Методические указания МУК 4.1.1972-05 "Определение остаточных количеств метрибузина в воде, почве, томатах и картофеле методом газожидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)

Методические указания МУК 4.1.1972-05
"Определение остаточных количеств метрибузина в воде, почве, томатах и картофеле методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)

Дата введения: 1 июля 2005 г.
Введены впервые

2. Методика определения остаточных количеств метрибузина в воде, почве, томатах и картофеле методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на газохроматографическом определении метрибузина на неподвижной фазе OV-17 с использованием термоионного детектора (ТИД) после экстракции его из воды дихлорметаном, из почвы и растительного материала водным ацетоном, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании картофеля и томатов.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Таблица

Метрологические параметры метода

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
	предел обнаружения мг/дм3, мг/кг	диапазон определяемых концентраций мг/дм3, мг/кг	среднее значение определения, %	стандартное отклонение S,%	относительное отклонение, DS %	доверительный интервал среднего %
Вода	0,001	0,001-0,01	92,1	2,6	1,2	+-2,2
Почва	0,1	0,1-1,0	88,1	5,2	2,3	+-4,8
Томаты	0,1	0,1-1,0	89,5	4,5	2,0	+-4,2
Картофель	0,1	0,1-1,0	90,1	4,2	1,9	+-3,9

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Метрибузин, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,7% (Байер, Германия)
Ацетон, чда	ГОСТ 2603-79
Вода дистиллированная	ГОСТ 7602-72
Гексан, ч	ТУ 6-09-3375-78
Дихлорметан	ГОСТ 19433-88
Калий углекислый, хч	ГОСТ 4221-76
Калия перманганат, хч	ГОСТ 20490-75
Кальция хлорид, хч	ГОСТ 4161-77
Кислота серная, хч	ГОСТ 4204-77
Натрия гидроксид, хч	ГОСТ 4328-77
Натрия сульфат безводный, хч	ГОСТ 4166-76
Натрий двууглекислый, хч	ГОСТ 83-79
Натрия хлорид, хч	ГОСТ 4233-77
Этилацетат	ГОСТ 22300-76
Элюент N 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан-этилацетат (7:3, по объему)
Азот газообразный, осч	ГОСТ 0203-74
Водород, получаемый из генератора водорода	ГОСТ 3023-80
Воздух из баллона	ГОСТ 9.010-80
Силикагель (0,063-0,2 мм) для адсорбционной хроматографии (Мерк, Германия) I степени активности
Стекловата
Целит 535 (2-15 мкм) /Серва, Германия/ или аналогичный
Фильтры бумажные, "синяя лента"	ТУ 6-09-1678

2.3 Приборы, аппаратура, посуда

Хроматограф газовый "Кристалл 2000 М" с ТИД на азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше 2,82 х 10(-14) г/с или аналогичный
Колонка хроматографическая, набивная, стеклянная, 1 000 х 3 мм, неподвижная фаза - 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм)
Колонка капиллярная для ГЖХ НР-5, длина 12,5 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм, неподвижная фаза SE-52, фирма Hewlett Packard, США или аналогичная
Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10Ф	ТУ 64-1-2850
Аппарат для встряхивания АВУ	ТУ 64-1-1081-83
Весы аналитические типа ВЛР-200	ГОСТ 19401-74
Водоструйный насос	ГОСТ 10696-75
Гомогенизатор	МРТУ 42-1505-63
или аналогичный
Прибор для перегонки при атмосферном давлении
Ротационный испаритель тип ИР-1М	ТУ 25-11-917-76
Сито с отверстиями диаметром 1 мм
Баня водяная	ТУ 46-22-603-75
Воронка Бюхнера	ГОСТ 0147-73
Воронки делительные, вместимостью 100 и 250 мл	ГОСТ 25336-82
Воронки для фильтрования, стеклянные	ГОСТ 8613-75
Колба Бунзена	ГОСТ 5614-75
Колбы конические с притертыми пробками, вместимостью 250 мл	ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные на шлифе, вместимостью 10 и 100 мл	ГОСТ 9737-70

ГАРАНТ:

Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации 21 октября 1993 г. взамен ГОСТ 9737-70 с 1 января 1995 г. принят ГОСТ 9737-93

Колбы мерные, вместимостью 25, 50 и 100 мл	ГОСТ 1770-74
Пипетки мерные, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл	ГОСТ 20292-74Е
Пробирки градуированные с притертыми пробками, вместимостью 5 и 10 мл	ГОСТ 10515-75
Стаканы стеклянные емкостью 400 мл	ГОСТ 6236-72
Цилиндры мерные, вместимостью 50, 100 и 250 мл	ГОСТ 1770-74

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы почвы, картофеля и томатов хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более двух дней. Для длительного хранения пробы почвы доводят до воздушно-сухого состояния и хранят в холодильнике; пробы клубней и плодов замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18°С. Пробы воды хранят при температуре не выше 4°С в течение 3 дней, при температуре -18°С в течение месяца. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, а клубни и плоды измельчают.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2,5%-м раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г и 2 г ).

Этилацетат промывают равным объемом 5%-го раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130°С в течение 3 ч.

2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (3% OV-17 на Хромосорбе W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 270°С в течение 8-10 ч.

Капиллярную колонку с фазой НР-5 устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 280°С в течение 8-10 ч.

2.5.3. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор метрибузина с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,7% д.в., в этилацетате в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.

Рабочие растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора метрибузина соответствующим последовательным разбавлением этилацетатом. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более недели.

При изучении полноты открывания метрибузина в модельных матрицах используются ацетоновые растворы вещества.

2.5.4. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора метрибузина с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ x с от концентрации крезоксим-метила в растворе в мкг/мл.

2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,2 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 2 г силикагеля в 10 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 20 мл смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему) и 10 мл гексана со скоростью 1-2 капли в с, после чего она готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения метрибузина на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 1 мл стандартного раствора метрибузина с концентрацией 1 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему) и наносят на колонку. Промывают колонку 40 мл смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему) со скоростью 1-2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл этилацетата и анализируют на содержание метрибузина по п. 2.7.1.

Фракции, содержащие метрибузин, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл этилацетата и вновь анализируют по п. 2.7.1. Рассчитывают содержание метрибузина в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.

Примечание. Профиль вымывания метрибузина может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.6. Описание определения

2.6.1. Экстракция метрибузина

2.6.1.1. Вода. 100 мл предварительно отфильтрованной воды помещают в делительную воронку емкостью 250 мл. Добавляют 30 мл дихлорметана и встряхивают 1 мин. Нижний органический слой отделяют, собирая в коническую колбу емкостью 100 мл. Водный слой экстрагируют дихлорметаном еще дважды порциями по 30 мл. Объединенную органическую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 30°С. Остаток растворяют в 1 мл этилацетата и анализируют на содержание метрибузина по п. 2.7.1.

2.6.1.2. Почва. Навеску (20 г) воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему) и суспензию перемешивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Осадок на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (2:1). Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 35 мл), эквивалентную 5 г почвы. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп. 2.6.2 и 2.6.3.

2.6.1.3 Томаты, картофель. К навеске (25 г) измельченного материала добавляют 100 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему) и гомогенизируют 3 минуты при 10 000 об/мин. К суспензии добавляют 2 г целита и содержимое фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему). Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 30 мл), эквивалентную 5 г растительного материала. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп. 2.6.2 и 2.6.3.

2.6.2. Очистка экстрактов

Аликвоты почвенного (из п. 2.6.1.2) и растительного (из п. 2.6.1.3) экстрактов упаривают до водной фазы на роторном испарителе при температуре 40°С. Водный остаток переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 15 мл насыщенного раствора хлорида натрия и 20 мл дихлорметана. Смесь встряхивают в течение 1 минуты и после разделения слоев отделяют органическую фазу, пропуская ее через слой безводного сульфата натрия в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Экстракцию водной фазы дихлорметаном повторяют еще два раза (по 20 мл).

Объединенный дихлорметановый экстракт, содержащий метрибузин, выпаривают на роторном испарителе досуха при температуре 30°С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.3.

2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем

Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. 2.6.2 экстрактов растительного материала и почвы, количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему) в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Метрибузин элюируют 20 мл смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему), собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С. Сухие остатки экстрактов почвы и растительного материала растворяют в 5 мл этилацетата и анализируют на содержание метрибузина по п. 2.7.1.

2.7. Условия хроматографирования

2.7.1. Метод ГЖХ с насадочными колонками

Хроматограф газовый "Кристалл 2000 М" с ТИД на азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше г/с или аналогичный.

Колонка хроматографическая, набивная, стеклянная, 1 000 х 3 мм; неподвижная фаза - 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12-0,15 мм).

Температура детектора 320°С, инжектора 230°С, термостата колонки 215°С.

Скорость потока газа-носителя (азота) - 35 мл/мин.

Расход водорода - 11,5 мл/мин.

Расход воздуха - 200 мл/мин.

Объем вводимой пробы - 2 мкл.

Время удерживания метрибузина - 2 мин 20 с.

Предел детектирования - 0,2 нг.

Линейный диапазон детектирования - 0,2-2,0 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика метрибузина.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.7.2. Метод ГЖХ с капиллярными колонками

Хроматограф газовый "Кристалл 2000 М" с ТИД на азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше г/с или аналогичный.

Колонка капиллярная кварцевая НР-5, 12,5 м х 0,32 мм х 0,25 мкм (SE-52).

Температура термостата испарителя - 280°С, детектора - 320°С, термостата колонки по следующей программе: 100°С - 1 мин; 25°/мин до 200°С; 57 мин до 230°С; 307 мин до 275°С; выдержка - 3 мин.

Газовый режим: газ-носитель - азот, общий расход - 22 мл/мин.

Деление потока: 1:1.

Абсолютное время удерживания метрибузина: 5 мин 15 с.

Объем вводимой пробы - 1 мкл.

Линейный диапазон детектирования: 0,02-0,5 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика метрибузина.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,2 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание метрибузина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

, где

Х - содержание метрибузина в пробе, мг/кг или мг/;

- площадь пика образца, мВ x с;

- площадь пика стандарта, мВ x с;

А - концентрация стандартного раствора метрибузина, мкг/мл;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

m - объем (мл) или масса (г) анализируемой части образца (для воды - 100 мл; для почвы и растительного материала - 5 г).

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

ГАРАНТ:

Взамен МИ 2335-95 Госстандартом России введена в действие с 1 октября 2003 г. рекомендация МИ 2335-2003

5. Разработчики

Талалакина Т.Н., Дубовая Л.В., Макеев А.М.,

ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко