Методические указания МУК 4.1.1973-05 "Определение остаточных количеств эпоксиконазола в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)

Методические указания МУК 4.1.1973-05
"Определение остаточных количеств эпоксиконазола в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)

Дата введения: 1 июля 2005 г.
Введены впервые

2. Методика определения остаточных количеств эпоксиконазола в ботве и корнеплодах сахарной свеклы методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на газохроматографическом определении эпоксиконазола на неподвижной фазе SE-30 с использованием электронозахватного детектора (ЭЗД) после экстракции его из растительного материала водным ацетоном, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания сахарной свеклы.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Таблица

Метрологическая характеристика метода

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
	предел обнаружения, мг/кг	диапазон определяемых концентраций, мг/кг	среднее значение определения, %	стандартное отклонение S,%	относительное отклонение DS, %	доверительный интервал среднего, %
Ботва	0,05	0,05-0,5	83,5	3,9	1,7	+-3,7
Корнеплоды	0,05	0,05-0,5	83,1	2,9	1,3	+-2,7

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Эпоксиконазол с содержанием д.в. 99,8% (БАСФ, Германия)
Ацетон	ГОСТ 2603-79
Вода дистиллированная или деионизованная н-Гексан, ч	ГОСТ 7602-72 ТУ 6-09-3375-78
Калия перманганат	ГОСТ 20490-75
Кальция хлорид, хч	ГОСТ 4161-77
Калий углекислый, хч	ГОСТ 4221-76
Кислота серная, хч	ГОСТ 4204-77
Натрий двууглекислый	ГОСТ 83-79
Натрия гидроксид, хч	ГОСТ 4328-77
Натрия сульфат безводный, хч	ГОСТ 4166-76
Натрия хлорид, хч	ГОСТ 4233-77
Этилацетат	ГОСТ 22300-76
Элюент N 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан-ацетон (8:2, по объему)
Элюент N 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан-ацетон (6:4, по объему)
Азот газообразный, осч	ГОСТ 9293-74
Силикагель (0,063-0,2 мм) для адсорбционной хроматографии (Мерк, Германия) I степени активности
Стекловата
Целит 535 (2-15 мкм)/Серва, Германия/
Фильтры бумажные, синяя лента	ТУ 6-09-1678

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Хроматограф газовый "Кристалл 2000М" с ЭЗД с пределом детектирования по линдану не выше 8,2 х 10(-15) г/см3 или аналогичный
Колонка хроматографическая 1 500 х 3 мм, неподвижная фаза 3% ОV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм)
Колонка хроматографическая 1 500 х 3 мм, неподвижная фаза 3% SE-30 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм)
Колонка капиллярная для ГЖХ ZB-1, длина 30 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма Phenomenex, США или аналогичная
Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10Ф	ТУ 64-1-2850
Весы аналитические типа ВЛР-200	ГОСТ 19401-74
Гомогенизатор	МРТУ 42-1505-63
или аналогичный
Ротационный испаритель, тип ИР-1М	ТУ 25-11-917-76
Прибор для перегонки при атмосферном давлении
Вакуумный водоструйный насос	ГОСТ 10696-75
Воронка Бюхнера, ГОСТ 0147-73
Колба Бунзена, ГОСТ 5614-75
Воронки делительные вместимостью 100 и 500 мл	ГОСТ 25336-82
Колбы конические с притертыми пробками, вместимостью 250 мл	ГОСТ 25336-82
Колбы мерные, вместимостью 50 и 100 мл	ГОСТ 1770-74
Колбы грушевидные, вместимостью 50, 100, 250 мл	ГОСТ 25336-82
Цилиндры мерные, вместимостью 50, 100 и 250 мл	ГОСТ 1770-74
Пробирки градуированные с притертыми пробками, вместимостью 5 и 10 мл	ГОСТ 10515-75
Пипетки мерные, вместимостью 1, 2 и 5 мл	ГОСТ 20292-74Е
Воронки стеклянные	ГОСТ 9737-70

ГАРАНТ:

Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации 21 октября 1993 г. взамен ГОСТ 9737-70 с 1 января 1995 г. принят ГОСТ 9737-93

2.4. Отбор проб

Отбор образцов проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).

Отобранные пробы ботвы и корнеплодов хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более двух дней; при длительном хранении (не более трех месяцев) пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18°С. Перед анализом ботву и корнеплоды измельчают и отбирают усредненную пробу.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворитель последовательно промывают водой, 2,5%-м раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г и 2 г ).

Этилацетат промывают равным объемом 5%-го раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 150°С в течение 3 ч.

2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (3% SE-30 на Хромосорбе W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 270°С в течение 8-10 ч.

2.5.3. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор эпоксиконазола с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,8% д.в., в ацетоне в мерной колбе емкостью 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.

Рабочие растворы с концентрациями 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора эпоксиконазола соответствующим последовательным разведением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более недели.

2.5.4. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора эпоксиконазола с концентрацией 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ х с от концентрации эпоксиконазола в растворе в мкг/мл.

2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 0,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 10 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 20 мл смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) и 20 мл гексана со скоростью 1-2 капли в с, после чего она готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения эпоксиконазола на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 1 мл стандартного раствора эпоксиконазола с концентрацией 1 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) и наносят на колонку. Промывают колонку 50 мл смеси гексан-ацетон (8:2) и затем 40 мл смеси гексан-ацетон (6:4) со скоростью 1-2 капли в с. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл этилацетата и анализируют на содержание эпоксиконазола по п. 2.7.1.

Фракции, содержащие эпоксиконазол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл этилацетата и вновь анализируют по п. 2.7.1. Рассчитывают содержание эпоксиконазола в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.

Примечание. Профиль вымывания эпоксиконазола может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.6. Описание определения

2.6.1. Экстракция эпоксиконазола и очистка экстракта

К навеске (25 г) измельченной ботвы или корнеплодов добавляют 100 мл смеси ацетон-вода (80:20, по объему), гомогенизируют 3 мин при 10 000 об/мин. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (80:20). Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 32 мл), эквивалентную 5 г растительного материала, и упаривают ее до водной фазы на роторном вакуумном испарителе при температуре 40°С. Водный остаток переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 15 мл насыщенного раствора хлорида натрия и 30 мл гексана и содержимое встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев отделяют гексановую фазу и собирают ее в колбу емкостью 100 мл. Оставшуюся водную фазу обрабатывают гексаном еще два раза (по 30 мл). Объединенный гексановый экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия в грушевидную колбу емкостью 200 мл и затем упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.2.

2.6.2. Очистка на колонке с силикагелем

Остаток в колбе, полученный при упаривании экстракта растительного материала из п. 2.6.1, количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан-ацетон (8:2) в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 40 мл элюента N 1, элюат отбрасывают. Эпоксиконазол элюируют 30 мл элюента N 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Полученный раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С. Сухой остаток растворяют в 5 мл этилацетата и анализируют на содержание эпоксиконазола по п. 2.7.1.

2.7. Условия хроматографирования

2.7.1. Метод ГЖХ с насадочными колонками

Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с электронозахватным детектором () с пределом детектирования по линдану не выше г/.

Колонка хроматографическая, стеклянная, 1 500 х 3 мм; неподвижная фаза - 3% SE-30 на Хромосорбе W/HP (0,12-0,15 мм).

Температура детектора 320°С, испарителя 270°С, термостата колонки 230°С.

Скорость потока газа-носителя (азота) - 40 мл/мин.

Объем вводимой пробы - 2 мкл.

Время удерживания эпоксиконазола - 2 мин 10 с.

Предел детектирования - 0,1 нг.

Линейный диапазон детектирования - 0,1-1,0 нг.

Альтернативная фаза: 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12-0,15 мм), хроматографическая колонка 1 500 х 3 мм; температура детектора 320°С, инжектора 270°С, термостата колонки 255°С.

Время удерживания эпоксиконазола - 3 мин 25 с.

Каждую анализируемую пробу вводят три раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.7.2. Метод ГЖХ с капиллярными колонками

Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с электронозахватным детектором (() с пределом детектирования по линдану не выше г/.

Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм (SE-30).

Температура термостата испарителя - 270°С, детектора - 320°С, термостата колонки по следующей программе: 170°С - 2 мин; 25°С/мин до 250°С; выдержка - 10 мин.

Газовый режим: газ-носитель - азот, общий расход - 22,5 мл/мин; газ для поддува в детектор - азот, расход - 19,3 мл/мин.

Деление потока: 1:6.

Абсолютное время удерживания эпоксиконазола: 9 мин 10 с.

Объем вводимой пробы - 1 мкл.

Линейный диапазон детектирования: 0,025-0,5 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,2 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание эпоксиконазола рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

, где

Х - содержание эпоксиконазола в пробе, мг/кг;

- площадь пика анализируемой пробы, мВ х с;

- площадь пика стандартного раствора, мВ х с;

А - концентрация стандартного раствора эпоксиконазола, мкг/мл;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

m - масса анализируемой части образца, г (для ботвы и корнеплодов - 5 г).

3. Требования техники безопасности

Соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с легко воспламеняющимися жидкостями, токсичными веществами, электронагревательными приборами, сосудами, работающими под вакуумом.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

ГАРАНТ:

Взамен МИ 2335-95 Госстандартом России введена в действие с 1 октября 2003 г. рекомендация МИ 2335-2003

5. Разработчики

Назарова Т.А., Микитюк О.Д., Л.В. Дубовая, А.М. Макеев,

ВНИИ фитопатологии, 143050 Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко