Методические указания МУК 4.1.2348-08 "Измерение концентраций фосфата эфира в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов методом капиллярной газожидкостной хроматографии" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 29 февраля 2008 г.)

Методические указания МУК 4.1.2348-08
"Измерение концентраций фосфата эфира в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов методом капиллярной газожидкостной хроматографии"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 29 февраля 2008 г.)

Дата введения: 18 мая 2008 г.

Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии для измерения массовой концентрации фосфата эфира в воздухе рабочей зоны и смывах с кожных покровов операторов в диапазонах 0,17-3,4 , 0,5-5,0 мкг/смыв, соответственно.

Фосфат эфира - смесь моно- и ди-2-этилгексиловых эфиров фосфорной кислоты

2-этилгексиловый эфир фосфорной кислоты

Мол. масса 210

бис(2-этилгексиловый эфир) фосфорной кислоты

Мол. масса 322

Маслообразная жидкость от бесцветного до желтого цвета со специфическим запахом. Температура застывания - менее 10°С, вспышки воспламенения - более 100°С. Не растворима в воде, растворима в большинстве органических растворителей.

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность для крыс - 2 000 мг/кг; острая дермальная токсичность для крыс - 2 500 мг/кг; острая ингаляционная токсичность для крыс - 1550 .

Область применения препарата

Фосфат эфира - неионогенное поверхностно-активное вещество, применяемое в качестве адъюванта совместно с послевсходовым гербицидом против однолетних и многолетних злаковых сорняков.

ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,6 .

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей , при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерений

Измерения концентраций фосфата эфира выполняют методом капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с термоионным детектором (ТИД) после дериватизации вещества обработкой диазометаном.

Отбор проб воздуха осуществляется концентрированием в ацетон.

Смыв с кожных покровов проводят этиловым спиртом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 0,5 нг.

Определению не мешает действующее вещество - клетодим.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Газовый хроматограф "Кристал 2000М" снабженный термоионным детектором с пределом детектирования по фосфору в метафосе г/с, предназначенный для работы с капиллярной колонкой	Номер Госреестра 14516-95
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104
Меры массы	ГОСТ 7328
Микрошприц типа МШ-1М, вместимостью 1	ТУ 2.833.105
Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ (ЗАО "ОПТЭК", г. Санкт-Петербург)	Номер Госреестра 18860-05
Барометр-анероид М-67	ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1°С, пределы измерения 0-55°С	ТУ 215-73Е
Колбы мерные вместимостью 25 и 100	ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10	ГОСТ 29227
Цилиндры мерные с пришлифованной пробкой вместимостью 50	ГОСТ 1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Фосфат эфира (препарат МИКС, Ж (900 г/л), смесь моно- и ди-2-этилгексиловых эфиров фосфорной кислоты, с содержанием основного вещества 90% (фирма "РосАгроХим")	ГСО 7734-99
Азот особой чистоты, из баллона	ГОСТ 9293
Ацетон, осч	ГОСТ 2306

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Имеется в виду "ГОСТ 2603"

Вода дистиллированная	ГОСТ 6709
н-Гексан, хч	ТУ-6-09-3375
Калия гидроксид, хч	ГОСТ 4328
Кислота серная концентрированная, хч	ГОСТ 4204
Лед
Метиламин гидрохлорид, ч	ТУ 6-09-3755-74
Метиловый спирт (метанол), хч	ГОСТ 6995
Мочевина, чда	ГОСТ 6691
Натрий азотистокислый, хч	ГОСТ 4197
Натрий хлористый, хч	ГОСТ 4233
Стекловата
Спирт этиловый ректификованный	ГОСТ Р 51652-2000 или ГОСТ 18300
Эфир диэтиловый (для наркоза)	Фармакопея СССР

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Баня водяная
Бумажные фильтры "красная лента", обеззоленные	ТУ 6-09-2678-77
Вакуумный эксикатор	ГОСТ 9737
Вата хлопковая
Воронка Бюхнера	ГОСТ 9147-80 Е
Воронка делительная вместимостью 100	ГОСТ 9737
Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм	ГОСТ 25336
Генератор водорода
Груша резиновая
Индикаторная бумага универсальная
Колба Бунзена	ГОСТ 56145
Колбы плоскодонные вместимостью 100 и 400-500	ГОСТ 9737
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 50, 100 и 1 000	ГОСТ 9737
Мешалка магнитная ММ-5	ТУ 25-11.834-80
Насос водоструйный	ГОСТ 10696
Поглотительные приборы Рыхтера	ТУ 25-11-1136-75
Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария
Стаканы химические, вместимостью 100, 400 и 2 000	ГОСТ 25 336
Стекловата
Стеклянные палочки
Установка для перегонки растворителей
Холодильник водяной обратный	ГОСТ 9737
Часовые стекла

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.5. Требования к квалификации операторов.

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

ГАРАНТ:

Нумерация разделов приводится в соответствии с источником

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха и относительной влажности не более 80%.

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), получение N-нитрозо-N-метилмочевины (при необходимости), раствора диазометана, приготовление градуировочных растворов, раствора внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка поглотительных приборов и салфеток для отбора проб, отбор проб.

7.1. Очистка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над небольшим количеством и прокаленным карбонатом калия или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.

7.1.2. Очистка гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты, до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.2. Приготовление 40%-ного раствора гидроксида калия

В мерную колбу вместимостью 50 помещают 20 г гидроксида натрия, растворяют в 25-30 дистиллированной воды, доводят водой до метки.

7.3. Получение N-нитрозо-N-метилмочевины

В отсутствии коммерческого препарата нитрозометилмочевины осуществляют его синтез.

Все работы необходимо проводить в вытяжном шкафу!

В круглодонную колбу на шлифе вместимостью 1 , снабженную обратным холодильником, помещают 80 г метиламина гидрохлорида и 300 г мочевины, растворяют содержимое в 400 воды и кипятят 3 ч с обратным холодильником на водяной бане. Раствор в колбе охлаждают до комнатной температуры и добавляют в него 110 г нитрита натрия, охлаждают в бане со льдом, содержащим NaCl, до 0°С и медленно при перемешивании вливают в смесь 600 г льда и 60 концентрированной серной кислоты, помещенную в стакан вместимостью 2 , охлаждаемый снаружи смесью льда с поваренной солью. Выпавшие кристаллы нитрозометилмочевины немедленно отфильтровывают на воронке Бюхнера, хорошо отсасывают под вакуумом и промывают на фильтре ледяной водой.

Внимание! Нитрозометилмочевину хранят в темной склянке в холодильнике, так как под действием света и тепла она может взорваться.

7.4. Получение раствора диазометана

Диазометан взрывоопасен и очень ядовит.

Все работы необходимо проводить в вытяжном шкафу!

В коническую колбу на 100 вносят 20 40%-го раствора КОН и 50 диэтилового эфира, колбу помещают в баню со льдом и охлаждают до температуры 2-5°С. В охлажденную смесь порциями при перемешивании на магнитной мешалке или путем встряхивания вносят 5 г нитрозометилмочевины. Реакционную смесь выдерживают на холоду 10 мин. Затем эфирный слой сливают в чистую коническую колбу вместимостью 100 , добавляют 10-15 гранул КОН и колбу оставляют в бане со льдом на 2,5-3 ч для осушения раствора.

Раствор диазометана в эфире годен к употреблению при хранении в холодильнике в течение 1-2 суток. При хранении сосуды с диазометаном нельзя плотно закрывать!

7.5. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения

7.5.1. Исходный раствор фосфата эфира (концентрация 2,5 ). В мерную колбу вместимостью 100 помещают 0,2 778 г препарата МИКС, Ж (900 г/л), доводят до метки диэтиловым эфиром, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике при 4-6°С в течение месяца.

7.5.2. Раствор внесения (концентрация 10 ).

В мерную колбу вместимостью 100 помещают 0,4 исходного раствора фосфата эфира (приготовленного по п. 7.5.1), доводят до метки ацетоном, тщательно перемешивают, получают раствор с концентрацией фосфата эфира 10 .

Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено".

7.5.3. Исходный раствор метилового эфира фосфата эфира для градуировки (концентрация фосфата эфира 100 мкг/см3). В круглодонную колбу вместимостью 50 помещают 1 исходного раствора фосфата эфира с концентрацией 2,5 , вносят 3 раствора диазометана, выдерживают 30 мин при комнатной температуре. Отдувают растворитель потоком теплого воздуха (помещая колбу на слабо подогретую водяную баню) досуха. Остаток растворяют в гексане порциями по 4-5 , перенося в мерную колбу вместимостью 25 , доводят гексаном до метки, перемешивают. Раствор хранится в холодильнике не более 10-ти дней.

Растворы N 1-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7.5.4. Рабочие растворы N 1-4 метилового эфира фосфата эфира для градуировки (концентрация фосфата эфира 0,5-10 ). В 4 мерные колбы вместимостью 100 помещают по 0,5; 1,0; 5,0 и 10 исходного раствора метилового эфира фосфата эфира (приготовленного по п. 7.5.3), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 1-4 с концентрацией фосфата эфира 0,5; 1,0; 5,0 и 10,0 , соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение 5-ти дней.

7.6. Установление градуировочной характеристики

7.6.1. Воздух рабочей зоны

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость суммы площадей хроматографических пиков производных моно- и диэфиров фосфорной кислоты от концентрации фосфата эфира в растворе , устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 каждого градировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.6.3. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площади пиков производных моно- и диэфиров фосфорной кислоты, рассчитывают их сумму.

7.6.2. Смывы с кожных покровов

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади хроматографического пика производного диэфира фосфорной кислоты от концентрации фосфата эфира в растворе , устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.

В испаритель хроматографа вводят по 1 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.6.3. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площади пика диэфира фосфорной кислоты.

Градуировочный график проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значения площадей отличаются более чем на 11% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

7.6.3. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Газовый хроматограф "Кристалл-2000М", снабженный термоионным детектором

Колонка капиллярная ZB-5, длиной 15 м, внутренним диаметром 0,53 мм, толщина пленки сорбента 0,5 мкм

Температура детектора: 320°С

испарителя: 180°С

Температура термостата колонки программированная. Начальная температура - 80°С, выдержка 2 мин, нагрев колонки со скоростью 10 градусов в мин до температуры 90°С, выдержка 30 с, нагрев колонки со скоростью 10 градусов в мин до температуры 180°С, выдержка 1 мин, нагрев колонки со скоростью 40 градусов в мин до температуры 260°С, выдержка 2 мин.

Скорость газа 1 (азот): 30 см/сек., давление 10,788 кПа, поток 4,0 431 .

Газ 2: деление потока 1:2,473; сброс 10

Хроматографируемый объем: 1

Ориентировочное время выхода производных

- 2-этилгексилового эфира фосфорной кислоты (моноэфир) 7 мин 08-7 мин 10 с

- бис(2-этилгексилового эфира) фосфорной кислоты (диэфир) 12 мин 34-12 мин 39 с

Линейный диапазон детектирования: 0,5-10 нг

7.7. Подготовка поглотительных приборов для отбора проб воздуха

В поглотительные приборы Рыхтера помещают по 10 ацетона, герметизируют заглушками.

7.8. Подготовка салфеток для проведения смыва

Вырезают салфетки (лоскуты) из белой бязи размером 10х10 см, затем их последовательно обрабатывают 5%-ым раствором углекислого натрия (при кипячении), водой до нейтральной реакции промывных вод, 2-х кратно промывают этиловым спиртом, сушат на воздухе при комнатной температуре. До использования салфетки хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

8. Отбор и хранение проб воздуха

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны". Воздух с объемным расходом 1 аспирируют через поглотительный прибор Рыхтера, заполненный 10 ацетона.

Для измерения концентрации фосфата эфира на уровне 0,5 ОБУВ для воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 1,7 воздуха. Срок хранения отобранных проб в холодильнике при температуре 4-6°С - 20 дней.

9. Условия проведения смыва

Смывы проводят в конце работы или после выполнения отдельных операций с открытых и закрытых спецодеждой или другими СИЗ участков тела (лоб, лицо, шея, спина, грудь, предплечье, голень, кисти рук, включая межпальцевые промежутки).

До работы выбирают участок кожи, обрабатывают его с целью удаления загрязнений, фиксируют площадь (не менее 200 ). При необходимости отбирают фоновые смывы.

Смыв проводят способом обмыва фиксированного участка кожи этиловым спиртом, помещая 20 в стеклянную емкостью с металлической крышкой. Тканевой салфеткой, смоченной растворителем, с помощью пинцета (индивидуально) обмывают кожный покров сверху вниз. Операцию повторяют дважды.

Срок хранения отобранных проб смывов, помещенных в герметично закрытые емкости, в холодильнике при температуре 4-6°С - 15 дней.

10. Выполнение измерений

10.1. Воздух рабочей зоны

Содержимое поглотительных приборов переносят в круглодонную колбу вместимостью 50 , поглотитель дополнительно обмывают 2-3 ацетона, который также переносят в колбу, растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40°С досуха. Для полного удаления влаги в колбу вносят 3-4 ацетонитрила, вновь упаривают. К сухому остатку прибавляют 1 раствора диазометана, выдерживают 30 мин при комнатной температуре. Отдувают растворитель (помещая колбу на слабо подогретую водяную баню) досуха. Остаток растворяют в 1 гексана и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.6.3.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площади пиков производных моно- и диэфиров фосфорной кислоты, суммируют их, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию фосфата эфира в хроматографируемом растворе.

10.2. Смывы с кожных покровов

Пробу смыва сливают (через воронку) в колбу для упаривания, с помощью пинцета извлекают салфетку, помещают в конусную химическую воронку, установленную в муфту колбы для упаривания, тщательно отжимают и промывают этиловым спиртом дважды порциями по 10 , предварительно ополаскивая растворителем емкость, в которой находилась проба.

Объединенный раствор упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40°С досуха. Для полного удаления влаги в колбу вносят 3-4 ацетонитрила, вновь упаривают. К сухому остатку прибавляют 1 раствора диазометана, выдерживают 30 мин при комнатной температуре. Отдувают растворитель (помещая колбу на слабо подогретую водяную баню) досуха. Остаток растворяют в 1 гексана и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.6.3.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика производного диэфира фосфорной кислоты, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию фосфата эфира в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 10 , разбавляют гексаном (не более чем в 50 раз).

Перед анализом опытных образцов проводят хроматографирование холостых (контрольных) проб - неэкспонированных поглотительных приборов и экстракта салфетки.

11. Обработка результатов анализа

11.1. Воздух рабочей зоны

Массовую концентрацию фосфата эфира в пробе воздуха (Х), , рассчитывают по формуле:

, где

С - концентрация фосфата эфира в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной суммы площадей хроматографических пиков производных моно- и диэфиров фосфорной кислоты, ;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

- объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20°С), .

, где

Т - температура воздуха при отборе проб (на входе в аспиратор), °С,

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.

u - расход воздуха при отборе пробы, ,

t - длительность отбора пробы, мин.

За результат анализа принимается среднее арифметическое результатов двух параллельных определений и , расхождение между которыми не превышает значений норматива оперативного контроля сходимости (d):

.

, мг/м3, где

d - норматив оперативного контроля сходимости, ;

- норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 15%).

11.2. Смывы с кожных покровов

Массовую концентрацию фосфата эфира в пробе смыва Х, мкг/смыв, рассчитывают по формуле:

, где

С - концентрация фосфата эфира в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика диэфира фосфорной кислоты, ;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

Примечание: Идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

12. Оформление результатов измерений

Результат количественного анализа представляют в виде:

результат анализа в или мкг/смыв (с указанием площади смыва в ), характеристика погрешности , % , Р = 0,95 или

(мкг/смыв, площадь смыва, ), Р = 0,95, где

- абсолютная погрешность.

, (мкг/смыв)

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

содержание фосфата эфира в пробе воздуха рабочей зоны - менее 0,17 ; смыва - менее 0,5 мкг/смыв*

13. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

14. Разработчики

Т.В. Юдина, Н.Е. Федорова, С.К. Рогачева (ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Роспотребнадзора"); Г.Е. Иванов (Роспотребнадзор).

______________________________

* - 0,17 ; 0,5 мкг/смыв - пределы обнаружения при отборе 3 воздуха рабочей зоны; в пробе смыва (фиксированная площадь смыва, 200 ), соответственно.

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко