Приложение. Этапы проведения бактериологического исследования, рецепты питательных сред и окраска по методу Гинса

Приложение

I. Этапы проведения бактериологического исследования:

1-й день - посев патологического материала на питательные среды. Микроскопия мазков из патологического материала;

2-й день - просмотр посевов, микроскопия культур из колоний, типичных для гемофильных бактерий. Отвивка субкультур;

3-й день - учет роста субкультур на питательных средах. Заражение морских свинок;

4-8-й дни - учет результатов биопробы.

II. Рецепты питательных сред

1. Шоколадный агар. К расплавленному 2%-ному МПА (рН 7,2) при температуре 80-90°С добавляют 10% (по объему) стерильной дефибринированной крови лошади или барана. Питательную среду тщательно перемешивают и после охлаждения до 50-60°С разливают в чашки Петри. Среда пригодна для употребления в течение 10 дн. при условии хранения в темноте при 5-8°С.

2. Для культивирования Н. parasuis с "баккормилками" используют кровяной МПА (рН 7,2), содержащий 5% крови овцы, и сывороточный МПА (рН 7,2) с добавлением 10% сыворотки крови крупного рогатого скота, лошади или овцы, которые готовят обычным способом.

В качестве питающей бактериальной культуры ("баккормилки") используют любой негемолитический штамм эшерихий или белого стафилококка. Культуру стафилококка легко получить посевом смыва кожных покровов рук на кровяной МПА.

III. Окраска по методу Гинса

К одному объему черной туши добавляют 3 объема дистиллированной воды: Разведенную тушь центрифугируют 15-20 мин при 2-3 тыс. об/мин для осаждения крупных частиц. Надосадочную жидкость используют для работы.

На предметном стекле в капле туши суспендируют петлю исследуемой агаровой культуры, делают мазок (как мазок из крови), высушивают, фиксируют метиловым или этиловым спиртом в течение 3-5 мин. Окрашивают 3-5 мин карболовым фуксином Циля, разведенным в соотношении 1:3. Промывают водой, высушивают и микроскопируют. При микроскопировании на темном фоне препарата контрастно выделяются неокрашенные капсулы, внутри которых находятся бактерии красного цвета.