Приложение Б (обязательное). Определение концентрации клеток винных дрожжей

Приложение Б
(обязательное)

Определение концентрации клеток винных дрожжей

Б.1 Сущность метода

Метод основан на просмотре микробиологических препаратов под микроскопом и на прямом подсчете клеток микроорганизмов в единице объема пробы. Прямое микроскопирование препаратов позволяет обнаружить винные дрожжи и установить их количество.

Б.2 Технические средства, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

Микроскоп световой биологический любого типа, обеспечивающий увеличение 900-1000х.

Камера счетная ^*, техническое средство, представляющее собой толстое предметное стекло, разделенное бороздками на части. Центральная часть стекла ниже боковых на 0,1 мм, на нее нанесена сетка. Площадь сетки равна 9 мм². На предметном стекле имеются две такие сетки, разделенные центральной полосой. Сетка разделена на 225 больших квадратов, 15 рядов по 15 квадратов в каждом. Каждый третий ряд в вертикальном и горизонтальном направлении разделен на маленькие квадраты.

------------------------------

^*_{Например, камера Горяева. Данная информация является рекомендуемой, приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможность использования других камер с аналогичными техническими характеристиками.}

------------------------------

Стекла покровные для микропрепаратов по ГОСТ 6672.

Палочки стеклянные.

Петли бактериологические.

Кислота серная по ГОСТ 4204.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.

Спиртовка.

Допускается применение других технических средств, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по техническим характеристикам, а также материалов и реактивов, по качеству не уступающих вышеуказанным.

Б.3 Отбор и подготовка проб

Б.3.1 Отбор проб - по ГОСТ 31730 (с соблюдением правил стерильности) и ГОСТ 31904 со следующим дополнением:

- готовую продукцию отбирают с линии розлива в количестве трех бутылок, при стерильном розливе - в количестве шести бутылок, по две бутылки в начале, середине и конце розлива.

Б.3.2 Подготовка проб - по ГОСТ 26669.

Б.4 Условия проведения определения

Микробиологические работы по определению количества дрожжевых клеток проводят в асептических условиях по ГОСТ ISO 7218.

Б.5 Требования безопасности

Требования безопасности - по ГОСТ ISO 7218.

Б.6 Подготовка к проведению определения

Перед взятием пробы готового напитка пробку и горловину бутылки протирают ватным тампоном, смоченным в 70 %-ном растворе этилового спирта по ГОСТ 5962. Затем быстро снимают пробку бутылки. Горловину открытой бутылки обжигают в пламени спиртовки или протирают 70 %-ным раствором этилового спирта по ГОСТ 5962 и отбирают необходимый для определения объем напитка.

Не допускается обжигать над пламенем стеклянную бутылку с газированным напитком, закупоренную кроненпробкой.

Непосредственно перед вскрытием упаковку с готовым напитком перемешивают многократным переворачиваем.

Б.7 Проведение определения

Б.7.1 При определении общего содержания винных дрожжей в 1 см³ и их прямого подсчета используют счетную камеру.

Б.7.2 Для прямого микроскопирования готовят препарат "раздавленная капля". Каплю определяемой пробы после тщательного взбалтывания не менее 1 мин сухой стерильной стеклянной палочкой или бактериологической петлей наносят на сетку счетной камеры и покрывают шлифованным специальным покровным стеклом размером 18 x 18, толщиной (0,30  0,05) мм. Можно использовать покровные стекла размером 24 x 24 толщиной (1,16  0,01) мм, при необходимости разводят пробу, так как в одном большом квадрате число клеток микроорганизмов не должно превышать 60-80, а в пяти квадратах - 600. Жидкость должна быть равномерно распределена по поверхности сетки, без пузырьков. Покровное стекло прижимают большими пальцами к боковым площадкам счетной камеры и притирают до появления радужных (Ньютоновских) колец. При необходимости избыток жидкости удаляют фильтровальной бумагой.

Подсчет клеток начинают через 3-5 мин после заполнения счетной камеры, для того чтобы клетки осели и были видны под микроскопом в одной плоскости. Счетную камеру кладут на столик микроскопа и находят в поле зрения сетку. Подсчет вед