Информация Министерства здравоохранения РФ от 24 сентября 2013 г. "Общие фармакопейные статьи и фармакопейные статьи на иммунобиологические лекарственные средства и методы оценки их качества"

Информация Министерства здравоохранения РФ от 24 сентября 2013 г.
"Общие фармакопейные статьи и фармакопейные статьи на иммунобиологические лекарственные средства и методы оценки их качества"

Дополнение к ОФС 42-0090-11 "Комплексонометрическое титрование"
Определение ионов алюминия в сорбированных иммунобиологических препаратах

Метод предназначен для определения ионов алюминия комплексонометрическим методом в сорбированных иммунобиологических лекарственных средствах (ИБЛС). Метод основан на реакции комплексообразования ионов алюминия с динатриевой солью кислоты этилендиаминтетрауксусной (трилон Б) и последующем обратном титровании избытка трилона Б.

Метод рекомендован для количественного определения алюминия гидроксида в сорбированных препаратах.

Комплексонометрическое титрование

В колбу из термостойкого стекла вместимостью 100 мл вносят исследуемый образец, прибавляют 2 мл 10% раствора кислоты серной и перемешивают.

При анализе сухого препарата (например, секстаанатоксина) делают разведение в соответствии с инструкцией к лекарственному средству. На анализ отбирают испытуемый раствор и прибавляют 4-5 мл 5% раствора серной кислоты (уменьшают концентрацию кислоты во избежание обугливания наполнителя).

Содержимое колбы доводят до слабого кипения. Во избежании выпаривания жидкости после закипания в колбу вносят 2 - 5 раз 5 мл воды очищенной, перемешивают и продолжают нагревать до полного растворения осадка. Прозрачный раствор охлаждают до температуры 10-20 °С, прибавляют 10 мл ацетатного буферного раствора, 10 мл точно отмеренного 0,01 М раствора трилона Б, перемешивают и нагревают до кипения. После охлаждения раствора до комнатной температуры прибавляют 25 мл этилового спирта, 1 мл раствора дитизона и перемешивают. Избыток трилона Б титруют 0,01 М раствором цинка сульфата до перехода окраски от зеленой к красной.

В аналогичных условиях проводят анализ контрольной пробы, содержащей 1 или 2 мл очищенной воды и все вышеперечисленные реактивы. Содержание алюминия в миллиграммах на 1 мл (Х) вычисляют по формуле:

;

- поправочный коэффициент к титру 0,01 М раствора цинка сульфата.

V - количество 0,01 М раствора цинка сульфата, пошедшее на титрование контрольной пробы, в миллилитрах;

- количество 0,01 М раствора цинка сульфата, пошедшее на титрование испытуемого образца, в миллилитрах;

- количество образца, взятое на анализ, в миллилитрах;

0,2698 - количество алюминия в миллиграммах, соответствующее 1 мл 0,01 М раствора трилона Б.

Примечания

Испытуемый образец. 2 мл содержащего 0,5-1,0 мг/мл алюминия или 1 мл образца, содержащего 1-2 мг/мл, если в частной фармакопейной статье нет других указаний.

При испытании сухого испытуемого образца (например, секстаанатоксина) делают разведение в соответствии с инструкцией использования лекарственного средства. На анализ отбирают 1 мл испытуемого раствора если нет других указаний в частной фармакопейной статье.

* При содержании алюминия в пробе выше 1 мг/мл объем прибавляемых реактивов (трилон Б и ацетатный буферный раствор) увеличивают в 2 раза.

** Объем прибавляемого этилового спирта должен составлять не менее половины конечного объема реакционной смеси.

*** Поправочный коэффициент к 0,01 М раствору сульфата цинка рассчитывают по формуле:

, где:

10 - количество 0,01 М раствора сульфата цинка, взятое на титрование контрольного раствора, в мл;

- количество 0,01 М раствора сульфата цинка, пошедшее на титрование контрольного раствора, в мл.

Аммиачный буферный раствор (рН 9,5 - 10,0). 20 г аммония хлорида растворяют в 200 - 300 мл воды очищенной в мерной колбе вместимостью 1000 мл, прибавляют 100 мл концентрированного раствора аммиака, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят в таре из темного стекла с герметичной крышкой при комнатной температуре в течение 3 мес в специально отведенном месте.

Приготовление ацетатного буферного раствора рН 4,5-5,0. В мерный цилиндр вместимостью 1000 мл помещают 77 г аммония ацетата, прибавляют 60 мл ледяной уксусной кислоты и растворяют в 800 мл воды. Объем раствора доводят водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при комнатной температуре в течение 3 мес.

Приготовление раствора дитизона. 25 мг дитизона растворяют в 100 мл ацетона, перемешивают и хранят при температуре 4 - 8 °С в течение 1 мес.

Приготовление 0,01 М раствора трилона Б (динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты). Раствор готовят из фиксанала или взвешивают 3,7225 г (точная навеска) трилона Б и растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 мл в 500 мл воды очищенной, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают.

Титр раствора трилона Б устанавливают по 0,01 М раствору магния сульфата. К 20 мл точно отмеренного 0,01 М раствора магния сульфата прибавляют 5 мл аммиачного буферного раствора, около 0,2 г индикаторной смеси, 80 мл воды очищенной, перемешивают и титруют раствором трилона Б. Рассчитывают поправочный коэффициент аналогично расчету поправочного коэффициента к 0,01 М раствору сульфата цинка. Раствор хранят при комнатной температуре в течение 1 мес.

Приготовление 0,01 М раствора магния сульфата. 0,05 М раствор магния сульфата готовят из 0,05Н стандарт - титра (фиксанала) в мерной колбе вместимостью 1000 мл согласно инструкции по приготовлению. В мерную колбу вместимостью 200 мл наливают приготовленный раствор до метки, затем содержимое колбы переливают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при комнатной температуре в течение 1 мес.

Приготовление индикаторной смеси. 0,25 г индикатора эриохрома черного Т растирают в фарфоровой ступке с 25 г натрия хлорида и перемешивают. Раствор хранят при комнатной температуре в течение 1 мес.

Приготовление 0,01 М раствора цинка сульфата. 0,01 М раствор цинка сульфата готовят из фиксанала. Раствор хранят при 20 - 25°С в течение 1 мес. При отсутствии фиксанала готовят одним из способов:

а) 2,8755 г (точная навеска) цинка сульфата растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

б) 0,6538 г (точная навеска) металлического цинка растворяют в 40 мл 50% раствора серной кислоты в мерной колбе вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при комнатной температуре в течение 1 мес.

Титр раствора устанавливают по титрованному раствору трилона Б.

К 20 мл (точно отмеренному) 0,01 М раствору трилона Б прибавляют 10 мл ацетатного буферного раствора, 25 мл этилового спирта и 1 мл раствора дитизона, перемешивают и титруют 0,01 М раствором цинка сульфата. Рассчитывают поправочный коэффициент.

Дополнение к ОФС 42-0088-11
"Спектрофотометрическое определение фосфора"

Метод предназначен для определения фосфора спектрофотометрическим методом в иммунобиологических лекарственных средствах (ИБЛС). Метод основан на способности неорганического фосфора в кислой среде образовывать с молибденовой кислотой фосфорномолибденовую кислоту, которая в присутствии аскорбиновой кислоты дает цветную реакции. Определение проводится спектрофотометрическим методом. Содержание фосфора определяется по результатам измерения оптической плотности растворов при 825 нм в видимой области спектра по калибровочному графику.

Спектрофотометрический метод

Определение фосфора с содержанием 1,2 - 2,4 мкг/мл

В термостойкую пробирку 250 х 20 мм вносят 0,2 мл испытуемого образца, прибавляют 0,15 мл реактива для минерализации, закрывают стеклянным колпачком и минерализуют на песочной бане при температуре 180°С до образования темно-коричневой жидкости. Минерализацию продолжают при температуре 250°С до обесцвечивания содержимого пробирки не менее 10 ч. Одновременно в аналогичных условиях минерализуют контрольный образец, содержащий 0,2 мл растворителя и 0,15 мл реактива для минерализации.

Объем минерализата и контрольного образца доводят водой очищенной до 2 мл, перемешивают, прибавляют 2 мл цветного реактива и вновь перемешивают. Растворы помещают в водяную баню и выдерживают 2 часа при температуре 37°С. Измеряют оптическую плотность испытуемых растворов при 825 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором, содержащим 0,15 мл реактива для минерализации, 1,85 мл воды и 2 мл цветного реактива.

Содержание фосфора в 0,5 мл исследуемого образца в микрограммах (Х) вычисляют по формуле:

, где

А - количество фосфора, найденное по калибровочному графику, в мкг/мл,

В - количество исследуемого образца, взятое на анализ, в миллилитрах.

Построение калибровочного графика. К 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1 мл рабочего раствора калия дигидрофосфата (концентрация фосфора: 0,2; 0,4; 0,8; 1,2; 1,6; 2 мкг/мл) прибавляют воду очищенную до 1,95 мл, 0,05 мл реактива для минерализации и 2 мл свежеприготовленного цветного реактива и выдерживают в водяной бане 2 часа при температуре 37°С. Измеряют оптическую плотность калибровочных растворов как описано выше по сравнению с контрольным раствором, содержащим 1,95 мл воды очищенной, 0,05 мл реактива для минерализации и 2 мл цветного реактива. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс количество мкг фосфора, а по оси ординат - среднее значение показателя оптической плотности при 825 нм.

Калибровочный график воспроизводят при каждом анализе.

Примечания

Приготовление испытуемого раствора. Содержимое каждого флакона (ампулы) растворяют в 0,5 мл растворителя (вода очищенная).

Приготовление основной раствор калия дигидрофосфата (80 мкг фосфора в 1 мл). 0,3509 г (точная навеска) калия дигидрофосфата доведенного до постоянной массы в эксикаторе над безводным кальция хлоридом, помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, прибавляют 500 мл воды, 10 мл 5 М раствора серной кислоты, доводят объем раствора до метки и перемешивают. Основной раствор калия дигидрофосфата хранят при температуре 18 - 25°С в течение 18 мес.

Приготовление рабочего раствора калия дигидрофосфата (2 мкг фосфора в 1 мл). 1,25 мл основного раствора калия дигидрофосфата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора до метки и перемешивают. Рабочий раствор калия дигидрофосфата хранят при температуре 2 - 8°С в течение 6 мес.

Приготовление реактива для минерализации. Смешивают в равных объемах концентрированную серную кислоту и 65 - 70% хлорную кислоту. Раствор хранят в вытяжном шкафу при температуре 18 - 25°С в течение 18 мес.

Приготовление 5 М раствора серной кислоты. В мерную колбу вместимостью 1000 мл приливают 600-700 мл воды, осторожно при перемешивании добавляют 279,0 мл концентрированной серной кислоты, доводят объем водой до метки и перемешивают. Раствор хранят в вытяжном шкафу при температуре 18 - 25°С в течение 12 мес.

Приготовление 1,5 М раствора серной кислоты. В мерную колбу, вместимостью 1000 мл, помещают 500 мл воды, осторожно при помешивании несколькими порциями приливают 83,5 мл концентрированной серной кислоты, доводят объем раствора до метки, охлаждают и перемешивают. Раствор хранят в вытяжном шкафу при температуре 18 - 25°С в течение 12 мес.

Приготовление 2,5% раствора аммония молибдата. 25 г аммония молибдата растворяют при перемешивании в 700 мл кипящей воде очищенной в конической колбе или химическом стакане вместимостью 1000 мл и выдерживают в водяной бане 2 часа при температуре 37°С . Раствор оставляют при температуре 18-22°С на сутки, затем количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят объём раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор фильтруют через два слоя фильтровальной бумаги и хранят в склянке из тёмного стекла с притёртой пробкой при температуре 4 - 8°С в течение 1 мес.

Приготовление 10% раствора аскорбиновой кислоты. В мерном цилиндре вместимостью 20 мл растворяют 2 г аскорбиновой кислоты в воде очищенной, полученной в процессе дистилляции, доводят объём раствора до метки и перемешивают. Раствор готовят в день проведения анализа.

Приготовление цветного реактива. Смешивают реактивы в следующем порядке: два объема воды очищенной, один объем 1,5 М раствора серной кислоты, один объем 2,5% раствора аммония молибдата и один объем 10% раствора аскорбиновой кислоты. Все реактивы прибавляют при помешивании. Цветной реактив готовят перед проведением анализа.

Государственный стандарт качества лекарственного средства
"Определение потери в массе при высушивании"

Вводится взамен метода,
изложенного в ФС 42-3874-99

Определение потери в массе при высушивании проводят в иммунобиологических лекарственных средствах (ИБЛС) различных лекарственных форм (таблетки, порошки, гранулы, суппозитории, капсулы, лиофилизаты). В результате высушивания вещества до постоянной массы в условиях вакуума при определенном остаточном давлении и температуре определяют потерю в массе испытуемого образца. Определение проводят гравиметрическим (весовым) методом.

Гравиметрический метод

Стеклянные бюксы со шлифами высотой 35 мм и диаметром 25 мм высушивают до постоянной массы в сушильном шкафу с открытыми притертыми крышками при температуре 100-105°С не менее 3 часов. Затем бюксы закрывают крышками, переносят в эксикатор с кальция хлоридом безводным и охлаждают до комнатной температуры в течение 1 ч. После охлаждения бюксы закрывают крышками и взвешивают с точностью до четвертого знака.

В бюкс, доведенный до постоянной массы, помещают 0,15-0,20 г исследуемого образца, закрывают крышкой и взвешивают с точностью до четвертого знака, а затем помещают в вакуум-сушильный шкаф, крышку бюкса приоткрывают. Высушивание проводят в течение 3 ч при температуре °С и остаточном давлении, не превышающем 0,667 кПа (5 мм рт.ст.).

Через 3 часа бюксы вынимают из вакуум-сушильного шкафа, закрывают крышками и помещают в эксикатор для охлаждения до комнатной температуры в присутствии кальция хлорида безводного в течение 30-40 мин. После охлаждения бюксы с крышками взвешивают с точностью до четвертого знака.

Потерю в массе при высушивании (Х) в процентах рассчитывают по разности масс бюксов с испытуемым образцом до и после высушивания по формуле:

, где

- масса бюкса, доведенного до постоянной массы, г;

- масса бюкса с испытуемым образцом до высушивания, г;

- масса бюкса с испытуемым образцом после высушивания, г.

Нормы потери в массе при высушивании испытуемых иммунобиологических лекарственных средств указывают в частных фармакопейных статьях.

Если в частных фармакопейных статьях приведена другая масса навески и предусмотрен иной режим высушивания, то определение проводят в соответствии с условиями, указанными в частной фармакопейной статье.

Примечания

1. Подготовку испытуемых образцов проводят в помещении с относительной влажности воздуха от 40 до 80% и температуре от 20 до 25°С.

2. Анализ испытуемого образца проводят в 2-х параллельных определениях.