг оставшихся 10 самцов и 10 самок из каждого уровня дозы.

А.3.2 Другую группу из 20 детенышей разного пола/уровня дозы (т.е. одного самца и одну самку из помета) используют для функциональных/поведенческих исследований после отъема (подробные клинические наблюдения, двигательная активность, слуховой испуг и когнитивные функции у молодых животных) и оценки возраста полового созревания. Из этой группы 10 животных разного пола/уровня дозы (т.е. одного самца или одну самку из помета) вводят в наркоз и фиксируют методом перфузии на завершающей стадии исследования (примерно на PND 70). После дополнительной фиксации in situ извлекают мозг и подготавливают его для дальнейшей нейропатологической оценки.

А.3.3 Для исследования когнитивных функций у особей на молодой взрослой стадии (например, на PND 60-70) используют третью группу из 20 детенышей разного пола/уровня дозы (например, одного самца и одну самку из помета). Из этой группы животных 10 детенышей разного пола/группы (одного самца или одну самку из помета) на завершающей стадии исследования умерщвляют, мозг извлекают и взвешивают.

А.3.4 Оставшихся 20 животных разного пола/группы резервируют для возможных дополнительных испытаний.

Таблица А.3.1

Номер детеныша a)		Число детенышей для испытания	Обследование/испытание
m	f
1	5	20 m + 20 f	Поведенческий онтогенез
		10 m + 10 f	PND 22 масса мозга/нейропатология/морфометрия
		10 m + 10 f	PND 22 масса мозга
2	6	20 m + 20 f	Подробные клинические наблюдения
		20 m + 20 f	Двигательная активность
		20 m + 20 f	Половое созревание
		20 m + 20 f	Моторные и сенсорные функции
		20 m + 20 f	Обучение и память (PND 25)
		10 m + 10 f	Масса мозга/нейропатология/морфометрия молодых взрослых животных PND 70
3	7	20 m + 20 f	Обучение и память (молодых взрослых животных)
		10 m + 10 f	Масса мозга молодых взрослых животных PND 70
4	8	-	Зарезервированные животные для замены или дополнительных исследований
а) В этом примере из пометов отбирают по 4 самца (m) и 4 самки (f), детенышам-самцам присваивают номера с 1 по 4, детенышам-самкам - с 5 по 8.

А.4 Пример 2 (см. таблицу А.4.1)

А.4.1 Одну группу из 20 детенышей разного пола/уровня дозы (т.е. одного самца и одну самку из помета) используют для испытания предотъемного поведенческого онтогенеза. Из этих животных 10 детенышей разного пола/уровня дозы (т.е. одного самца или одну самку из помета) гуманно умерщвляют в PND 11. Мозг извлекают, взвешивают и обрабатывают для патологогистологической оценки.

А.4.2 Другую группу из 20 детенышей разного пола/уровня дозы (одного самца и одну самку из помета) используют для постотъемных исследований (подробные клинические наблюдения, двигательная активность, оценка возраста полового созревания, моторные и сенсорные функции). Из животных этой группы 10 животных разного пола/уровня дозы (т.е. одного самца или одну самку из помета) вводят в наркоз и фиксируют методом перфузии на завершающей стадии исследования (примерно PND 70). После дополнительной фиксации in situ мозг извлекают, взвешивают и обрабатывают для нейропатологической оценки.

А.4.3 Для исследования когнитивных функций у подростков и особей на молодой взрослой стадии отбирают 10 детенышей разного пола/уровня дозы (например, одного самца или одну самку из помета). Для исследования когнитивной функции в PND 23 и на молодой взрослой стадии используют разных животных. По завершении исследования 10 молодых взрослых особей разного пола/подопытной группы умерщвляют, извлекают мозг и взвешивают.

А.4.4 Оставшихся 20 животных разного пола/группы, не отобранных для исследования, при отъеме умерщвляют и утилизируют.

Таблица А.4.1

Номер детеныша a)		Число детенышей для испытания	Обследование/испытание
m	f
1	5	20 m + 20 f	Поведенческий онтогенез
		10 m + 10 f	PND 11 масса мозга/невропатология/морфометрия
2	6	20 m + 20 f	Подробные клинические наблюдения
		20 m + 20 f	Двигательная активность
		20 m + 20 f	Половое созревание
		20 m + 20 f	Моторные и сенсорные функции
		10 m + 10 f	Масса мозга/нейропатология/морфометрия молодых взрослых животных PND 70
3	7	10 m + 10 f b)	Обучение и память (PND 23)
3	7	10 m + 10 f b)	Обучение и память (на молодой взрослой стадии) Масса мозга у молодых взрослых особей
4	8	-	Животных умерщвляют, тушки утилизируют в PND 21
a) В этом примере из пометов отбирают по 4 самца (m) и 4 самки (f), детенышам-самцам присваивают номера с 1 по 4, детенышам-самкам - с 5 по 8. b) Для когнитивных тестов в PND 23 и на молодой взрослой стадии используют разных детенышей (например, четные или нечетные пометы из общего числа 20).

А.5 Пример 3 (см. таблицу А.5.1)

А.5.1 Одну группу из 20 детенышей разного пола/уровня дозы (т.е. одного самца и одной самки из помета) исследуют для оценки массы мозга и невропатологии в PND 11. Из этих животных 10 детенышей разного пола/уровня дозы (одного самца или одну самку из помета) гуманно умерщвляют в PND 11, извлекают мозг, взвешивают и обрабатывают для патологогистологической оценки. Дополнительно собирают данные по массе мозга, используя нефиксированный мозг оставшихся 10 самцов и 10 самок из каждого уровня дозы.

А.5.2 Другую группу из 20 детенышей разного пола/уровня дозы (одного самца и одну самку из помета) используют для оценки поведенческого онтогенеза (двигательной активности) в период после отъема (двигательной активности и возраста полового созревания) и испытания когнитивной функции молодого животного.

А.5.3 Другую группу из 20 детенышей разного пола/уровня дозы (одного самца и одну самку из помета) используют для испытания моторной и сенсорной функций (слуховой испуг) и проведения подробных наблюдений. Из животных этой группы 10 животных разного пола/уровня дозы (т.е. одного самца и одну самку из помета) анестезируют и фиксируют методом перфузии на стадии завершения исследования (примерно в PND 70). После дополнительной фиксации in situ мозг извлекают, взвешивают и обрабатывают для нейропатологической оценки.

А.5.4 Для исследования когнитивных функций на молодой взрослой стадии отбирают еще 20 детенышей разного пола/уровня дозы (например, одного самца и одну самку из помета). Из них 10 животных разного пола/ уровня дозы (например, одного самца или одну самку из помета) умерщвляют по завершении исследования, мозг извлекают и взвешивают.

Таблица А.5.1

Номер детеныша а)		Число детенышей для испытания	Обследование/испытание
m	f
1	5	10 m + 10 f	PND 11 масса мозга/нейропатология/морфометрия
		10 m + 10 f	PND 11 масса мозга
2	6	20 m + 20 f	Поведенческий онтогенез (двигательная активность)
		20 m + 20 f	Двигательная активность
		20 m + 20 f	Половое созревание
		20 m + 20 f	Обучение и память (PND 27)
3	7	20 m + 20 f	Слуховой испуг (половое созревание и молодые взрослые животные)
		20 m + 20 f	Подробные клинические наблюдения
		10 m + 10 f	Молодые взрослые животные - масса мозга/нейропатология/морфометрия PND 70
4	8	20 m + 20 f	Обучение и память (молодые взрослые животные)
		10 m + 10 f	Масса мозга молодых взрослых животных
а) В этом примере из пометов отбирают по 4 самца (m) и 4 самки (f), детенышам-самцам присваивают номера с 1 по 4, детенышам-самкам - с 5 по 8.