Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 53400-2009 (ИСО 7937:2004) "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод подсчета колоний Clostridium perfringens" (утв. приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 сентября 2009 г. N 423-ст) (отменен)

Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 53400-2009 (ИСО 7937:2004)
"Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод подсчета колоний Clostridium perfringens"
(утв. приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 сентября 2009 г. N 423-ст)

Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of Clostridium perfringens - Colony-count technique

Дата введения - 1 июля 2011 г.
Введен впервые

ГАРАНТ:

Приказом Росстандарта от 29 ноября 2012 г. N 1766-ст настоящий ГОСТ отменен с 15 февраля 2015 г. в связи с введением в действие с 1 июля 2013 г. ГОСТ 31744-2012

Предисловие

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод подсчета жизнеспособных микроорганизмов Clostridium perfringens.

Настоящий стандарт применяется при исследовании продуктов, предназначенных для употребления в пищу человеком, и кормов для животных, а также образцов окружающей среды в местах производства и оборота пищевых продуктов.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 7218-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие правила микробиологических исследований

ГОСТ Р ИСО 11133-1-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории

ГАРАНТ:

Согласно приказу Росстандарта от 13 декабря 2011 г. N 1475-ст ГОСТ Р ИСО 11133-1-2008 отменен с 1 января 2013 г. в связи с введением в действие ГОСТ ISO 11133-1-2011

ГОСТ Р ИСО 11133-2-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред

ГАРАНТ:

Согласно приказу Росстандарта от 13 декабря 2011 г. N 1476-ст ГОСТ Р ИСО 11133-2-2008 отменен с 1 января 2013 г. в связи с введением в действие ГОСТ ISO 11133-2-2011 "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред"

ГОСТ Р 51426-99 (ИСО 6887-83) Микробиология. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Общее руководство по приготовлению разведений для микробиологических исследований

ГОСТ Р 51448-99 (ИСО 3100-2-88) Мясо и мясные продукты. Методы подготовки проб для микробиологических исследований

ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 Clostridium perfringens (С. perfringens); Бактерии, которые образуют типичные колонии (черный осадок, вызванный разложением сульфита до сульфида, который окрашивает колонии в черный цвет) в определенных селективных средах, и которые дают положительные реакции подтверждения, если испытания проводят в соответствии с одним из двух методов, указанных в настоящем стандарте.

3.2 подсчет колоний С. perfringens: Определение количества способных к росту и подтвержденных бактерий Clostridium perfringens в или г образца при условии проведения испытания в соответствии с методом, указанным в настоящем стандарте.

4 Сущность метода

4.1 Посев в чашки Петри определенного количества испытуемой пробы, если исходный продукт жидкий, или установленного количества исходной суспензии

Следующий посев в чашки Петри проводят в аналогичных условиях с использованием десятикратного разведения испытуемой пробы или исходной суспензии.

Добавляют селективную среду (метод пластинчатого посева) и заливают посев сверху слоем той же среды.

4.2 Анаэробная инкубация чашек при 37°С в течение .

4.3 Подсчет типичных колоний.

4.4 Подтверждение ряда типичных колоний и определение количества колоний С. perfringens в г или продукта.

5 Разведение, питательные среды и реактивы

В лабораторной практике используют ГОСТ Р ИСО 7218, ГОСТ Р 51448, ГОСТ Р ИСО 11133-1 и ГОСТ Р ИСО 11133-2 для приготовления, производства, проверки и применения питательных сред.

5.1 Разведения

В общем случае разведения по ГОСТ Р ИСО 7218.

5.2 Сульфит-циклосериновый агар (SC)

5.2.1 Состав в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1

Состав	Значение показателя
Ферментативный белковый гидролизат, г	15,0
Ферментативный соевый гидролизат, г	5,0
Дрожжевой экстракт, г	5,0
Двунатрий дисульфит безводный (Na2S2O5), г	1,0
Железо (III) - аммония цитрат*, г	1,0
Агар, г	От 9,0 до 18,0**
Вода, см3	1000
* Реактив должен содержать не менее 15% железа (массовая доля). ** В зависимости от гелеобразующей способности агара.

5.2.1.1 Приготовление среды

Растворяют компоненты среды в горячей воде и доводят до кипения. Устанавливают уровень рН, чтобы после стерилизации он соответствовал при 25°С.

Разливают среду во флаконы или бутылки соответствующей емкости

Стерилизуют в автоклаве (см. 6.1) 15 мин при 121°С.

Хранят в холодильнике при температуре не более двух недель после приготовления.

5.2.2 Раствор D-циклосерина

5.2.2.1 Состав в соответствии с таблицей 2.

Таблица 2

Состав	Значение показателя
D-циклосерин*, г	4,0
Вода, см3	100
* Используется белый кристаллический порошок.

5.2.2.2 Приготовление среды

Растворяют D-циклосерин в воде и стерилизуют.

Среду хранят в холодильнике при температуре не более четырех недель после приготовления.

5.2.3 Полная среда

Непосредственно перед посевом чашечным методом (см. 9.2) добавляют раствора D-циклосерина (см. 5.2.2) к каждой порции стерильной расплавленной основы среды объемом (см. 5.3.1), охлажденной до 44°С - 47°С.

5.2.4 Проворка# качества среды (SC)

Определение селективности и качества среды проводят по ГОСТ Р ИСО 11133-1. Для проверки характеристик применяют ГОСТ Р ИСО 11133-2 (таблица В.1).

5.3 Жидкая тиогликолатная среда

5.3.1 Состав в соответствии с таблицей 3.

Таблица 3

Состав	Значение показателя
Ферментативный перевар казеина, г	10,0
L-Цистин, г	0,5
D-Глюкоза, г	5,5
Дрожжевой экстракт, г	5,0
Хлорид натрия, г	2,5
Натрия тиогликолат (меркаптоацетат), г	0,5
Агар, г	0,5-2,0*
Диазорезорин, г	0,001
Вода, см3	1000
* В зависимости от гелеобразующей способности агара.

5.3.2 Растворяют компоненты в воде, при необходимости раствор доводят до кипения. Устанавливают уровень рН, чтобы после стерилизации он соответствовал при 25°С.

Среду разливают по в пробирки 16 х 160 мм и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 121°С.

Перед использованием среда должна быть деаэрирована.

5.3.3 Проверка качества тиогликолатной среды

Определение селективности и качества среды проводят по ГОСТ Р ИСО 11133-1. Для проверки характеристик применяют ГОСТ Р ИСО 11133-2 (см. таблицу В.4).

5.4 Лакто-сульфитная среда (LS) (необязательно)

5.4.1 Основа среды

5.4.1.1 Состав в соответствии с таблицей 4.

Таблица 4

Состав	Значение показателя
Ферментативный перевар казеина, г	5,0
Дрожжевой экстракт, г	2,5
Хлорид натрия, г	2,5
Лактоза, г	10,0
L-Цистин гидрохлорид, г	0,3
D-Глюкоза, г	5,5
Вода, см3	1000

5.4.1.2 Приготовление

Растворяют компоненты в воде, при необходимости раствор доводят до кипения. Устанавливают уровень рН, чтобы после стерилизации он соответствовал при 25°С.

Среду разливают по в пробирки с обратными трубками Дархема и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 121°С.

Среду хранят в холодильнике при температуре не более четырех недель после приготовления.

5.4.2 Раствор безводного метабисульфита натрия

5.4.2.1 Состав в соответствии с таблицей 5.

Таблица 5

Состав	Значение показателя
Двунатрий дисульфит (Na2S2O5) безводный, г	1,2
Вода, см3	100

5.4.2.2 Приготовление

Растворяют двунатрий дисульфит в воде и стерилизуют.

Раствор используют в течение дня.

5.4.3 Раствор цитрата железа (III) - аммония

5.4.3.1 Состав в соответствии с таблицей 6.

Таблица 6

Состав	Значение показателя
Железа (III) - аммония цитрат, г	1,0
Вода, см3	100

5.4.3.2 Приготовление раствора

Растворяют цитрат железа (III) - аммония в воде и стерилизуют раствор фильтрованием.

Раствор используют в течение дня.

5.4.4 Полная среда

Перед составлением полной среды ее деаэрируют нагреванием и последующим быстрым охлаждением. В случае хранения среды во флаконах с завинчивающимися крышками крышки ослабляют перед нагреванием и затем завинчивают перед охлаждением.

Затем к каждым основы среды (см. 5.4.1) добавляют раствора цитрата железа (III) - аммония (см. 5.4.3) и раствора двунатрия дисульфита (см. 5.4.2)

Среда используется в течение дня.

5.5 Подвижная нитратная среда (необязательно)

5.5.1 Состав в соответствии с таблицей 7.

Таблица 7

Состав	Значение показателя
Ферментативный гидролизат казеина, г	5,0
Мясной экстракт, г	3,0
Галактоза, г	5,0
Глицерин, г	5,0
Азотнокислый калий (KNO3), г	1,0
Динатрийфосфат (Na2HPO4), г	2,5
Агар, г	1,0-5,0*
Диазорезорин, г	0,001
Вода, см3	1000
* В зависимости от гелеобразующей способности агара.

5.5.2 Приготовление

Растворяют компоненты в воде, при необходимости раствор доводят до кипения. Устанавливают уровень рН, чтобы после стерилизации он соответствовал при 25°С.

Среду разливают в пробирки с выросшей разводкой-культурой по и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 121°С. Если среду не использовали в день приготовления, то ее хранят в холодильнике при температуре не более четырех недель после приготовления.

Непосредственно перед использованием подогревают в кипящей воде или на пару в течение 15 мин и затем быстро охлаждают до температуры разведения.

5.6 Нитратный реактив обнаружения (необязательно)

5.6.1 Раствор 5-амино-2-нафталинсульфокислоты (5-2-ANSA)

Растворяют 0,1 г 5-2-ANSA в 15%-ного (объемная доля) раствора уксусной кислоты. Фильтруют через бумажный фильтр.

Реактив хранят в хорошо закупоренном флаконе (предпочтительно с капельницей шаровидной формы) в холодильнике при температуре .

5.6.2 Раствор сульфаниловой кислоты

Растворяют 0,4 г сульфаниловой кислоты в 15%-ного (объемная доля) раствора уксусной кислоты. Фильтруют через бумажный фильтр.

Реактив хранят в хорошо закупоренном флаконе (предпочтительно с капельницей шаровидной формы) в холодильнике при температуре .

5.6.3 Приготовление полного реактива

Смешивают равные количества двух растворов (см 5.6.1 и 5.6.2) непосредственно перед использованием. Неиспользованный реактив уничтожают.

5.7 Цинковая пыль (необязательно)

5.8 Лактозо-желатиновая среда

5.8.1 Состав в соответствии с таблицей 8.

Таблица 8

Состав	Значение показателя
Ферментативный гидролизат казеина, г	15,0
Дрожжевой экстракт, г	10,0
Галактоза, г	10,0
Желатин, г	120,0
Фенол красный, г	0,05
Вода, см3	1000

5.8.2 Приготовление среды

Растворяют компоненты в воде (кроме лактозы и фенола красного). Устанавливают уровень рН, чтобы после стерилизации он соответствовал при 25°С.

Добавляют лактозу и фенол красный. Среду разливают в пробирки по и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 121°С. Если сразу не использовали в день приготовления, то ее хранят в холодильнике при температуре не более трех недель после приготовления.

Непосредственно перед использованием подогревают в кипящей воде или на пару в течение 15 мин и затем быстро охлаждают до температуры разведения.

6 Оборудование и лабораторная посуда

Примечание - При одинаковой спецификации одноразовое оборудование предпочтительнее многоразового.

Используют обычное лабораторное оборудование, а также следующее:

6.1 Стерилизаторы сухожаровые (печи) или паровые (автоклавы) по ГОСТ Р ИСО 7218.

6.2 Термостат, поддерживающий температуру .

6.3 Анаэростат, обеспечивающий культивирование анаэробных микроорганизмов.

6.4 рН-метр с разрешением 0,01 единиц рН и точностью при 25°С.

6.5 Бактериологические петли из платино-иридиевого или никель-хромового сплава, около 3 мм в диаметре, и иглы из тех же материалов для пересева в агаровые косяки.

6.6 Приборы для фильтрования, предназначенные для стерилизации растворов.

6.7 Пробирки размером 16 х 160 мм с перевернутыми трубками Дархема, длиной 35 мм и диаметром 7 мм.

6.8 Пипетки с полным сливом, номинальным объемом от 1 до .

6.9 Чашки Петри, из стекла или пластмассы, диаметром 90-100 мм.

6.10 Водяная баня, поддерживающая температуру от 44°С до 47°С.

6.11 Резиновые колбы, используемые с градуированными пипетками для разбрызгивания компонентов нитратного реактива обнаружения (при необходимости).

7 Отбор проб

В лабораторию направляют представительный образец. Образец не должен быть поврежден или изменен в процессе транспортирования или хранения.

Отбор проб не является частью метода, приведенного в настоящем стандарте. Рекомендуется достижение соглашения заинтересованных сторон касательно отбора проб конкретного продукта при отсутствии специального стандарта для данного продукта.

8 Подготовка проб для испытания

Подготовку проб проводят в соответствии со специальным стандартом для данного продукта. Рекомендуется достижение соглашения заинтересованных сторон касательно подготовки проб конкретного продукта при отсутствии специального стандарта на подготовку проб данного продукта.

9 Проведение определения

9.1 Метод приготовления исходной суспензии и последующие разведения

Приготовление пробы и первичного разведения в зависимости от вида продукта согласно соответствующей части ГОСТ 26669.

9.2 Посев и инкубирование (чашечный метод)

С помощью стерильной пипетки (см. 6.8) переносят в двух повторностях исходной суспензии или испытуемой пробы (если продукт жидкий) в центр пустых чашек Петри (см. 6.9).

Наливают в обе чашки от 10 до SC агара (см. 5.2.3), подогретого в водяной бане (см. 6.10) при температуре от 44°С до 47°С, и хорошо перемешивают с испытуемой пробой, осторожно вращая чашки. После затвердевания среды добавляют сверху дополнительно SC агара.

Оставляют чашки для затвердевания агара. Застывшие чашки агара с исходной пробой помещают в анаэростат или другие приборы, обеспечивающие культивирование анаэробных микроорганизмов, и инкубируют в анаэробных условиях в течение при температуре 37°С

Более продолжительное инкубирование может привести к излишнему почернению среды.

Повторяют процедуру с последующими десятикратными разведениями (см. 9.1).

9.3 Подсчет и выделение колоний

После установленного периода инкубации (см. 9.2) выделяют все чашки Петри, содержащие менее 150 колоний. Из них выделяют чашки с двумя последовательными разведениями. Подсчитывают на каждой чашке характерные колонии, предположительно относящиеся к C.perfringens.

Выделяют из каждой чашки пять типичных колоний и подтверждают их, используя одну из методик, описанных в 9.4.2 или 9.4.3.

9.4 Биохимическое подтверждение

9.4.1 Общие положения

Для целей подтверждения может быть использован набор сред для биохимических испытаний в соответствии с ГОСТ Р ИСО 7218.

9.4.2 Методика подтверждения с использованием среды LS

Примечание - Реакция, притекающая в лактозо-сульфитной среде (см. 5.4) при 46°С, очень специфична для C. perfringens и C. absonum. Поэтому необязательно добиваться дополнительной очистки черных колоний, выделенных с агаровой среды, перед их посевом на тиогликолатную и затем на лактозо-сульфитную среду.

9.4.2.1 Пересев и инкубирование

Каждую изолированную колонию (см. 9.3) пересевают на жидкую тиогликолатную среду (см 5.3). Инкубируют в анаэробных условиях в течение 18-24 ч при температуре 37°С.

9.4.2.2 Обработка результатов

Исследуют пробирку с LS средой, учитывая образование газа и наличие черного окрашивания (осадок сульфита железа). Трубки Дархема, заполненные более чем на одну четвертую часть газом, и пробирки, содержащие черный осадок, оценивают как положительные.

В сомнительных случаях, когда трубка Дархема в пробирке с почерневшей средой заполнена газом менее чем на четверть, без промедления, с помощью стерильной пипетки переносят пять капель культуры с LS средой (см. 9.4.2.1) в другую пробирку с той же средой. Инкубируют на водяной бане (см. 6.10) при температуре от 46°С в течение 18-24 ч. Оценивают эти пробирки, как описано выше.

Бактерии, которые образуют типичные колонии на LS среде и дают положительную реакцию подтверждения на LS среде, относят к C. perfringens. Во всех прочих случаях пробирки с посевами рассматривают как отрицательные.

9.4.3 Методика подтверждения с использованием подвижной нитратной среды и лактозо-желатиновой среды

9.4.3.1 Общие положения

Для данной методики подтверждения требуются хорошо изолированные типичные колонии. Если их нет (т.е. они чрезмерно разрослись на поверхности чашек, и нет возможности выбрать хорошо изолированные типичные колонии), засевают пять типичных колоний на предварительно деаэрированные жидкие тиогликолатные среды (см. 5.3).

Инкубируют в анаэробных условиях при температуре 37°С в течение 18-24 ч. Штрихуют колонии на чашках с основным агаром SC (5.2.1.2) и добавляют сверху основного агара SC.

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Вместо "5.2.1.2" имеется в виду "5.2.1.1"

Дают застыть агару и инкубируют в анаэробных условиях при температуре 37°С в течение 16-24 ч. Потом выбирают из каждой чашки одну типичную и хорошо выделенную колонию.

При необходимости повторяют штрихование и посев на чашки Петри с основным агаром SC до получения хорошо изолированных типичных колоний.

Подтверждают каждую колонию, как описано в 9.4.3.2, 9.4.3.3 и 9.4.3.4.

9.4.3.2 Инокуляция и исследование подвижной нитратной среды

Инокулируют уколом каждую выделенную колонию (см. 9.3) в только что деаэрированную подвижную нитратную среду (см. 5.5).

Инкубируют в анаэробных условиях при 3°С в течение 24 ч. Исследуют пробирку с подвижной нитратной средой на тип культуры по линии укола. Подвижность очевидна по диффузному распределению бактерий в среду от линии укола.

Проводят испытание на присутствие нитрита, добавляя с помощью градуированной пипетки (см. 6.8) и резиновой колбы (см. 6.11) от 0,2 до нитритного реактива обнаружения (см. 5.6) в каждую пробирку с подвижной нитратной средой.

Примечание - В целях безопасности проводят это испытание в вытяжном шкафу

Образование красного цвета подтверждает восстановление нитрата до нитрита. Если красный цвет не появляется в течение 15 мин, добавляют небольшое количество цинковой пыли (см. 5.7) и дают отстояться в течение 10 мин. Если красный цвет не появился после добавления цинковой пыли, восстановления нитрата не произошло.

9.4.3.3 Инокуляция и исследование лактозо-желатиновой среды

Инокулируют каждую выделенную колонию (см. 9.3) в только что деаэрированную лактозо-желатиновую среду (см. 5.8). Инкубируют в анаэробных условиях при 37°С в течение 24 ч.

Исследуют пробирку с лактозо-желатиновой средой на присутствие газа и желтого цвета (благодаря образованию кислоты), указывающих на ферментацию лактозы. Охлаждают пробирки при 5°С в течение 1 ч и проверяют на сжижение желатина. Если среда застыла, повторно инкубируют в течение еще 24 ч и снова проверяют на сжижение желатина.

9.4.3.4 Интерпретация

Бактерии, которые образуют черные колонии в среде SC, неподвижны, обычно восстанавливают нитрат до нитрита, вырабатывают кислоту и газ из лактозы и сжижают желатин за 48 ч, относятся к бактериям С. perfringens. Культуры, которые дают слабую реакцию на нитрит (т.е. розового цвета), должны быть ликвидированы, так как бактерии С. perfringens дают сильную и немедленную реакцию.

10 Обработка результатов

10.1 Метод расчета

Обработка результатов - по ГОСТ Р ИСО 7218.

10.2 Сходимость

10.2.1 Межлабораторные испытания

Данные о сходимости этого метода, описанные в настоящем стандарте, базируются на результатах межлабораторного испытания [1]. Детали этого межлабораторного испытания приведены в приложении А. Предельные значения повторяемости и воспроизводимости определялись на трех видах продуктов, загрязненных на разных уровнях, и на контрольных материалах.

Значения, полученные на основе этого межлабораторного испытания, не могут применяться к пределам концентраций и матрицам, отличным от приведенных здесь.

10.2.2 Повторяемость

Абсолютная разность между двумя отдельными ( - преобразованными) результатами испытаний (число С. perfringens на г или ) или отношение большего к меньшему из двух результатов по нормальной шкале, полученных при использовании одного и того же метода, на идентичном испытуемом материале, одним и тем же оператором, использующим одно и то же оборудование, в течение короткого допустимого промежутка времени, будет превышать предел повторяемости (г) не более чем в 5% случаев.

В качестве общего показателя повторяемости (r) при испытании проб пищевых продуктов допускается использовать следующие значения. Эти значения r являются общими для всех матриц, рассматриваемых в процессе межлабораторного испытания:

- r = 0,21 для подтверждения LS или 0,25 для подтверждения MN/LG (выраженные как разница между - преобразованным и результатами испытания) или

- r = 1,67 для подтверждения LS или 1,8 для подтверждения MN/LG (выраженные как отношение большего к меньшему из двух результатов испытания).

Для контрольных материалов (см. таблицу А.4) могут применяться следующие значения:

- r = 0,13 для подтверждения LS или 0,12 для подтверждения MN/LG (выраженные как разница между - преобразованными результатами испытания) или

- r = 1,3 для подтверждения LS или 1,8 для подтверждения MN/LG (выраженные как отношение большего к меньшему из двух результатов испытания).

Пример

Получен первый результат 10000 или предполагаемых бактерий C. perfringens на грамм продукта. В условиях повторяемости отношение большего результата к меньшему не должно быть свыше 1,9. Следовательно, второй результат будет между 5263 (= 10000/1,9) и 19000 (10000 х 1,9) предполагаемых бактерий С. perfringens на грамм.

10.2.3 Воспроизводимость

Абсолютная разность между двумя отдельными ( - преобразованными) результатами испытаний (число С. perfringens на г или ) или абсолютное соотношение между результатами двух испытаний по нормальной шкале, полученными при использовании одного и того же метода, на идентичном испытуемом материале в разных лабораториях, разными операторами, использующими различное оборудование, будут превышать предел воспроизводимости (R) не более чем в 5% случаев.

В качестве показателя предела воспроизводимости (R) при испытании различных видов пищевых продуктов и контрольных материалов могут использоваться значения из таблицы 9. Эти значения r являются средними значениями, полученными в результате межлабораторного испытания для различных уровней*.

Таблица 9 - Примеры значений для R

Вид пробы	Подтверждение LS		Подтверждение MN и LG
	R(log)*	R**	R(log)*	R**
Сыр	0,26	1,8	0,31	2,1
Мясо	0,55	3,5	0,52	3,3
Сухой корм для животных	0,65	4,5	0,72	5,3
Контрольный материал	0,27	1,9	0,29	1,9
* R(log) - предел воспроизводимости, выраженный как разность между log_10 - трансформированными результатами испытаний. ** R - предел воспроизводимости, выраженный как соотношение между результатами испытаний.

Примеры

1 Во-первых, лаборатория нашла результат испытания, равный 10000 или C. perfringens на грамм сыра. В условиях воспроизводимости отношение большего результата к меньшему не должно быть свыше 2,1. Следовательно, результат второй лаборатории должен быть между 4761 (=10000/2,1) и 21000 (10000 x 2,1) предполагаемых бактерий C. perfringens на грамм.

2 Во-вторых, лаборатория хочет знать максимальный уровень, который она может найти и который соответствует установленному уровню (например предел в 100000 или ). Для этого значение R (0,31 x 0,59) является разностью между - трансформированными результатами испытаний, а значение представляет соотношение между результатами испытаний. Следовательно, результаты до или 152000 (100000х1,52) не указывают несоответствие пределу. Коэффициент 0,59 отражает тот факт, что испытание с односторонним 95%-ным интервалом проводят для того, чтобы узнать, превышен ли предел. Коэффициент 0,59 вычислен по формуле

11 Протокол испытания

В протоколе испытания указывают:

- всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;

- метод отбора пробы, если известен;

- использованный метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт;

- все детали исследования, не оговариваемые в настоящем стандарте или рассматриваемые как необязательные, а также детали иного свойства, могущие оказать влияние на результаты исследований;

- полученные результаты.

______________________________

* В случае данного межлабораторного испытания значения воспроизводимости, которые должны быть выражены как общее значение, применимое ко всем пробам продуктов, очень сильно отличаются между пробами.

Библиография

[1]	Schulten S.M., Benschop E., Nageikerke N.J.D. и Mooljman K.A. Validation of microbiological methods. Enumeration of Clostridium perfringens according to ISO 7937 (второе издание, 1997). Отчет 286555002. Национальный институт общественного здоровья и окружающей среды. Bilthoven. Нидерланды, 2001
[2]	ИСО 16140.2003 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Протокол проверки достоверности альтернативных методов