Методические указания по измерению концентраций пираклостробина в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии МУК 4.1.1950-05 (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 18 января 2005 г.)

Дата введения: 18 апреля 2005 г.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны массовой концентрации пираклостробина в диапазоне 0,05-1 .

Пираклостробин - действующее вещество препарата КАБРИО ТОП, ВДГ, 600 г/кг. фирма производитель БАСФ АГ, Германия.

Метил N-{2-[1-(4-хлорфенил)-1Н-пиразол-3-илоксиметил]фенил}(N-метокси)карбамат (IUPAC)

Мол. масса 387,8

Бесцветное или светло-бежевое кристаллическое вещество без запаха. Температура плавления 63,7-65,2°С. Давление паров при 20°С: мПа. Растворимость в органических растворителях при 20°С : ацетон - более 200, ацетонитрил - более 980; изопропанол - 40; метанол - 140. Растворимость в воде при 20°С - 1,9 .

Пираклостробин стабилен в водной среде при рН 5-7 более 30-ти дней, подвержен в воде фотолизу: DT50 - менее 2-х часов. В почве период полураспада составляет 2-37 дней.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность для крыс >5 000 мг/кг; острая дермальная токсичность для крыс >2000 мг/кг.

Область применения препарата

Пираклостробин - фунгицид из группы стробилуринов контактного и глубинного действия с длительным защитным эффектом. Высокоэффективен против возбудителей ложной и мучнистой настоящей росы. Рекомендуется для борьбы с фитопатогенными грибами на зерновых, овощных и плодовых культурах.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) пираклостробина в воздухе рабочей зоны - 1,0 .

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью , не превышающей , при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерения

Измерения концентраций пираклостробина выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование пираклостробина из воздуха осуществляют на бумажные фильтры "синяя лента", экстракцию с фильтра проводят ацетоном.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 нг.

Определению не мешают компоненты препаративной формы.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы Perkin-Elmer, США)	Номер Госреестра 15945-97
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104
Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ (ЗАО "ОПТЭК", г. Санкт-Петербург) или аспирационное устройство ЭА-1	ТУ 25-11-1414-78
Барометр-анероид М-67	ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1°С. пределы измерения 0-55°С	ТУ 215-73Е
Колбы мерные вместимостью 100 и 1000	ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10	ГОСТ 29227
Пробирки градуированные вместимостью 5 или 10	ГОСТ 1770
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 50 и 500	ГОСТ 1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Пираклостробин с содержанием действующего вещества не менее 99,9% (БАСФ, Германия)
Вода бидистиллированная, деионизованная или перегнанная над	ГОСТ 6709
Кислота уксусная, ледяная	ГОСТ 61-75
Ацетон	ГОСТ 2603
Ацетонитрил для хроматографии, хч	ТУ 6-09-4326-76

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные	ТУ 6-09-2678-77
Воронки конусные диаметром 30-37 мм	ГОСТ 25336
Груша резиновая
Колбы грушевидные на шлифе вместимостью 100	ГОСТ 10394
Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм
Насос водоструйный	ГОСТ 10696
Пробирки центрифужные	ГОСТ 25336
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария	ТУ 25-11-917-74
Стаканы химические, вместимостью 100	ГОСТ 25336
Стекловата
Стеклянные палочки
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100 С 18, зернением 7 мкм
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50-100

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1005.

4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят очистку ацетона и ацетонитрила (при необходимости), подготовку подвижной фазы для ВЭЖХ, приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

7.1. Очистка растворителей

7.1.1. Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 ацетона 10 г и 2 г ).

7.1.2. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 помещают 270 воды, 1 ледяной уксусной кислоты, добавляют 730 ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (п. 7.2.) при скорости подачи растворителя 1 до установления стабильной базовой линии.

7.4. Приготовление градуировочных растворов

7.4.1. Исходный раствор пираклостробина для градуировки (концентрация 1 ). В мерную колбу вместимостью 100 помещают 0,1 г пираклостробина, доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Растворы N 1-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.4.2. Раствор N 1 пираклостробина для градуировки (концентрация 10 ).

В мерную колбу вместимостью 100 помещают 1 исходного раствора пираклостробина с концентрацией 1 (п. 7.4.1.), разбавляют ацетонитрилом до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.

7.4.3. Рабочие растворы N 2-6 пираклостробина для градуировки (концентрация 0.05-1.0 ). В 5 мерных колб вместимостью 100 помещают по 0.5, 1.0, 2.5, 5.0 и 10.0 раствора N 1 с концентрацией 10 (п. 7.4.2.), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 2-6 с концентрацией пираклостробина 0.05, 0.1, 0.25, 0.5 и 1.0 , соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение 10-ти суток.

7.5. Отбор проб

Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

В течение 15 минут последовательно отбирают 3 пробы, для чего воздух аспирируют в течение 5 минут с объемным расходом 1-5 через бумажный фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации пираклостробина на уровне 0,5 ОБУВ для воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 1 воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной камере при +4°С - 7 дней.

7.6. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации пираклостробина в растворе , устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки NN 2-6.

В инжектор хроматографа вводят по 20 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.6.1. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика пираклостробина.

7.6.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США)

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100 С 18, зернением 7 мкм.

Температуре колонки: комнатная

Подвижная фаза: ацетонитрил - вода - уксусная кислота (73:27:0,1, по объему)

Скорость потока элюента: 1

Рабочая длина волны: 276 нм

Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу

Объем вводимой пробы: 20

Ориентировочное время выхода пираклостробина: 6,0-6,33 мин

Линейный диапазон детектирования: 1-20 нг

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор пираклостробина с концентрацией 1,0 , разбавляют ацетонитрилом.

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2-х стандартных растворов различной концентрации. Если значения площади отличаются более, чем на 5% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие стандартные растворы.

8. Выполнение измерений

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 , заливают 10 ацетона, оставляют на 4-5 минут, периодически перемешивая. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 10 .

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35°С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 10 ацетонитрила и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.6.1.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию пираклостробина в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированного фильтра.

9. Обработка результатов измерений

Массовую концентрацию пираклостробина в пробе воздуха рабочей зоны (X, ) рассчитывают по формуле:

, где

С - концентрация пираклостробина в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, ;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

- объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным (давление 760 мм рт. ст., температура 20°С) условиям, .

,

где Т - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град. С,

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.

u - расход воздуха при отборе пробы, ,

t - длительность отбора пробы, мин.

Примечание: Идентификация и расчет концентрации пираклостробина в пробах могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

10. Оформление результатов измерений

За результат анализа принимается среднее арифметическое результатов двух параллельных определений и , расхождение между которыми не превышает значений норматива оперативного контроля сходимости (d): .

, ,

где d - норматив оперативного контроля сходимости, ;

- норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 10%).

Результат количественного анализа представляют в виде:

- результат анализа , характеристика погрешности , %, Р = 0,95 или , Р = 0,95, где

,

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6. 2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

12. Разработчики

Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи Московской обл.).

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Г.Г. Онищенко