Наставление по применению антигена кампилобактериозного для реакции агглютинации с вагинальной слизью (РАВС) (утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 9 июля 1999 г. N 13-7-2/1690)

1. Общие сведения

1.1. Антиген кампилобактериозный применяется для постановки реакции агглютинации с вагинальной слизью (РАВС), предназначенной для диагностики кампилобактериоза крупного рогатого скота.

1.2. Антиген представляет собой гомогенную серовато-белого цвета взвесь инактивированных формалином кампилобактерий подвида venerealis с концентрацией 10,0 млрд микробных клеток в 1,0 куб. см 0,3%-ного формалинизированного физиологического раствора. При длительном отстаивании антигена допускается выпадение микробных клеток на дно ампулы (флакона) в виде осадка, легко разбивающегося при встряхивании.

1.3. Антиген расфасовывают по 2,0, 4,0 или 5,0, 10,0 куб. см соответственно в ампулы или флаконы, на которых несмываемой краской должна быть нанесена надпись или наклеена этикетка с указанием наименования предприятия-изготовителя, сокращенного наименования препарата - "Антиген кампилобактериозный для РАВС", его количества, номера серии, номера контроля, даты изготовления, срока годности, обозначения стандарта.

Допускается другая фасовка антигена, согласованная в установленном порядке.

Ампулы (флаконы) с антигеном упаковывают в картонные коробки с разделительными перегородками.

В каждую коробку с ампулами (флаконами) вкладывают наставление по применению антигена.

1.4. Антиген в ампулах (флаконах) с трещинами, во флаконах с нарушенной укупоркой, содержащий посторонние примеси, плесень и с истекшим сроком годности подлежит выбраковке в установленном порядке.

1.5. Срок годности антигена 12 мес. с даты изготовления при условии хранения в сухом темном месте при температуре от 4 до 12 гр. С.

2. Порядок постановки РАВС

2.1. Для иммунологического исследования на кампилобактериоз используют экстракт вагинальной слизи от телок или коров, подозреваемых в заболевании (при расстройствах полового цикла).

2.2. Вагинальную слизь берут от животных в период полового покоя, не имеющих патологических выделений из влагалища (гной, примесь крови и т.п.).

2.3. Тампон, изготовленный из квадратного куска марли размером 10х10 см с привязанной к нему крепкой ниткой длиной 60-70 см, помещают в стеклянную трубку со сточенными краями длинной 40-45 см (нитку пропускают через трубку). Трубку оборачивают бумагой и стерилизуют автоклавированием при 1 атм в течение 30 мин.

2.4. Перед получением вагинальной слизи наружные половые органы животного обмывают теплой водой с мылом.

2.5. Стерильные трубку с тампоном освобождают от бумаги и вводят животному во влагалище до шейки матки, максимально предохраняя его от загрязнения. В трубку вводят металлический, пластмассовый или деревянный стержень и выталкивают тампон во влагалище. Трубку со стержнем извлекают наружу, а тампон оставляют во влагалище.

2.6. Через 30-40 мин тампон извлекают за нитку из влагалища, также предохраняя его от загрязнения и помещают с помощью пинцета в пробирку с 5,0 куб. см 0,3%-ного формалинизированного (расчет по формальдегиду здесь и далее везде) 3%-ного раствора хлористого натрия. Тампоны, загрязненные фекалиями, гнойными массами или кровью, для исследования не пригодны.

2.7. Пробирку, с помещенным в нее тампоном, закрывают резиновой пробкой, встряхивают и выдерживают в холодильнике при температуре (1-4) гр. С в течение 12-14 ч, после чего тампон отжимают пинцетом и удаляют из пробирки, а жидкость центрифугируют при 2,5-3,0 тыс. об/мин. в течение 30 мин.

2.8. Реакцию ставят с бесцветной прозрачной надосадочной жидкостью (экстракт вагинальной слизи). В штатив устанавливают 4 пробирки. В первую и вторую пробирки вносят по 0,5 куб. см экстракта вагинальной слизи, а затем во 2-ю, 3-ю и 4-ю - по 0,5 куб. см 0,3%-ного формалинизированного 3%-ного раствора хлористого натрия.

2.9. Содержимое второй пробирки пипетируют и в объеме 0,5 куб. см переносят в третью пробирку, из третьей - после идентичной манипуляции, в таком же объеме - в четвертую, из четвертой - после идентичной манипуляции, в таком же объеме в стакан с любой дезинфицирующей жидкостью.

2.10. Антиген перед применением встряхивают до получения гомогенной взвеси и разводят в соотношении 1:10 (к 1 куб. см антигена добавляют 9 куб. см 0,3%-ного формалинизированного 3%-ного раствора хлористого натрия).

2.11. Антиген в разведении 1:10 в объеме по 0,5 куб. см вносят во все 4 пробирки с приготовленными разведениями надосадочной жидкости.

2.12. При постановке РАВС антиген одновременно контролируют на:

- активность: в пробирки с моноспецифической агглютинирующей сывороткой против кампилобактерий подвида venerealis, разведенной 0,3%-ным формалинизированным 3%-ным раствором хлористого натрия последовательно двукратно от 1:25 до 1:1600 (0,5 куб. см), вносят по 0,5 куб. см антигена,

- специфичность: в пробирки с моноспецифической агглютинирующей сывороткой против кампилобактерий подвида bubulus, нормальной сывороткой крови крупного рогатого скота и кролика, разведенными 0,3%-ным формалинизированным 3%-ным раствором хлористого натрия последовательно двукратно от 1:25 до 1:200 (0,5 куб. см) вносят по 0,5 куб. см антигена,

- самоатглютинацию: в пробирку вносят по 0,5 куб. см антигена и 0,3%-ного формалинизированного 3%-ного раствора хлористого натрия.

2.13. Пробирки с реагентами встряхивают и помещают в термостат при температуре (37-38)гр. С на 16-18 ч, после чего выдерживают их при температуре (18-22)гр. С в течение 1 ч и учитывают результаты реакции.

3. Учет результатов реакции

3.1. Результаты реакции учитывают в крестах по следующей схеме;

++++ (4 креста) - полное просветление жидкости над агглютинатом в виде "рыхлого зонтика", полностью покрывающего дно пробирки. При встряхивании "зонтик" поднимается в виде паутинки и разбивается на крупные хлопья или комочки, а надосадочная жидкость остается прозрачной;

+++ (3 креста) - просветление жидкости со слабо выраженной опалесценцией над агглютинатом в виде "рыхлого зонтика", полностью покрывающего дно пробирки. При встряхивании "зонтик" поднимается в виде паутинки и разбивается на хлопья или комочки средней зернистости, а надосадочная жидкость становится слегка мутной;

++ (2 креста) - заметное просветление жидкости над агглютинатом в виде "компактного зонтика", покрывающего около 50% площади дна пробирки. При встряхивании "зонтик" разбивается на мелкие хлопья или комочки, а надосадочная жидкость становится мутной;

+ (1 крест) - слабо выраженное просветление жидкости над агглютинатом в виде "компактного зонтика", занимающего около 25% площади дна пробирки. При встряхивании агглютинат разбивается на мельчайшие плохо видимые комочки, надосадочная жидкость мутная;

- (минус) - просветление жидкости и образование агглютината не регистрируется. На дне пробирки в центре может быть осадок из микробных клеток, при встряхивании поднимающийся в виде косички.

3.2. 0 качестве антигена судят по результатам контроля, учет которых проводят перед учетом основной реакции.

Антиген должен давать положительную реакцию с моноспецифической агглютинирующей сывороткой против кампилобактерий подвида venerealis в титре не ниже 1:800 и отрицательные реакции с моноспецифической агглютинирующей сывороткой против кампилобактерий подвида bubulus, нормальной сывороткой крови крупного рогатого скота титре 1:100 и выше, нормальной сывороткой крови кролика в титре 1:50 и выше, не самоагглютинироваться с 0,3%-ным формалинизированным 3%-ным раствором хлористого натрия.

4. Оценка результатов РАВС

4.1. Положительная - агглютинация антигена с оценкой на 3-4 креста в первой и второй, или во всех четырех пробирках с разведениями экстракта вагинальной слизи;

4.2. Отрицательная - агглютинация антигена с оценкой на 1-2 креста в первой и второй, или отсутствие агглютината во всех четырех пробирках с разведениями экстракта вагинальной слизи.

4.3. Данный метод диагностики кампилобактериоза крупного рогатого скота является ориентировочным. При получении положительной РАВС у животных в хозяйстве, благополучном по кампилобактериозу, необходимо провести бактериологическое исследование биологического материала от тех же животных.

Диагноз на кампилобактериоз считается установленным только в случае выделения из биологического материала от крупного рогатого скота культуры кампилобактерий вида fetus - подвидов venerealis и вида jejuni, каждого отдельно или в разных сочетаниях.

5. Порядок предъявления рекламаций

5.1. В случае несоответствия препарата требованиям, указанным в настоящем наставлении, применение антигена данной серии прекращают и, в соответствии с указанием Главного управления ветеринарии Минсельхоза России от 8 мая 1992 года N 22-7/28 "0 порядке предъявления рекламаций на ветпрепараты отечественного производства и закупаемые по импорту", сообщают об этом предприятию-изготовителю. Всероссийскому государственному научно-исследовательскому институту контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов - ВГНКИ (123022, Москва, Д-22, Звенигородское шоссе, 5) и Центральной научно-методической ветеринарной лаборатории - ЦНМВЛ (111622, Москва, Оранжерейная, 23).

Одновременно в ВГНКИ направляют 3 ампулы (флаконам антигена данной серии.

С утверждением настоящего наставления утрачивает силу "Наставление по применению кампилобактериозного (вибриозного) антигена для реакции агглютинации с вагинальной слизью (РАВС)", утвержденное 21.05.1980 г. ГУВ МСХ СССР.

Заместитель руководителя Департамента ветеринарии

В.В. Селиверстов