Приложение 2. Рекомендации по соблюдению противоэпидемического режима в лабораториях диагностики ВИЧ-инфекции для врачей-лаборантов и эпидемиологов, курирующих ВИЧ-инфекцию

Приложение 2
к приказу МЗ РТ
от 22 декабря 1992 г. N 1035

Рекомендации
по соблюдению противоэпидемического режима в лабораториях диагностики ВИЧ-инфекции для врачей-лаборантов и эпидемиологов, курирующих ВИЧ-инфекцию

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) относится к третьей группе патогенности, однако, весь комплекс противоэпидемических и дезинфекционных мероприятий в лаборатории должен осуществляться согласно рекомендаций ВОВ, аналогично разработанному для подавления вируса гепатита В.#

Прием анализов

Принимает сыворотку (кровь) лаборант в специально отведенном для этих целей месте (комната, стол). Приемка осуществляется в обычном халате, обязательно в перчатках. Лаборант обращает внимание на:

- доставку сыворотки (крови) в пробирках или флаконах, обязательно закрытых резиновыми пробками;

- пробирки с сывороткой доставляются в специальных биксах, контейнерах (из под рентгеновской пленки);

- направление должно быть в трех экземплярах (под копирку) и иметь все необходимые данные: порядковый номер, номер регистрации, фамилия, имя, отчество, пол, возраст (до 1 года дата рождения), домашний адрес, место работы, учебы, ДДУ, гражданство (страна), диагноз, дата взятия крови, результата исследования, печать ЛПУ, его адрес, телефон, должность, фамилия (разборчиво), подпись лица, направившего материал на исследование.

При доставке крови необходимо добиваться, чтобы сыворотка на сгустке была не более 3 часов, в противном случае лизис и др. биохимические процессы приводят к разрушению антител и работа становится бессмысленной. Сыворотка может храниться в холодильнике при +40# до 7 суток с момента забора крови.

На направлении лаборант отмечает дату поступления материала на исследование и ставит свою подпись.

Перед тем, как вернуть контейнер (бикс) нарочному, лаборант обрабатывает контейнер дез. раствором (70° спирт, 6% перекись водорода, 3% р-р хлорамина). Для этих целей на столе, где осуществляется прием должна стоять емкость с тампонами с дезсредством.

Стол или лоток, на котором принимался материал для исследования, протирается одним из вышеуказанных дезсредств, поэтому поверхность стола должна быть покрыта или стеклом или химическиустойчивым# пластиком.

Регистрация направлений осуществляется на отдельном столе, при этом выполняется следующее правило: "Каждой сыворотке соответствует свой регистрационный номер". Номер проставляется против соответствующей фамилии в направлении и на пузырьке с исследуемой сывороткой.

Отбор сыворотки для исследования осуществляется в отдельной комнате или на специально отведенном столе. Лаборанты работают в полном наборе спецодежды: хирургические халаты, шапочки, кожная# обувь, резиновые перчатки, если нет защитных экранов или щитков, одевается маска и очки, так как при открывании пробки с флакона происходит разбрызгивание сыворотки в виде невидимого глазу аэрозоля.

Сыворотка от сгустка отделяется центрифугированием при 1,5-3 тыс. оборотах в минуту в течение 15 минут. Допустимо предварительное отстаивание забранных образцов крови в течение 1,5-2 часов при комнатной температуре или в течение 1 часа при 37°. Для лучшего отделения сыворотки рекомендуется обведение сформировавшегося сгустка крови стеклянной палочкой или пипеткой.

Отбор сыворотки осуществляется отдельным наконечником. Нельзя отбирать сыворотку переливая ее из пузырька в пузырек. Это приводит к бактериальному загрязнению исследуемого материала, увеличивает риск аварии.

Работа в боксе

Работа в боксе (серологической комнате) осуществляется в чистых хирургических халатах, косынке или шапочке, перчатках под защитой экранов или защитных щитков, при отсутствии которых используется 4-х слойная маска и защитные очки. На ноги одевают кожаные тапочки или бахилы.

Выходить из бокса в рабочей одежде строго воспрещается.

Перед входом в бокс должен быть резиновый коврик с ветошью, пропитанной 6% перкисью# водорода.

На рабочих столах должны быть маркированные емкости с дезраствором для сбрасывания наконечников, промежуточных плашек и отдельные емкости для сбрасывания наконечников и плашек, подлежащих обязательному уничтожению.

Использованные наконечники погружают в 6% раствор перекиси водорода на 2 часа. После 2-х часовой экспозиции наконечники переносятся в другую емкость с 70° спиртом на 2 часа. Те, кто имеет ультразвуковую ванну, могут использовать ее для обработки наконечников в течении# 5 минут. (Во время работы ультрозвукового# аппарата в помещении не должно никого быть).

После дезинфекции наконечники моются проточной водой не менее 20 минут, затем каждый наконечник промывается дистиллированной водой и подсушивается.

Наконечники, коснувшиеся положительного контроля, ортофенилен-диамина, рабочие плашки собираются на рабочих столах в отдельную емкость с дезраствором, затем переносятся в дезраствор (хлорамин 3%) на 18 часов и выбрасываются. Можно этот инструментарий собирать в полиэтиленовый пакет, а затем автоклавировать при 1,1 кгс/см2 при температуре 120°С в течении# 45 минут.

Обработка перчаток. При постановке реакции ИФА после каждой манипуляции (ракапывании сывороток, реактивов) перчатки протираются ветошью или тампоном, смоченным 70° спиртом.

В конце работы перчатки протираются ватным тампоном, смоченным 70° спиртом, осторожно снимаются (не выворачивая) и погружаются в 70° спирт или 6% перекись водорода на 2 часа в специально промаркированную для этих целей емкость. После дезинфекции перчатки моются проточной водой, высушиваются, обсыпаются тальком и могут быть использованы вторично.

Руки после снятия перчаток обрабатываются тампоном, смоченным 70° спиртом, затем тщательно моются с мылом.

Маски снимают и погружают в 70° спирт или 6% перекись водорода на 2 часа в специально промаркированную для этих целей емкость. После дезинфекции препаратор простирывает их с хозяйственным мылом или стиральным порошком, сушит, гладит, монтирует и стерилизует.

Вместо химической дезинфекции маски можно прокипятить.

Обувь. В боксе используются отдельные тапочки или после выхода из бокса они протираются тампоном, смоченным дезраствором (70° спирт, 6% перекись водорода).

Халаты. Смена спец. одежды должна осуществляться 1 раз в неделю. Боксовые хирургические халаты автоклавируются при 1,1 кгс/см при температуре 120°С в течение 45 минут или замачиваются в 3% растворе хлорамина в течение 60 минут. Емкость для замачивания халатов должна быть промаркирована. Лаборант указывает время начала экспозиции.

После дезинфекции халаты прополаскиваются в проточной воде, высушиваются и отдаются вместе с другим бельем в общую прачечную.

Все оборудование лаборатории (пипетки, "вошер", анализатор, термостат, холодильник и др.) в конце работы протираются тампоном, смоченным 70° спиртом или 6% растворам перекиси водорода.

Рабочие поверхности (стол, кювета) обильно орошаются 70° спиртом. Можно прожечь горящим факелом.

Полы в боксе моются с применением дезинфектантов (4% р-р перекиси водорода с 0,5% моющего средства). Хлорсодержашие# препараты использовать нельзя, так как пары хлора отрицательно влияют на ход иммуноферментного анализа (появляются ложноположительные результаты). В "незаразной" части лаборатории полы моют с применением водномыльных р-ов (2%). Уборочный инвентарь должен быть отдельным для бокса и другой части лаборатории и промаркирован.

После влажной уборки бокса проводится обеззараживание воздуха с помощью бактерицидных ламп в течение 60 минут. Ведется журнал учета работы бактерицидных ламп. 

Работа в моечной

При работе по приготовлению дезрастворов санитарка в обязательном порядке одевает маску или респиратор, клеенчатый фартук, перчатки. На емкостях с дезраствором обозначают название, концентрацию, назначение, дату приготовления. Дезинфицирующие растворы готовят ежедневно (перекись водорода, спирт) или впрок на 6 дней (хлорная известь), 2 недели (хлорамин). Использованные дезрастворы заменяют ежедневно.

Обработка сгустков крови предусматривает их обеззараживание сухой хлорной известью в соотношении 1:5. Для того, чтобы это выполнить, необходимо вытряхнуть сгустки из пробирок, а это влечет к разбрызгиванию потенциально инфицированного материала, поэтому при выполнении этой процедуры необходимо одевать маски или респираторы, защитные очки или экраны, резиновые фартуки и перчатки.

Лучше пробирки со сгустком крови замочить в 5% р-ре хлорамина в течение 2-х часов. Можно использовать 10% р-р хлорной извести.

Пробирки или пенициллиновые пузырьки, предназначенные для повторного использования после дезинфекции в любом из вышеуказанных дезинфектантов (70° спирт, 6% р-р перекиси водорода, 3% р-р хлорамина) промываются проточной водой, затем дистиллированной и стерилизуются в сухожаровом шкафу согласно ОСТа. Ведется журнал работы сухожарового шкафа. В каждую партию посуды вкладываются тесты, подтверждающие наличие нужной температуры.

Если при дезинфекции посуды применяются хлорсодержащие препараты, то она должна подвергаться дополнительному кипячению для разрушения дезинфектантов.

Постановка иммуноферментного анализа

Весь ход исследований должен осуществляться строго по инструкции тест-системы, с которой работает специалист. Необходимо выдерживать весь временной и температурный режим, указанный в наставлении.

На протоколе исследования необходимо указывать наименование используемой тест-системы, серию, роспись работника, проводившего анализ. Тут же должен указываться контрольный уровень или оптическая плотность "критической точки", высчитываемой по формуле, указанной в наставлении к тест-системе.

Результаты ИФА учитываются только при показателях оптической плотности положительных контролей не ниже 0,7.

Сыворотка, расценная# как положительная, должна переставиться в тест-системе того же наименования на следующий день. Поэтому сыворотки до получения результатов выбрасывать нельзя. Если при перестановке в двух лунках, хотя бы в одной, получен положительный результат, проводится повторное взятие крови и ее иследование# в ИФА в системе того же наименования и серии. При положительном результате обе сыворотки (от первого и повторного взятия) направляются в кратчайшие сроки для подтверждения в референс-лабораторию. Если нет возможности быстро взять вторую порцию крови (в течение 2-3 дней), то на экспертизу необходимо отправить только первую порцию.

Все данные по исследованию этой сыворотки выносятся в отдельный журнал, здесь же отмечается дата отправки сыворотки на исследование в референс-лабораторию, указывается дата полученного ответа и его результат.

Результаты исследования врач-лаборант проставляет на копии направления (ставится штамп: "Антител к ВИЧ не обнаружено") и подписывается. Первые экземпляры направлений подшиваются и хранятся год. Рабочая документация лаборатории (протоколы опытов, журналы регистрации и др.) хранятся 3 года.

При поступлении на работу в лабораторию диагностики СПИД зав. лабораторией проводит инструктаж по технике безопасности и соблюдению дезрежима. Ведется журнал по технике безопасности, где ставится роспись лица, проводившего инструктаж и# слушателей.

Последующие занятия по соблюдению техники безопасности и дезрежима проводятся через полгода.

В лаборатории на случай аварии должен храниться запас дезинфицирующего средства в достаточном объеме.

Необходима медицинская аптечка, в которую входят 70° спирт, йод, навески марганцевокислого калия и соответсвующее# количество дистиллированной воды для разведения 1:10000, перевязочный материал.

Сотрудники лаборатории при поступлении на работу и далее два раза в год должны пройти обследование на наличие антител к ВИЧ и HBs Ад. Результаты обследования заносятся в специальный журнал или личные медицинские книжки. Недопустимо участие сотрудников лаборатории в донорстве.

В лаборатории ведется журнал поступления и расхода тест-систем. Тест-системы хранятся в холодильнике. Должен вестись журнал соблюдения температурного режима холодильных установок.

Ведется журнал расхода спирта.

Данные рекомендаций# подготовлены Нижнегородским региональным центром по профилактике и борьбе со СПИД и при этом использовались следующие нормативные документы и информационные материалы:

1. Временные инструктивно-методические указания "Организация мероприятий по профилактике и борьбе со СПИД в РСФСР", Минздрава РСФСР от 22.08.90 г.;

2. Инструкция по противоэпидемическому режиму в лабораториях диагностики СПИД. Минздрава СССР N 42-28/38-90 от 05.06.90 г.;

3. Приказ Минздрава СССР N 408 от 12.07.89 г. "О мерах по снижению заболеваемости вирусными гепатитами в стране";

4. Инструкция Минздрава СССР "О противоэпидемическом режиме работы с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность возбудителями инфекционных заболеваний I-II групп", Саратов 1979;

5. Руководство по биологической безопасности в лабораторных условиях ВОЗ, Женева, 1985;

6. Информационный лист N 4 от 22.10.91 Всесоюзного центра по профилактике и борьбе со СПИД. "Меры профилактики ВИЧ-инфекции в учреждениях здравоохранения",#

7. "Положение о порядке учета, хранения, транспортировки, отпуска, обращения и пересылки культур бактерий, вирусов, риккетсий, грибов и пр.", утвержденное 18.05.79 г. гл. гос. сан. врачом Бургасовым П.Н.