Приложение 1. Тест-вирусы и методы их культивирования

Приложение 1
к Р 4.2.3647-20

Тест-вирусы и методы их культивирования

1. Тест-вирусы получают из национальных или из международных коллекций вирусов:

Вирус полиомиелита 1 типа (вакцинный штамм Sab in (LSc-2ab), РНК-содержащий вирус, не имеющий оболочки, из семейства Picornaviridae;

Аденовирус 5 типа, ДНК - содержащий вирус, не имеющий оболочки, из семейства Adenoviridae.

2. Культивирование вирусов.

Исходный вирус - это вирус, полученный из референс-центров (из национальных или международных коллекций вирусов), размноженный в объемах, достаточных для длительной работы с данным пассажем, при минимальных количествах пассажей. Хранится в малых объемах при -70°С или в жидком азоте*.

Тест-вирусная суспензия - вирусная суспензия, полученная из исходного вируса и используемая для определения вирулицидных свойств дезинфектанта.

Исходный вирус размножают в чувствительных клетках (лабораторных животных - млекопитающих или птицах и др.), продуцирующих вирус в высоких титрах. Клеточный детрит удаляют центрифугированием при низких оборотах (1000 об./5 мин). Этот материал называют ВС. Ее используют неразведенной.

Предполагается, что минимальный титр ВС - по крайней мере . В любом случае он должен быть достаточно высоким, чтобы можно было получить снижение титра на .

Полиовирус размножают в перевиваемой культуре клеток RD и НЕр-2 или в других чувствительных клеточных культурах (4647, Vero и т.д.). Для получения ВС культуру клеток, инфицированную вирусом полиомиелита на стадии 100%-го поражения монослоя, вызванного цитопатическим действием вируса, трехкратно замораживают и оттаивают. После удаления разрушенных клеток центрифугированием полученную суспензию используют в экспериментах.

Аденовирус размножают в перевиваемой клеточной культуре НЕр-2, 4647 и в других чувствительных клеточных культурах. Методика получения ВС аналогична вышеописанной, за исключением того, что перед процедурой разрушения клеток методом замораживания-оттаивания проводят замену культуральной среды на не содержащую сыворотки и добавляют ее в меньшем объеме.

______________________________

* Руководство по вирусологическим исследованиям полиомиелита, ВОЗ, Женева, М., 1998.