Методические указания по измерению концентраций s-[2][(4-Амино-2-метил-5-пиримидинил)метил[формиламино]-1-[2-(фосфонокси) этил]-1-пропениловый эфир фенилкарботионовой кислоты (Бенфотиамина) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии МУК 4.1.1519-03 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Методические указания по измерению концентраций s-[2][(4-Амино-2-метил-5-пиримидинил)метил[формиламино]-1-[2-(фосфонокси)этил]-1-пропениловый эфир фенилкарботионовой кислоты (Бенфотиамина) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
МУК 4.1.1519-03
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

М.м. 466,5

Бенфотиамин - белый кристаллический порошок со слабым запахом, с температурой плавления 170°C (с разложением). Плохо растворим в воде, мало растворим в 95% спирте, растворим в 1% растворе натрия гидроксида, ледяной уксусной кислоте, умеренно растворим в метаноле.

В воздухе находится в виде аэрозоля и паров.

Бенфотиамин не обладает местнораздражающим действием на кожу, однако проявляет слабое раздражающее действие на слизистые оболочки глаз.

ОБУВ в воздухе рабочей зоны 0,1 .

Характеристика метода

Методика основана на применении высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр и в 90% метанол.

Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме (10 мкл) - 0,025 мкг.

Нижний предел измерения в воздухе 0,05 (при отборе 50 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций вещества в воздухе от 0,05 до 0,6 .

Определение избирательно на стадиях сушки, просеивания, хранения и фасовки вещества.

Определению не мешают остаточные количества растворителей.

Суммарная погрешность измерения не превышает .

Время выполнения измерения, включая отбор проб, 2 часа.

Приборы, аппаратура, посуда

Жидкостный хроматограф высокого давления "Милихром-1" или другой модели с УФ-детектором.

Хроматографическая колонка размером 64*2 мм, заполненная сорбентом "Силасорб ".

Весы лабораторные ВЛА-200, кл., ГОСТ 24104-88 Е.

Аспирационное устройство, ГОСТ 17.2.6.01-86.

Фильтродержатели ТУ 95.72.05-77.

Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74 Е.

Пипетки вместимостью 1, 2, 5 мл, ГОСТ 29227-91.

Пробирки колориметрические с пришлифованными пробками вместимостью 10 мл, ГОСТ 25336-82Е.

Поглотительные приборы Рыхтера 7Р, ТУ-25.111.081-75.

Воронки химические диаметром 30 мм, ГОСТ 25336-82Е.

Вакуумная установка или роторный испаритель ИР-1, ТУ 25-11-91774.

Секундомер, ГОСТ 5072-97.

Линейка измерительная металлическая, ГОСТ 8309-75.

Лупа измерительная ЛИ-3-10Х, ГОСТ 8309-75.

pH-метр ЭВ-74.

Водяная баня, ТУ 64-1-2850-76.

Дистиллятор, ТУ 61-1-721-79.

Реактивы, растворы, материалы

Бенфотиамин, ФС 42-2379-85.

Метиловый спирт, ГОСТ 6995-77, 90% раствор.

Ортофосфорная кислота, ГОСТ 6532-80.

Элюент: к 100 мл 90% спирта метилового добавляют около 0,2 мл ортофосфорной кислоты до pH 2,8.

Стандартный раствор N 1 с концентрацией 500 мкг/мл бенфотиамина готовят растворением 0,0500 г вещества в 90% метаноле в мерной колбе вместимостью 100 мл. Раствор устойчив в течение двух недель при хранении в холодильнике.

Стандартный раствор N 2 с концентрацией 20 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 90% метанолом. Раствор устойчив в течение двух недель при хранении в холодильнике.

Градуировочные растворы, с концентрацией 0.5-1-2-3-4-6 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 2 90% метанолом. Растворы применяют свежеприготовленными.

5 мл градуировочных стандартных растворов, что соответствует 2,5-5-10-15-20-30 мкг бенфотиамина, переносят в грушевидные колбы и упаривают досуха под вакуумом при температуре 50-60°C. Сухой остаток растворяют в 1,0 мл элюента и хроматографируют.

Фильтр АФА-ХА-10, ТУ 95-743-80.

Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 5 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ХА-10 и поглотительный сосуд Рыхтера 7 Р, содержащий 10 мл 90% метанола. Поглотительный сосуд охлаждают смесью льда с хлористым натрием. Для измерения 1/2 ОБУВ следует отобрать 50 л воздуха. Пробы хранят в закрытых сосудах в течение суток в холодильнике.

Подготовка к измерению

Хроматографическая колонка промышленного изготовления.

Инжектируют в хроматограф от 0,025 до 0,3 мкг бенфотиамина из градуировочных растворов при максимальном объеме вводимой пробы 10 мкл.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

Температура термостата колонки	20°C
Скорость подачи элюента	50 мкл/мин
Чувствительность измерения детектора	1,6
Длина волны УФ-детектора	240 нм
Скорость движения диаграммной ленты	180 мм/мин
Диапазон измерения самописца	100 мВ
Максимальный объем вводимой пробы	10 мкл
Время удерживания бенфотиамина	4 мин 33 сек.

На основании полученных хроматограмм строят градуировочный график, выражающий зависимость площади пиков от количества вещества в хроматографируемом объеме пробы (мкг).

Построение градуировочного графика необходимо проводить не менее чем по 6 точкам, выполняя 5 параллельных измерений для каждого раствора. Проверку градуировочного графика следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

Проведение измерения

Фильтр и содержимое поглотительного сосуда помещают в колориметрическую пробирку с пришлифованной пробкой, доводят объем до 10 мл 90% метанолом и оставляют при комнатной температуре на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают и удаляют. Степень десорбции вещества с фильтра 96%. Полученный раствор сливают в грушевидную колбу и упаривают досуха под вакуумом при температуре 50-60°C. Сухой остаток растворяют в 1,0 мл спирта метилового 90%, подкисленного кислотой о-фосфорной до pH 2,8.

Параллельно с анализом проб проводят хроматографирование раствора, полученного обработкой чистого фильтра.

Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях по отношению к тому же элюенту, что и при построении градуировочного графика.

Количественное содержание бенфотиамина (в мкг) в хроматографируемом объеме проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Расчет концентрации

Концентрацию бенфотиамина (C, ) в воздухе вычисляют по формуле:

, где

a - количество вещества, в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

б - хроматографируемый объем пробы, взятый для анализа, мл;

в - общий объем раствора пробы, мл;

v - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (Приложение 1).

Главный Государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко