Приложение VII. Протокол ЕЕР медицинского обследования особей, предназначенных для разведения в рамках программы реинтродукции

Приложение VII

Протокол ЕЕР медицинского обследования особей, предназначенных для разведения в рамках программы реинтродукции

В рамках программы реинтродукции отобранные особи дальневосточного леопарда будут перевезены из зоопарков в центр разведения в Приморском крае, и их потомство впоследствии будет выпущено в природную среду обитания. После использования в программе реинтродукции размножающиеся леопарды будут возвращены в соответствующие зоопарки. В данном протоколе описан процесс медико-биологического обследования особей перед отправкой в центр разведения.

Необходимые анализы и обследования, которые должны пройти все особи, предназначенные для размножения:

1. Оценить поведение, двигательную активность, остроту зрения леопарда и т.п. путем наблюдений. Необходимо учитывать, что на поведение леопарда может влиять присутствие наблюдателя.

2. Провести под общим наркозом тщательное клиническое обследование всех особей в возрасте двух лет и более.

Особое внимание следует уделить следующему:

Ротовая полость - состояние зубов и десен, наличие/отсутствие папиллом и т.п.

Голова - деформации черепа, аномалии прикуса (челюсть с недокусом/перекусом), выделения из носа и т.п.

Наружные половые органы - оценить анатомию наружных половых органов (вульвы и вагины), отметить наличие/отсутствие кости пениса, измерить и записать размеры яичек.

Яички - наличие/отсутствие обоих яичек

(По меньшей мере, у одного самца дальневосточного леопарда в неволе был отмечен крипторхизм).

Сердечная деятельность - оценить работу сердца путем прослушивания с помощью стетоскопа, сделать электрокардиографию, эхокардиографию и торакальную радиографию с использованием стандартных методик.

(Пансистолические шумы в сердце были выявлены у обитающих в природе и содержащихся в неволе леопардов; причины шумов пока не выяснены).

Строение конечностей и подвижность суставов - Посчитайте количество пальцев на лапах!

(Врожденное искривление лучевых и локтевых костей было зафиксировано, как минимум, в одном выводке леопардов в неволе).

Осмотр глаз с помощью офтальмоскопа

Осмотр ушей с помощью отоскопа

Грыжи - особое внимание уделить осмотру на наличие пупочной грыжи.

Длина хвоста - измерить и записать размеры. (Брахиурия была отмечена у четырех дальневосточных леопардов, содержащихся в неволе).

3. Анализ крови с ЭДТА

Анализ крови по следующим показателям: гематокрит, гемоглобин, количество эритроцитов, среднее содержание гемоглобина в эритроцитах (МСН), средний объем эритроцитов (MCV), средняя концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС), количество лейкоцитов и лейкоцитарная формула, количество тромбоцитов. Исследование мазков крови на наличие гемопаразитов, включая Babesia spp и Haemobartonella (мазки высушены на воздухе и зафиксированы в метаноле в течение 1 минуты).

Исследование образцов крови с ЭДТА методом ПЦР на наличие дирофилярий, бабезий (Babesia spp) и вируса кошачьей лейкемии.

4. Серологический анализ крови

Биохимический анализ сыворотки крови по следующим показателям: общий белок, альбумин, глобулин, мочевина, креатинин, аланинаминотрансфераза, щелочная фосфатаза, гамма-глутамил трансфераза, общий билирубин. Специфические серологические анализы:

Хламидофилы	титры антител
Вирус кошачьего иммунодефицита	антитела (исследование методом ELISA и Western Blotting)
Кошачий калицивирус	титры антител
Вирус кошачьего герпеса	титры антител
Вирус кошачьей лейкемии	антиген
Вирус собачьей чумы	титры антител
Вирус панлейкопении кошек	титры антител
Коронавирус кошачьего энтерита	титры антител
Дирофиляроз	титры антител
Токсоплазмоз	титры антител IgG и IgM

5. Паразиты

Эктопаразиты должны быть собраны и зафиксированы в 70% этиловом спирте для последующей идентификации и хранения. Для выявления эндопаразитов необходимо исследовать свежие экскременты. Для фиксации эндопаразитов рекомендуется 70% этиловый спирт.

6. Микробиологические исследования экскрементов

Взять 3 образца свежих экскрементов для посева на патогенную флору (бактерии Salmonella и Campylobacter spp). Образцы экскрементов также необходимы для исследования методом ПЦР на наличие вируса панлейкопении и коронавируса кошачьего энтерита.

7. Генетические исследования

Образцы крови с ЭДТА (или кровь в растворе трасферрина, этаноламина и селена (среда TES medium) можно использовать для определения степени генетического разнообразия и гетерогенности генов класса II главного комплекса гистосовместимости у леопардов, содержащихся в неволе.

8. Возбудители респираторных заболеваний

Назальный мазок необходимо использовать для посева на Bordetella. Орофарингеальный и конъюнктивальные мазки необходимо исследовать методом ПЦР на наличие калицивируса кошек, хламидофилы, и вируса герпеса кошек. Орофарингеальные мазки в транспортной системе для вирусов должны быть переданы для посева на калицивирус и вирус герпеса кошек.

9. Банк биологических образцов

У каждой особи леопарда необходимо взять следующие образцы:
Сыворотка	20 мл	Хранить при температуре ниже -70°С
Плазма	10 мл	Хранить при температуре ниже -70°С
Шерсть	1 пробирка	Можно хранить при комнатной температуре
Кровь с ЭДТА	5 мл	Хранить при температуре ниже -20°С
или
Кровь в растворе трасферрина, этаноламина и селена (среда TES medium) 5 мл
Хранить при температуре ниже 4°С

Исследования, которые желательно провести для каждого леопарда, предназначенного для размножения:

1. Исследование репродуктивной системы с помощью ультрасонографии.

Примечание - сотрудники Института изучения зоопарковских и диких животных (Institute of Zoo and Wildlife) в Берлине уже провели ряд ультрасонографических исследований репродуктивной системы самцов и самок дальневосточного леопарда, содержащихся в неволе в рамках Европейской программы размножения и сохранения (ЕЕР).

2. Сбор спермы у самцов и хранение в жидком азоте.

Примечание - сотрудники Института изучения зоопарковских и диких животных (Institute of Zoo and Wildlife) в Берлине уже провели исследование репродуктивной системы самцов дальневосточного леопарда, содержащихся в неволе в рамках Европейской программы размножения и сохранения (ЕЕР).

3. Анализ мочи

Для анализа мочи необходимо использовать свежую порцию мочи, желательно собранную с помощью катетера. Необходимо провести макроскопический анализ и микроскопическое исследование осадков мочи, определить кислотность, удельный вес (SG), количество белка, креатинина и бактерий.