Методические указания по учету фузариоза колоса и визуальному определению содержания фузариозных зерен в пшенице и ячмене (утв. Министерством сельского хозяйства и продовольствия РФ и Государственным комитетом санитарно-эпидемиологического надзора 20 ноября 1996 г.)

При созревании в годы с избыточным количеством осадков, а также при длительном нахождении колосовых зерновых культур в валках в условиях повышенной относительной влажности воздуха возможно поражение колоса и зерна грибами рода Фузариум, приводящее к возникновению Фузариоза колоса.

Фузариоз вызывает потери урожая, ухудшает качество и семенные достоинства зерна, нередко приводит к накоплению в нем высокотоксичных веществ грибного происхождения (микотоксинов). Наиболее часто зерно загрязняется дезоксиниваленолом (вомитоксином) и зеараленоном. Установлены допустимые уровни содержания этих микотоксинов в зерне. Использование пшеницы и ячменя, загрязненных дезоксиниваленолом и зеараленоном, регламентируется "Инструкцией по выявлению фузариоза колоса и зерна пшеницы и ячменя, контролю содержания в них дезоксиниваленола и зеараленона и использованию такого зерна".

I. Учет фузариоза колоса

Симптомы поражения колоса фузариозом проявляются прежде всего в виде обесцвечивания чешуек колосков и верхней части стебля - они как бы "выцветают". Чаще поражение ограничивается несколькими колосками. Поражаться может либо только верхняя часть колоса, либо - нижняя и средняя части колоса, реже поражается весь колос.

При благоприятных для развития болезни температуре и влажности на пораженных чешуйках появляется налет грибницы белого, розового, оранжевого или красного цвета. На мицелии формируются оранжевые или красноватые подушечки, представляющие собой скопление конидий гриба (спородохии). Первоначально они имеют вид узкой полоски или валика близ линии касания обеих кроющих чешуй в нижней части колоска или на его наружной поверхности. Затем валик увеличивается в длину и ширину, переходит на прицветные чешуйки и может покрыть всю поверхность колоска, плотно склеивая его части.

Иногда в конце вегетации на пораженных колосках образуются перитеции черного цвета, представляющие собой сумчатую стадию гриба Fusarium gramineasum - Gibberella zeae. Присутствие перитециев чаще наблюдается на колосьях ячменя.

Выявление фузариоза колоса зерновых культур осуществляют наблюдениями при маршрутных обследованиях посевов. С этой целью они проводятся на посевах пшеницы и ячменя с начала молочной спелости не реже, чем через 10-14 дней. На каждом участке поля размером 50 га по диагонали просматриваются 20 проб по 50 колосьев. Последний учет проводится перед уборкой в фазу полной спелости. Во все сроки учета определяют распространенность болезни, которая будет соответствовать:

, где

n - количество пораженных колосьев;

N - общее количество учтенных колосьев.

Для определения развития болезни учитывают степень поражения каждого колоса, которую выражают по четырехбалльной шкале:

О - здоровые растения,

1 - поражено до 10% поверхности колоса,

2 - поражено свыше 10 до 25%,

3 - поражено свыше 25 до 50%,

4 - поражено свыше 50% поверхности колоса.

Запись ведут по следующей форме:

Запись результатов маршрутного обследования по выявлению интенсивности поражения:

Наименования бригады, отделения	Наименование севооборота	N поля	N пробы	Число колосьев в пробе	Число колосьев с различной интенсивностью поражения (в баллах)
					0	1	2	3	4	5
			1	50	25	10	5	5	5
			2	50	30	0	10	5	5
			10
Всего:

Развитие болезни (в процентах) вычисляют по формуле:

, где

R - развитие болезни (%);

(а * b) - сумма произведений числа колосьев на соответствующий балл поражения;

N - общее количество учтенных колосьев (здоровых и больных);

К - высший балл шкалы учета.

II. Визуальное определение содержания Фузариозных зерен

Поражение колоса фузариозом всегда приводит к поражению зерна. Степень поражения зависит от вида возбудителя, сроков заражения и от сорта. Наиболее вредоносно заболевание при заражении колоса в фазу цветения. В колосьях, пораженных в этот период, формируются щуплые, белесые зерна, часто с видимым налетом грибницы на поверхности всей зерновки, иногда грибница со спороношением гриба концентрируется в зародышевой части и в бороздке. Такие семена легковесны и при сортировке отвеиваются. При более поздних сроках заражения пораженные зерновки, как оправило, внешне не отличаются от здоровых, но несут в себе скрытую форму инфекции. Частично такие семена могут формироваться также в ранние сроки заражения колоса. Эти зерна остаются в партии товарного зерна и представляют большую опасность, т.к. служат источником инфекции для других семян в период хранения и при посеве. При высеве семян со скрытой формой поражения имеет место гибель всходов или ослабление растений. Такие ослабленные растения более восприимчивы к почвенной и аэрогенной инфекции.

Определение поражения зерна фузариозом основано на визуальном выявлении и учете зерен, которые под воздействием гриба-возбудителя приобретают ряд характерных признаков.

Пшеница

Основные признаки фузариоза зерна пшеницы при раннем поражении следующие:

- пораженные зерна щуплые, морщинистые, с вдавленной глубокой бороздкой и заостренными бочками;

- поверхность зерна белесая, меловидная; наблюдается полная потеря блеска;

- эндосперм рыхлый, крошащийся; резкое ухудшение или полная потеря стекловидности;

- в бороздке и в зародышевой части зерна может присутствовать паутинистый налет мицелия гриба и оранжевые подушечки скопления конидий;

- зародыш зерна нежизнеспособный, на срезе темного цвета. Обычно мицелиальный налет фузариев на зерне бесцветный, но во влажные годы может быть окрашен в розово-малиновый или оранжево-охряный цвета.

При позднем развитии фузариоза внешние признаки поражения проявляются менее четко. Такие зерна по размеру часто не отличаются от нормальных, зачастую вздуты за счет частичного или полного отслаивания оболочек. По остальным перечисленным показателям эти зерна занимают промежуточное положение между здоровыми и пораженными на ранних стадиях созревания.

Фузариозные зерна пшеницы необходимо отличать от обесцвеченных 3 степени и розовоокрашенных нефузариозных (табл. 1).

Основным отличаем обесцвеченного зерна от фузариозного является нормальная форма зерна с выполненной бороздкой, плотный эндосперм, нормально окрашенный жизнеспособный зародыш, отсутствие налета гриба.

Розовоокрашенные зерна нефузариозного происхождения также практически не отличаются от нормальных по форме, размеру, выполненности, блеску и стекловидности, обладают жизнеспособным зародышем (на срезе соломенно-желтого цвета), но имеют на фоне нормально окрашенных оболочек пятна розовых, красных или кирпичных оттенков разной интенсивности на любой части поверхности зерновки, преимущественно в области зародыша. Красящее вещество в таких зернах располагается внутри оболочек.

Сравнительная характеристика фузариозных, обесцвеченных и розовоокрашенных нефузариозных зерен приведена в таблице 1.

Таблица 1

Внешние признаки зерна пшеницы, пораженного фузариозом, а также обесцвеченного и розовоокрашенного нефузариозного

Признаки	Фузариозное зерно	Обесцвеченное нефузаризное зерно (3 степени)	Розовоокрашенное нефузариозное зерно
Форма и выполненность зерна	Большинство зерен морщинистые, щуплые; имеют заостренные бочки и сильно вдавленную бороздку. Реже пораженные зерна - вздутые с отслаивающейся, крошащейся оболочкой	Не отличается от нормально окрашенного зерна может быть слабо морщинистой	Не отличается от нормально окрашенного зерна
Внешний вид, поверхность зерна	Зерно, белесое, меловидное, полная потеря блеска	Оболочки зерна обесцвечены. частичная или полная потеря блеска. Зерно имеет кремовый оттенок за счет просвечивающего эндосперма	На фоне нормально окрашенных оболочек имеются пятна розово-красных оттенков по всей поверхности зерна, чаще в области зародыша. Зерно имеет нормальный блеск
Структура зерна	Значительная или полная потеря стекловидности. Эндосперм рыхлый, крошащийся, с мучнистой консистенцией	Незначительное уменьшение стекловидности по сравнению с нормально окрашенным зерном	Эндосперм по стеклоловидности не отличается от нормально окрашенного зерна
Наличие грибной инфекции и жизнеспособность зародыша	На зародышевой части и в бороздке присутствует мицелий и спородохии гриба. Зародыш нежизнеспособный, на срезе имеет темный цвет.	Зародыш жизнеспособный, на срезе соломенно-желтого цвета. Фузариозная инфекция отсутствует.	Зародыш жизнеспособный, на срезе соломенно-желтого цвета. Фузариозная инфекция отсутствует.

Примечание: Во влажные годы на фузариозном зерне могут наблюдаться пятна розово-малинового или оранжевого-охряного цвета (далее обозначаются как розово-окрашенные фузариозные зерна).

Ячмень

Цветковые пленки пораженных дерновок ячменя обесцвеченные или светло-коричневые, с розово-малиновыми пятнами и налетом гриба, чаще всего в области прикрепления зерна к колосу.

Наряду с розово-малиновым и бесцветным мицелием на некоторых зернах образуются светло-оранжевые (лососевые) подушечки скопление спор фузариев (спородохии).

Нефузариозные зерна по сравнению с нормальными в основной массе щуплые, менее выполненные, более легковесные. При сильном поражении зерно внутри пленок не развивается (пустозерность).

Эндосперм рыхлый, при сильном поражении зерна крошится при раздавливании пальцами.

Зародыш у пораженных зерновок нежизнеспособный, на срезе темного цвета.

При интенсивном поражении фузариозом как на розовоокрашенных, так и на обесцвеченных зернах развивается совершенная стадия грибов в виде поверхностного, четко локализованного сажистого налета. Под лупой налет состоит из отдельных выпуклых черных или темно-фиолетовых бляшек - округлых плодовых тел фузариев (так называемый "скэб"); такой черный налет можно удалить с оболочек.

"Скэб" следует отличать от "оливковой плесени", образуемой грибами родов Альтернария, Кладоспориум и Гельминтоспориум. Темно-бурые пятна "оливковой плесени" размытые, не имеют четких границ. Такие пятна невозможно удалить с зерновки. Они вызваны развитием темно-окрашенных грибов не только на поверхности, но и внутри оболочек.

Нумерация разделов приводится в соответствии с источником

IV. Ход анализа

1. Отбор проб

1.1. От партии отбирают среднюю пробу зерна массой не менее 2 кг по ГОСТ 13586.3-83.

1.2. Из средней пробы, освобожденной от крупной сорной примеси по ГОСТ 13686.2-81, выделяют две навески массой 50,0 +- 0,1 г.

2. Аппаратура

Весы лабораторные общего назначения 3-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 1 кг с допускаемой погрешностью взвешивания не более +-0,01 г по ГОСТ 24104-80;

лупа с кратностью увеличения не менее 4,5х по ГОСТ 25706-83;

доска лабораторная;

скальпель или лезвие бритвы;

совочек;

чашки для навесок.

3. Определение

3.1. Ее навески массой 50+-0,1 г в условиях хорошей освещенности выделяют в соответствии с таблицей 1 зерна с признаками фузариоза, в том числе с розово-малиновым или оранжево-охряным окрашиванием.

3.2. В случае обнаружения сомнительных зерен, которые могут быть отнесены к обесцвеченным 3 степени, с помощью лупы определяют наличие мицелия и спородохий в области зародыша и в бороздке, а также делают срез зародыша и устанавливают его окраску. Зерна относят к фузариозным при обнаружении совокупности признаков, указанных в таблице 1.

3.3. Фузариозные зерна, выделенные из каждой навески, взвешивают на весах с точностью до 0,01 г.

4. Вычисление результатов

4.1. Содержание фузариозных зерен выражают в процентах.

4.2. За окончательный результат принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений с точностью до второго десятичного знака. Если третий десятичный знак равен 5, то второй десятичный знак увеличивают на единицу.

4.3. Расхождения между результатами параллельных определений, а также при контрольных определениях не должны превышать величины, указанной в таблице 2.

4.4. Если расхождения результатов двух параллельных определений превышают допустимые, дополнительно анализируют третью навеску. Затем вычисляют среднее арифметическое результатов тех двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает значений, установленных в таблице 2.

Таблица 2

Содержание фузариозных зерен, %	Допустимые расхождения при параллельных и контрольных определениях, в %
До 0,30 включ.	0,10
Св. 0,30 до 0,60	0,20
" 0,60 " 1,00"	0,35
"1,00 " 3,6"	0,50
"3,00 "6,0"	0,85
"6,0 "10,00"	1,25

4.5. В документах о качестве зерна (карточка анализа зерна; удостоверение о качестве зерна и др.) проставляют среднее арифметическое значение общего содержания фузариозных зерен в графе "особые отметки" с точностью до второго десятичного знака. Дополнительно отмечают наличие в пшенице розовоокрашенных фузариозных зерен.

Первый заместитель Министра сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации

Г.А. Романенко

Заместитель Председателя Госкомсанэпиднадзора России

А.А. Монисов

Согласовано:

Зам. директора Института питания РАМН чл.-корр. РАМН, проф.

В.А. Тутельян

Зам. начальника Государственной хлебной инспекции Российской Федерации

В.А. Мальцев

Зам. начальника департамента химизации и защиты растений Минсельхозпрода России

П.Г. Фоменко

Зам. начальника департамента ветеринарии Минсельхозпрода России

В.В. Селиверстов

Академик-секретарь отделения защиты растений Россельхозакадемии, академик Россельхозакадемии

В.А. Захаренко