Методические указания МУК 4.1.1967-05 "Определение остаточных количеств крезоксим-метила в огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)

Методические указания МУК 4.1.1967-05
"Определение остаточных количеств крезоксим-метила в огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)

Дата введения: 1 июля 2005 г.
Введены впервые

2. Методика определения остаточных количеств крезоксим-метила в огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на газохроматографическом определении крезоксим-метила на неподвижной фазе OV-17 с использованием электронозахватного детектора (ЭЗД) после экстракции препарата из сока гексаном, из растительного материала водным ацетоном, предварительной очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и окончательной очистки экстрактов на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании огурцов, томатов и винограда.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Таблица

Метрологические параметры метода

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
	предел обнаружения, мг/дм3, мг/кг	диапазон определяемых концентраций, мг/дм3, мг/кг	среднее значение определения, %	стандартное отклонение S, %	относительное отклонение DS, %	доверительный интервал среднего, %
Огурцы	0,1	0,1-1,0	91,8	2,3	1,0	+-2,1
Томаты	0,1	0.1-1,0	90,7	2,3	1,0	+-2,1
Виноград	0,1	0,1-1,0	90,0	3,3	1,5	+-3,1
Сок	0,1	0,1-1,0	92,4	2,8	1,2	+-2,6

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Крезоксим-метил, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,9% (БАСФ, Германия)
Ацетон, чда	ГОСТ 2603-79
Вода дистиллированная	ГОСТ 7602-72
Гексан, ч	ТУ 6-09-3375-78
Дихлорметан	ГОСТ 12794-80
Калий углекислый, хч	ГОСТ 4221-76
Калия перманганат, хч	ГОСТ 20490-75
Кальция хлорид, хч	ГОСТ 4161-77
Натрия гидроксид, хч	ГОСТ 4328-77
Натрия сульфат безводный, хч	ГОСТ 4166-76
Натрий двууглекислый, хч	ГОСТ 83-79
Натрия хлорид, хч	ГОСТ 4233-77
Этилацетат	ГОСТ 22300-76
Элюент N 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан-этилацетат (9:1, по объему)
Элюент N 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан-этилацетат (8:2, по объему)
Азот газообразный, осч	ГОСТ 0203-74
Силикагель (0,063-0,2 мм) для адсорбционной хроматографии (Вельм, Германия) I степени активности или силикагель КСК (60-100 меш)
Стекловата
Целит 535 (2-15 мкм) /Серва, Германия/ или аналогичный
Фильтры бумажные, синяя лента	ТУ 6-09-1678

2.3 Приборы, аппаратура, посуда

Хроматограф газовый "Кристалл 2000 М" с электронозахватным детектором с пределом детектирования по линдану не выше 3,18 x 10(-14) г/с или аналогичный
Колонка хроматографическая, набивная, стеклянная, 1500 х 2 мм, неподвижная фаза - 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12-0,15 мм)
Колонка хроматографическая, набивная, стеклянная, 2000 х 2 мм, неподвижная фаза - 5% SE-30 на Инертоне N-AW-DMCS (0,16-0,20 мм)
Колонка капиллярная для ГЖХ ZB-1, длина 30 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма Phenomenex, США или аналогичная
Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10Ф	ТУ 64-1-2850
Весы аналитические типа ВЛР-200	ГОСТ 19401-74
Водоструйный насос	ГОСТ 10696-75
Гомогенизатор или аналогичный	МРТУ 42-1505-63
Прибор для перегонки при атмосферном давлении
Ротационный испаритель тип ИР-1М	ТУ 25-11-917-76
Баня водяная	ТУ 46-22-603-75
Воронка Бюхнера	ГОСТ 0147-73
Воронки делительные, вместимостью 100 мл	ГОСТ 25336-82
Воронки для фильтрования, стеклянные	ГОСТ 8613-75
Колба Бунзена	ГОСТ 5614-75
Колбы круглодонные на шлифе, вместимостью 10 и 100 мл	ГОСТ 9737-70

ГАРАНТ:

Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации 21 октября 1993 г. взамен ГОСТ 9737-70 с 1 января 1995 г. принят ГОСТ 9737-93

Колбы мерные, вместимостью 25, 50 и 100 мл	ГОСТ 1770-74
Пипетки мерные, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл	ГОСТ 20292-74Е
Пробирки градуированные с притертыми пробками, вместимостью 5 и 10 мл	ГОСТ 10515-75
Стаканы стеклянные емкостью 400 мл	ГОСТ 6236-72
Цилиндры мерные, вместимостью 50, 100 и 250 мл	ГОСТ 1770-74

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (от 21.08.79 N 2051-79). Отобранные пробы огурцов, томатов и винограда хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более двух дней; при длительном хранении (не более трех месяцев) пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18°С. Перед анализом ягоды и плоды измельчают.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2,5%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г и 2 г ).

Этилацетат промывают равным объемом 5%-го раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130°С в течение 3 ч.

2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (3% OV-17 на Хромосорбе W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 270°С в течение 8-10 ч.

2.5.3. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор крезоксим-метила с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,9% д.в., в этилацетате в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.

Рабочие растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора крезоксим-метила соответствующим последовательным разбавлением этилацетатом. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более трех дней.

При изучении полноты открывания крезоксим-метила в модельных матрицах используются ацетоновые растворы вещества.

2.5.4. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора крезоксим-метила с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ x с от концентрации крезоксим-метила в растворе в мкг/мл.

2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,2 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 10 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 25 мл смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) и 20 мл гексана со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения крезоксим-метила на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 1 мл стандартного раствора крезоксим-метила с концентрацией 1 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл смеси гексан-этилацетат (95:5, по объему) и наносят на колонку. Промывают колонку 40 мл смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) и затем 50 мл смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему) со скоростью 1-2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл этилацетата и анализируют на содержание крезоксим-метила по п. 2.7.1.

Фракции, содержащие крезоксим-метил, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл этилацетата и вновь анализируют по п. 2.7.1. Рассчитывают содержание крезоксим-метила в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.

Примечание: профиль вымывания крезоксим-метила может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.6. Описание определения

2.6.1. Экстракция крезоксим-метила и очистка экстракта

2.6.1.1. Огурцы, томаты, виноград. К навеске (25 г) измельченного материала добавляют 100 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему), гомогенизируют 3 минуты при 10 000 об/мин. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему). Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 30 мл), эквивалентную 5 г растительного материала, и упаривают ее до водной фазы на роторном вакуумном испарителе при температуре 40°С. Водный остаток переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 10 мл насыщенного раствора хлорида натрия и 20 мл гексана. Смесь встряхивают в течение 1 мин и после ее расслоения отделяют гексановый слой, который пропускают через стеклянный фильтр, заполненный безводным сульфатом натрия, в грушевидную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию водной фракции гексаном повторяют еще два раза (по 20 мл). Объединенный гексановый экстракт, содержащий крезоксим-метил, выпаривают на роторном испарителе досуха при температуре 30°С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.3.

2.6.1.2. Виноградный сок. К 10 мл свежевыжатого сока добавляют 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия и содержимое переносят в делительную воронку емкостью 100 мл. В воронку добавляют 20 мл гексана и смесь встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев собирают органическую фракцию, а водную фазу обрабатывают гексаном еще два раза (по 20 мл). Объединенный гексановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.3.

ГАРАНТ:

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем

Остаток в колбе, полученный при упаривании экстрактов растительного материала (из п. 2.6.1.1 и 2.6.1.2), количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан-этилацетат (95:5, по объему) в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 30 мл смеси гексан-этилацетат (9:1), которые отбрасывают. Крезоксим-метил элюируют 35 мл смеси гексан-этилацетат (8:2), собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С. Сухой остаток экстракта сока растворяют в 10 мл, а экстрактов огурцов, томатов и винограда в 5 мл этилацетата и анализируют на содержание крезоксим-метила по п. 2.7.1.

2.7. Условия хроматографирования

2.7.1. Метод ГЖХ с насадочными колонками

Хроматограф газовый "Кристалл - 2000 М" с электронозахватным детектором с пределом детектирования по линдану не выше г/.

Колонка хроматографическая, набивная, стеклянная, 1 500 х 3 мм; неподвижная фаза - 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12-0,15 мм).

Температура детектора 300°С, инжектора 270°С, термостата колонки 240°С.

Скорость потока газа-носителя (азота) - 30 мл/мин; поддув - 25 мл/мин.

Объем вводимой пробы - 2 мкл.

Время удерживания крезоксим-метила - 3 мин 10 с.

Предел детектирования - 0,1 нг.

Линейный диапазон детектирования - 0,1-1,0 нг.

Альтернативная неподвижная фаза: 5% SE-30 на Инертоне N-AW DMCS (0,16-0,20 мм); колонка стеклянная 2 000 х 2 мм; условия хроматографирования те же.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика крезоксим-метила.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.7.2. Метод ГЖХ с капиллярными колонками

Хроматограф газовый "Кристалл 2000 М" с электронозахватным детектором.

Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм (SE-30).

Температура термостата испарителя - 250°С, детектора - 300°С, термостата колонки в программируемом режиме: 120°С - 1 мин; 20°/мин до 250°С; выдержка - 5 мин.

Газовый режим: газ-носитель - азот, общий расход - 33 мл/мин; газ для поддува в детектор - азот, расход - 30 мл/мин.

Деление потока: 1:5.

Абсолютное время удерживания крезоксим-метила: 9 мин 34 с.

Объем вводимой пробы - 2 мкл.

Линейный диапазон детектирования: 0,02-0,5 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика крезоксим-метила.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,2 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание крезоксим-метила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

, где

Х - содержание крезоксим-метила в пробе, мг/кг или мг/дм3;

- площадь пика образца, мВ x с;

- площадь пика стандарта, мВ x с;

А - концентрация стандартного раствора крезоксим-метила, мкг/мл;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

m - объем (мл) или масса (г) анализируемой части образца (для сока 10 мл; для плодов и ягод - 5 г).

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

ГАРАНТ:

Взамен МИ 2335-95 Госстандартом России введена в действие с 1 октября 2003 г. рекомендация МИ 2335-2003

5. Разработчики

Дубовая Л.В., Талалакина Т.Н., Макеев А.М.

ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко