Методические указания МУК 4.1.2346-08 "Измерение концентраций клотианидина в воздухе рабочей зоны, смывах с кожных покровов и атмосферном воздухе населенных мест операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 10 октября 2007 г.)

Методические указания МУК 4.1.2346-08
"Измерение концентраций клотианидина в воздухе рабочей зоны, смывах с кожных покровов и атмосферном воздухе населенных мест операторов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 10 октября 2007 г.)

Дата введения - 28 декабря 2007 г.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны, смывах с кожных покровов операторов и атмосферном воздухе населенных мест массовой концентрации клотианидина в диапазонах 0,05-0,5 , 0,1-1,0 мкг/смыв и 0,01-0,1 .

Клотианидин-(Е)-1-(2-хлор-1,3-тиазол-5-илметил)-3-метил-2-нитрогуанидин (IUPAC)

Мол. масса 249,7

Твердое бесцветное порошкообразное вещество без запаха. Температура плавления 176,8°C. Давление паров при 25°C - Па. Плотность - 1,61. Растворимость в органических растворителях при 25°C (в ): ацетон - 1520, дихлорметан - 132, метанол - 626, этилацетат - 203, ксилол - 1,28, н-октанол - 93,8, гептан - менее 0,1. Растворимость в воде (при 20°C) - 327 . Коэффициент распределения н-октанол/вода: . Гидролитически стабилен при pH 5, 7, 9 (при 25°C).

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность для крыс - более 5 000 мг/кг; острая дермальная токсичность для крыс - более 2 000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность для крыс - более 6 141 .

Область применения препарата

Клотианидин - инсектицид класса неоникотиноидов, предназначенный для защиты картофеля от колорадского жука.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) клотианидина в воздухе рабочей зоны - 0,35 , атмосферном воздухе населенных мест - 0,02 .

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей , при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерений

Измерения концентраций клотианидина выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование клотианидина из воздуха осуществляют на бумажный фильтр "синяя лента", экстракцию с фильтров проводят ацетонитрилом. Смыв с кожных покровов проводят этиловым спиртом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 нг. Средняя полнота извлечения с фильтров - 90%, с поверхности кожи - 91%.

Определению не мешают компоненты препаративной формы.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы Waters, США)	Номер в Государственном реестре средств измерений 15311-02
Барометр-анероид М-67	ТУ 2504-1797-75
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104
Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2 и 2-1000-2	ГОСТ 1770
Меры массы	ГОСТ 7328
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10	ГОСТ 29227
Пробирки градуированные вместимостью 5 или 10	ГОСТ 1770
Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ (ЗАО "ОПТЭК", г. Санкт-Петербург)	Номер в Государственном реестре средств измерений 18860-05
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1°C, пределы измерения 0-55°C	ТУ 215-73Е
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 10, 250, 500 и 1 000	ГОСТ 1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Клотианидин, аналитический стандарт с содержанием основного вещества 99,6%, (фирмы "Сумитомо Кемикал Корпорейшн, Лимитед")
Ацетонитрил для хроматографии, хч	ТУ-6-09-4326-76
Вода бидистиллированная, деионизованная или перегнанная над	ГОСТ 6709
Этиловый спирт (этанол) ректификованный	ГОСТ Р 51652 или ГОСТ 18300

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с	ТУ 64-1-2851-78
Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные	ТУ 6-09-2678-77
Бязь хлопчатобумажная белая
Воронки конусные диаметром 30-37 мм	ГОСТ 25336
Груша резиновая
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100	ГОСТ 9737
Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм
Насос водоструйный	ГОСТ 10696
Пробирки центрифужные	ГОСТ 25336
Ротационный вакуумный испаритель B-169 фирмы Buchi, Швейцария	ТУ 25-11-917-74
Стаканы химические низкие с носиком, вместимостью 150	ГОСТ 25336
Стекловата
Стеклянные емкости вместимостью 100 с герметичной металлической крышкой
Стеклянные палочки
Установка для перегонки растворителей
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Symmetry C18, зернением 5 мкм
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50-100

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичным или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха и относительной влажности не более 80%.

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка ацетонитрила (при необходимости), подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка фильтров и салфеток для отбора проб, отбор проб.

7.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 помещают 780 бидистиллированной или деионизованной воды и 220 ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 1,0 до установления стабильной базовой линии.

7.4. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения

7.4.1. Исходный раствор клотианидина для градуировки (концентрация 100 мкг/см3). В мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,0100 г клотианидина, добавляют 50-70 ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Растворы N 1-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.4.2. Раствор N 1 клотианидина для градуировки и внесения (концентрация 10 ). В мерную колбу вместимостью 100 помещают 10 исходного раствора клотианидина с концентрацией 100 (п. 7.4.1), разбавляют ацетонитрилом до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено".

7.4.3. Рабочие растворы N 2-5 клотианидина для градуировки (концентрация 0,05-0,5 ). В 4 мерные колбы вместимостью 100 см3 помещают по 0,5, 1,0, 2,5 и 5,0 градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/см3 (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 2-5 с концентрацией клотианидина 0,05, 0,1, 0,25 и 0,5 , соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение 2-х недель.

7.5. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика от концентрации клотианидина в растворе , устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки N 2-5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.5.1. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площади пиков действующего вещества.

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2-х растворов для градуировки различной концентрации. Если значения площадей отличаются более чем на 7% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

7.5.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостной хроматограф "Breeze" с ультрафиолетовым детектором (фирма Waters, США).

Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Symmetry C18, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (22:78, по объему).

Скорость потока элюента: 1,0

Рабочая длина волны: 270 нм.

Чувствительность: 0,001 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 20

Ориентировочное время выхода клотианидина: 5,9-6,1 мин.

Линейный диапазон детектирования: 1-10 нг.

7.6. Подготовка фильтров для отбора проб воздуха

Диаметр бумажного фильтра "синяя лента" должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя.

Фильтры последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом, затем ацетонитрилом порциями 25-30 , сушат с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

7.7. Подготовка салфеток для проведения смыва

Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10х10 см, затем их последовательно обрабатывают 5%-ым раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, 2-кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

8. Отбор и хранение проб воздуха

8.1. Воздух рабочей зоны

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны". Воздух с объемным расходом 2-4 аспирируют через бумажный фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации клотианидина на уровне 0,5 ОБУВ для воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 1,5 воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре +4-6°C - 15 дней.

8.2. Атмосферный воздух

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 "ОПА. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ в воздухе населенных мест". Воздух с объемным расходом 4-5 аспирируют через бумажный фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации клотианидина на уровне 0,8 ОБУВ для атмосферного воздуха необходимо отобрать 16 воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильнике при температуре +4-6°C - 15 дней.

9. Условия проведения смыва

Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой или другими СИЗ участков тела (лоб, лицо, шея, спина, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межпальцевые промежутки).

До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его с целью удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 ). При необходимости отбирают фоновые смывы.

Смыв проводят способом обмыва фиксированного участка кожи этиловым спиртом, помещая 20 в стеклянную емкостью с металлической крышкой. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают кожный покров сверху вниз. Операцию повторяют дважды.

Срок хранения отобранных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в морозильной камере при - 18°C - 30 дней.

10. Выполнение измерений

10.1. Воздушная среда

Экспонированный фильтр переносят в химический стакан вместимостью 150 , заливают 20 ацетонитрила, помещают на встряхиватель на 30 мин. Растворитель сливают, фильтр обрабатывают новыми порциями ацетонитрила объемом 20 еще дважды, выдерживая на встряхивателе по 20 мин.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40°C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 5 подвижной фазы (подготовленной по п. 7.2) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.1.

10.2. Смывы с кожных покровов

Пробу смыва сливают (через воронку) в колбу для упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную химическую воронку, установленную в муфту колбы для упаривания, тщательно отжимают и промывают этиловым спиртом дважды порциями по 10 , предварительно ополаскивая растворителем емкость, в которой находилась проба.

Объединенный раствор упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40°C почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 подвижной фазы (подготовленной по п. 7.2) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.1.

Пробу вводят в испаритель хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика действующего вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию клотианидина в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 0,5 , разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).

Перед анализом опытных образцов проводят хроматографирование холостых (контрольных) проб - экстрактов неэкспонированного фильтра и салфетки.

11. Обработка результатов анализа

11.1. Воздушная среда

Массовую концентрацию клотианидина в пробе воздуха X, , рассчитывают по формуле:

, где

C - концентрация клотианидина в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, ;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

- объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным (давление 760 мм рт. ст., температура 20°C) при исследовании воздуха рабочей зоны или нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 0°C) при исследовании атмосферного воздуха, .

, где

T - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), °C,

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.,

u - расход воздуха при отборе пробы, ,

t - длительность отбора пробы, мин,

R - коэффициент, равный 0,386 для воздуха рабочей зоны и 0,357 для атмосферного воздуха.

За результат анализа принимается среднее арифметическое результатов двух параллельных определений и , расхождение между которыми не превышает значений норматива оперативного контроля сходимости (d):

.

, , где

d - норматив оперативного контроля сходимости, ;

- норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 19%).

11.2. Смывы с кожных покровов

Массовую концентрацию клотианидина в пробе смыва X, мкг/смыв, рассчитывают по формуле:

, где

C - концентрация клотианидина в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, ;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, .

Примечание: Идентификация и расчет концентрации клотианидина в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

12. Оформление результатов измерений

Результат количественного анализа представляют в виде:

- результат анализа в или мкг/смыв (с указанием площади смыва в ), характеристика погрешности , % , P = 0,95 или

, (мкг/смыв, площадь смыва, ), P = 0,95,

где - абсолютная погрешность.

, (мкг/смыв)

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание клотианидина в пробе воздуха рабочей зоны - менее 0,05 ; атмосферного воздуха - менее 0,01 ; смыва - менее 0,1 мкг/смыв"*

13. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

14. Разработчики

Т.В. Юдина, Н.Е. Федорова, В.Н. Волкова (ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Роспотребнадзора").

______________________________

* - 0,05 ; 0,01 ; 0,1 мкг/смыв - пределы обнаружения при отборе 5 воздуха рабочей зоны; 25 атмосферного воздуха; в пробе смыва (фиксированная площадь смыва, ), соответственно.

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко