Межгосударственный стандарт ГОСТ 7702.2.6-93 "Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы выявления и определения количества сульфитредуцирующих клостридий" (введен в действие постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 2 июня 1994 г. N 160) (утратил силу)

Межгосударственный стандарт ГОСТ 7702.2.6-93
"Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы выявления и определения количества сульфитредуцирующих клостридий"
(введен в действие постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 2 июня 1994 г. N 160)

Poultry meat, edible offal, ready-to-cook products. Methods for detection and quantity determination of sulfit-reducing anaerobes

Дата введения - 1 января 1995 г.

Взамен ГОСТ 7702.2-74
в части методов определения анаэробов
(CI. botulinum, С1.

perfringens)

ГАРАНТ:

Приказом Росстандарта от 21 августа 2015 г. N 1182-ст взамен настоящего ГОСТа с 1 июля 2016 г. введен в действие ГОСТ 7702.2.6-2015 для добровольного применения в РФ

Настоящий стандарт распространяется на предназначенные для реализации и промышленной переработки:

мясо птицы в виде потрошеных, полупотрошеных и потрошеных с комплектом потрохов и шеей тушек, частей, полученных при их разделке, а также обваленное и измельченное;

субпродукты и полуфабрикаты птичьи.

Стандарт устанавливает методы выявления и определения количества сульфитредуцирующих клостридий.

Методы основаны на высеве определенного количества продукта или смывов с него, их разведении в питательные среды, подтверждении принадлежности выросших микроорганизмов к сульфитредуцирующим клостридиям, определении их количества в 1 г продукта или в 1  смыва.

1 Методы отбора проб и подготовка к исследованиям - по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0

2 Проведение исследования

2.1 Выявление вегетативных клеток сульфитредуцирующих клостридий включает в себя два этапа:

обнаружение сульфитредуцирующей способности микроорганизмов;

определение принадлежности выделенных микроорганизмов к клостридиям.

В зависимости от последовательности этапов используют один из двух методов проведения исследования.

2.1.1 При первом методе исследования сначала определяют сульфитредуцирующую способность микроорганизмов. Для этого 1 г () исходного материала или его разведения, приготовленного по ГОСТ 26669, высевают в чашки Петри глубинным способом по ГОСТ 26670, с заливкой одной из агаризованных сред по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.36, 2.4.37 или в стерильные пробирки с заливкой посевного материала одной из названных сред столбиком 10 - 12 см. Посевы помещают в анаэростат и инкубируют. При отсутствии анаэростата на поверхность затвердевшей среды в чашки или пробирки наливают слой не менее 0,2 см голодного агара, приготовленного по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0.2.3.4. После его затвердения посевы инкубируют при температуре (371)°С в течение 24 - 72 ч.

2.1.2 Темно-серые или черные колонии, вызвавшие потемнение среды, испытывают на принадлежность к клостридиям. Из каждой колонии (не менее 5) пересевают культуру в пробирки со средой Китт-Тароцци по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.38, инкубируют при температуре (371)°С в течение 24 - 72 ч. При появлении признаков роста (помутнение среды, выделение газа, появление постороннего запаха) проводят микроскопирование с окрашиванием мазков по Граму и окрашивание для выявления спор по ГОСТ 30425, определение каталазной активности. При этом культуру для мазков и исследований отбирают со дна пробирки.

2.1.3 Сульфитредуцирующие клостридии представляют собой грамположительные палочки, располагающиеся в одиночку, попарно, в виде цепочек или скопления параллельных клеток. При спорообразовании споры сульфитредуцирующих клостридий овальные или сферические, центральные, субтерминальные или терминальные.

2.1.4 Для определения каталазной активности на предметном стекле в каплю культуральной жидкости добавляют каплю перекиси водорода массовой концентрации 30 . Выделение пузырьков газа свидетельствует о каталазной активности.

Сульфитредуцирующие клостридии каталазы не образуют.

2.1.5 Для подтверждения анаэробного роста культуру из среды Китт-Тароцци пересевают в стерильные чашки Петри глубинным способом по ГОСТ 26670 с заливкой одной из агаризованных сред, приготовленных по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.1 - 2.4.5. Затвердевшую среду накрывают стерильным предметным стеклом, чашки переворачивают, посевы инкубируют при температуре (371)°С в течение 24 - 48 ч. Появление колоний в глубине агара на 2 - 3 мм от края стекла свидетельствует о принадлежности микроорганизмов к клостридиям.

2.1.6 При втором методе исследования сначала исследуемый материал высевают в среду Китт-Тароцци, инкубируют, проводят микроскопирование, определение каталазы, пересев под стекло, как указано в 2.1.2 - 2.1.5. Установив принадлежность микроорганизмов к клостридиям, проводят пересев на железосульфитсодержащие среды. Определяют сульфитредуцирующую способность выделенных клостридий по 2.1.1.

2.1.7 Выделение спор сульфитредуцирующих клостридий проводят после прогревания исследуемого материала. Пробирки с исследуемой навеской продукта или смывов и (или) их разведений помещают в водяную баню температурой (501)°С. Воду в бане греют до достижения внутри продукта или смыва температуры (801)°С, которую определяют в контрольной параллельной пробирке со средой без посева. Прогрев проводят (201) мин. Затем пробирки с исследуемым материалом охлаждают водопроводной водой. Далее исследование проводят по 2.1.1 - 2.1.6.

2.2 При определении количества сульфитредуцирующих клостридии используют метод посева в железосульфитсодержащие агаризованные среды или в жидкие среды по методу НВЧ.

2.2.1 При определении количества сульфитредуцирующих клостридий методом посева в агаризованные среды по 1  разведений продукта или смыва вносят в две чашки Петри. Посевы заливают одной из железосульфитсодержащих агаризованных сред. Проводят инкубирование в анаэробных условиях по 2.1.1 с последующим подсчетом и подтверждением принадлежности выросших колоний к сульфитредуцирующим клостридиям по 2.1.2 - 2.1.5.

2.2.2 При определении количества сульфитредуцирующих клостридий по методу НВЧ высевают три последовательных 10-кратных разведения в регенерированную среду Кит-Тароцци. Каждое разведение в трехкратной повторности, соотношение высеваемого материала к питательной среде 1:9. Инкубирование посевов и подтверждение принадлежности выделенной культуры к сульфитредуцирующим клостридиям проводят по 2.1.6.

3 Обработка результатов

3.1 Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.

3.2 При подтверждении принадлежности выделенных микроорганизмов к клостиридиям с сульфитредуцирующими свойствами дают заключение.

3.3 Результаты выявления сульфитредуцирующих клостиридий в исследуемой пробе записывают: сульфитредуцирующие клостридии обнаружены или не обнаружены, при этом указывается масса продукта в граммах или объем смывной жидкости в кубических сантиметрах, или поверхность в квадратных сантиметрах.

3.4 При определении количества сульфитредуцирующих клостридий при посеве на агаризованные среды проводят подсчет по ГОСТ 7702.2.1/ГОСТ Р 50396.0, 3.2.2, при определении количества по методу НВЧ подсчет проводят по ГОСТ 30425.

Результаты количественного определения сульфитредуцирующих клостридий записывают по ГОСТ 7702.2.1/ГОСТ Р 50396.0, 3.3.