Приложение 4. Методика бактериологического контроля качества дезинфекции животноводческих помещений

Приложение 4

Методика
бактериологического контроля качества дезинфекции животноводческих помещений

1. Настоящая методика предназначена для контроля качества проведенной профилактической или вынужденной дезинфекции животноводческих помещений при заболеваниях, возбудители которых относятся к неспорообразующим микробам и к вирусам.

Качество дезинфекции определяется по выделению с поверхностей обеззараживаемых объектов кишечной палочки лактозопозитивной группы (Е. coli commune, citovorum aerogenes) и стафилококка (S. albus, aureus, citreus).

По наличию кишечной палочки определяется качество профилактической и вынужденной дезинфекции при паратифозных инфекциях, роже свиней, бруцеллезе, пастереллезе, чуме свиней, чуме птиц, а при ящуре - текущей дезинфекции.

По наличию стафилококка определяется качество дезинфекции при ящуре (заключительная дезинфекция), оспе овец, оспе птиц, лептоспирозе и туберкулезе и вирусном гепатите утят.

2. Для бактериологического исследования после проведенной дезинфекции пробы берут с 10-20 различных участков (с поверхностей полов, стойл и проходов, с кормушек, со стен и т.п.).

Пробы берут стерильными ватными тампонами, смоченными в стерильном нейтрализующем растворе.

При применении для дезинфекции раствора едкого натра в качестве нейтрализующего раствора берут раствор уксусной кислоты, при дезинфекции формалином - раствор нашатырного спирта, при дезинфекции хлорной известью - раствор гипосульфита и при дезинфекции щелочным раствором формальдегида - раствор, состоящий из растворов уксусной кислоты и нашатырного спирта.

Нейтрализующие растворы готовят в концентрации, в 10 раз меньшей, чем концентрация применяемого дезинфектанта.

При применении для дезинфекции других средств в качестве нейтрализующего раствора используют стерильную обычную воду.

3. После проведения профилактической дезинфекции пробы берут через 2-3 часа после проведения дезинфекции, а после проведения вынужденной дезинфекции (в очагах инфекций) - по истечении срока экспозиции, как указано в соответствующих разделах инструкции по дезинфекции.

4. Пробы, взятые для исследования, каждую в отдельности отмывают во флаконе в 20 мл стерильной нейтрализующей жидкости или воды, как указано в пункте 2, путем нескольких погружений и отжатий тампона. Отжатые тампоны удаляют, а жидкость центрифугируют при 3000-3500 об/мин в течение 20-30 минут. Затем надосадочную жидкость сливают, в пробирку доливают равное количество стерильной воды, содержимое смешивают и снова центрифугируют в течение 20 минут. После этого надосадочную жидкость сливают, а из центрифугата на соответствующие элективные среды делают посевы.

5. Для индикации кишечной палочки пробы высевают на модифицированную среду Хейфеца, по 0,5 мл центрифугата на 5 мл среды. Посев выдерживают в термостате при температуре 43° в течение 12-18 часов.

Наличие кишечной палочки в посеве характеризуется изменением малинового цвета среды в зеленый или салатный, с помутнением среды и газообразованием. Другие цветовые изменения (желтоватый, розовый, сероватый), возникающие при росте посторонних микроорганизмов, не учитываются.

Для индикации стафилококков высевают по 0,5 мл центрифугата в 5 мл 50%-ного сахарозного мясо-пептонного бульона. Через 24 часа инкубирования в термостате при 37° делают пересевы петлей на 8,5%-ный солевой мясо-пептонный агар. Посевы также выдерживают в термостате 24 часа при температуре 37°. Выросшую культуру исследуют под микроскопом.

6. Проведенная дезинфекция признается удовлетворительной, если нет роста тестмикробов в исследованных пробах:

профилактическая - во всех пробах

текущая - не менее чем в 90% проб

заключительная - во всех пробах

Методики приготовления элективных питательных сред

1. Модифицированная среда Хейфеца представляет собой среду, в которой 5 г маннита заменено 4 г лактозы, а рН с 7,0-7,6 доведен до 7,4-7,8*.

Для приготовления среды к 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия и 4 г лактозы. Смесь доводят до кипения, затем фильтруют и после остывания определяют рН, который должен быть в пределах 7,4-7,8. Затем к среде добавляют в качестве индикаторов 1 мл 5%-ного спиртового раствора розоловой кислоты и 2,3 мл 0,1%-ного водного раствора метиленовой сини.

Среду разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм. 15 минут или в аппарате Коха при температуре 100° в течение 20 минут. Исходный цвет среды - красновато-сиреневый.

2. Сахарозный мясо-пептонный бульон. К обычному мясо-пептонному бульону с рН 7,2-7,6 добавляют 50% сахарозы и подогревают до полного ее растворения. После этого сахарозный бульон разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 0,5 атм. 20 минут.

3. Солевой мясо-пептонный агар. К мясо-пептонному агару добавляют 8,5% хлористого натрия. Затем среду стерилизуют при 1,5 атм. 30 минут. Перед использованием среду расплавляют и разливают в чашки Петри с соблюдением условий стерильности.