Приложение N 4. Инструкция по организации проведения лабораторного исследования на ВИЧ-инфекцию

Приложение N 4
к приказу
министра здравоохранения
Свердловской области
от 7 апреля 2010 г. N 296-п

Инструкция
по организации проведения лабораторного исследования на ВИЧ-инфекцию

Настоящая инструкция разработана на основании типовой инструкции по противоэпидемическому режиму лаборатории диагностики СПИД, утвержденной заместителем министра здравоохранения СССР А.И. Кондрусевым 5 июня 1990 г. N 42-28/38-90.

Основным методом диагностики ВИЧ-инфекции является обнаружение антител к вирусу. Антитела к ВИЧ появляются у 90-95% зараженных в течение 3 месяцев после заражения, у 5-9% - через 6 месяцев после заражения и у 0,5-1% в более поздние сроки. Наиболее ранний срок обнаружения антител - вторая неделя от момента заражения. Обнаружение антител к ВИЧ включает два этапа.

На первом этапе проводится выявление суммарного спектра антител против антигенов ВИЧ с использованием различных тестов: иммуноферментных, агглютинационных, комбинированных, гребеночных, мембранно-фильтрационных или мембранно-диффузных.

На втором этапе проводят референс-исследования методом иммунного блотинга: проводится определение антител к отдельным антигенам вируса. Допустимо использование тест-систем, разрешенных к применению Министерством здравоохранения и социального развития РФ. Диагностические процедуры должны проводиться в соответствии с утвержденными инструкциями по применению тестов.

Преаналитический этап является важным звеном в диагностике ВИЧ-инфекции, так как нарушения, допущенные на этом этапе, влияют на результат и его интерпретацию:

1. Забор крови производится из локтевой вены в количестве 3-5 мл.

2. Полученный материал не рекомендуется хранить более 12 часов при комнатной температуре и более 1 суток в холодильнике при температуре 4-8 градусов. Целесообразным является после взятия крови сразу отобрать из нее сыворотку, которая может храниться в течение 7 дней при температуре 4-8 градусов.

3. На пробирках с образцами должны быть указаны идентифицирующие данные пациента.

4. В процедурном кабинете заполняется сопроводительное направление (форма 264/У-88) в двух экземплярах, в которых указано: фамилия, имя, отчество пациента полностью, пол, дата рождения, адрес, код контингента, гражданство, дата взятия материала крови, Ф.И.О. врача, назначившего исследование. Зачеркивать, вносить исправления запрещается.

5. Направление доставляется вместе с исследуемой кровью, отдельно от клинического материала, в полиэтиленовых пакетах. Образцы, взятые для исследования, помещаются в закрытые герметичными крышками одноразовые пробирки, затем в штативы, которые размещаются в плотно закрывающейся таре (контейнеры) или сумке-холодильнике, легко подвергающейся дезинфекции. Доставка крови в лабораторию проводится персоналом, прошедшем специальный инструктаж.

На первом этапе диагностики ВИЧ-инфекции проводится скрининговое исследование крови. При получении положительного результата анализ проводится еще два раза (с той же сывороткой, в той же тест-системе). Если при этом был получен еще один положительный результат (два положительных результата из трех постановок ИФА), сыворотка считается первичноположительной и направляется в референс-лабораторию для дальнейшего исследования.

Клинический материал для арбитражного исследования доставляется в референс-лабораторию в одноразовых микропробирках (типа Эппендорф), с указанием идентифицирующих данных пациента и направлением, в которых указано:

1. фамилия, имя, отчество пациента полностью,

2. пол,

3. дата рождения,

4. адрес, код контингента,

5. гражданство,

6. дата взятия материала крови,

7. дата последнего положительного анализа с указанием наименования тест-системы, серия, срок годности, результат исследования в ИФА (оптическая плотность (ОП) образца, ОП - критическое),

8. наименование учреждения, направившего материал на арбитражные исследования, должность, ФИО, подпись направившего материал.

В референс-лаборатории первичноположительная сыворотка повторно исследуется в ИФА в другой тест-системе, выбранной для подтверждения.

При получении положительного результата анализа сыворотку необходимо исследовать в иммунноблотинге.

При получении отрицательного результата во второй тест-системе сыворотка повторно исследуется в третьей тест-системе. В случае получения отрицательного результата анализа и во второй, и в третьей тест-системе выдается заключение об отсутствии антител к ВИЧ.

При получении положительного результата в третьей тест-системе сыворотка также направляется на исследование в иммунноблотинге. Результаты, полученные в подтверждающем тесте (иммунноблот), интерпретируются как положительные, неопределенные, отрицательные.

При получении отрицательного результата в иммуноблотинге сыворотку исследуют на антигенной тест-системе.