Методические указания по измерению концентраций 2-[4-(2-Хлор-1,2-дифенилэтенил)фенокси]-N,N-диэтил-2-гидрокси-1,2,3-пропа нтрикарбоксилат этанамина (Кломифен цитрата) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии МУК 4.1.1567-03 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Методические указания по измерению концентраций 2-[4-(2-Хлор-1,2-дифенилэтенил)фенокси]-N,N-диэтил-2-гидрокси-1,2,3-пропантрикарбоксилат этанамина (Кломифен цитрата) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
МУК 4.1.1567-03
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

	М.м. 598,1

Кломифен цитрат - белый или белый с кремовым оттенком кристаллический порошок с температурой плавления 149-151°C. Мало растворим в воде, умеренно растворим в этаноле и метаноле.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Обладает раздражающим действием на кожу и слизистые, легко проникает через неповрежденные кожные покровы, оказывая специфические системные эффекты. 1 класс опасности.

Концентрация кломифен цитрата в воздухе рабочей зоны не должна превышать 0,001 .

Характеристика метода

Методика основана на применении высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр АФА-ХА-20.

Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме (50 мкл) - 0,25 мкг.

Нижний предел измерения в воздухе - 0,001 (при отборе 1000 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций вещества в воздухе от 0,001 до 0,02 .

Определение избирательно на стадиях сушки, просеивания, хранения и фасовки вещества.

Определению не мешают остаточные количества растворителей.

Суммарная погрешность измерения не превышает .

Время выполнения измерения, включая отбор проб, - 4 часа.

Приборы, аппаратура, посуда

Микроколоночный жидкостный хроматограф "Милихром" или другие модели с УФ-детектором.

Хроматографическая колонка размером 250х8,2 мм, заполненная твердым сорбентом силикагель "для хроматографии" фирмы "Zorbak" с размером частиц 4,0-5,0 мкм, диаметром пор 6-60 нм, устойчивым в водных растворах в интервале pH I-II.

Весы аналитические ВЛА-200, 2-го кл., ГОСТ 24104-88Е.

Аспирационное устройство, ГОСТ 17.2.6.01-86.

Фильтродержатели, ТУ 95.72.05-77.

Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74Е.

Колбы круглодонные вместимостью 50 мл, ГОСТ 19908-90.

Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5, 10 мл, ГОСТ 29227-91.

Пробирки колориметрические с пришлифованными пробками вместимостью 10 мл, ГОСТ 25336-82Е.

Стаканы химические вместимостью 25 мл, ГОСТ 19908-90.

Воронки химические диаметром 30 мм, ГОСТ 25336-82Е.

Роторный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917.76.

Секундомер, ГОСТ 5072-97.

Линейка измерительная металлическая, ГОСТ 8309-75.

Лупа измерительная ЛИ-3-10Х, ГОСТ 8309-75.

pH-метр ЭВ-74.

Водяная баня, ТУ 64-1-2850-76.

Дистиллятор, ТУ 61-1-721-79.

Реактивы, растворы, материалы

Кломифен цитрат, ВФС 42-1188-88.

Метиловый спирт, х.ч., ГОСТ 6995-77.

Стандартный раствор N 1 с концентрацией 200 мкг/мл кломифен цитрата готовят растворением 0,0200 г вещества в метаноле в мерной колбе вместимостью 100 мл. Раствор устойчив в течение двух недель при хранении в холодильнике.

АФА-ХА-20, ТУ 85-743-80.

Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 100 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ХА-20. В патрон за фильтром следует установить металлическую сетку. Для определения 0,001 следует отобрать 1000 л воздуха. Пробы хранят в течение суток в холодильнике.

Подготовка к измерению

Хроматографическую колонку промышленного изготовления, заполненную силикагелем "для хроматографии", промывают в течение 10-15 мин метиловым спиртом до получения стабильной нулевой линии.

Градуировочные растворы с концентрацией от 5 до 100 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением основного стандартного раствора метанолом.

50 мкл каждого раствора вводят в инжектор хроматографа.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

Температура термостата колонки	50°C
Скорость подачи элюента	0,7 мл/мин
Чувствительность измерения детектора	0,4
Длина волны УФ-детектора	298 нм
Скорость движения диаграммной ленты	1 мм/мин
Диапазон измерения самописца	100 мВ
Максимальный объем вводимой пробы	50 мкл
Время удерживания кломифен цитрата	15 мин 45 сек.

На основании полученных хроматограмм строят градуировочный график, выражающий зависимость площади пиков от количества вещества в хроматографируемом объеме пробы (мкг).

Построение градуировочного графика необходимо проводить не менее чем по 5 точкам, выполняя 5 параллельных измерений для каждого раствора. Проверку градуировочного графика следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

Проведение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в грушевидную колбу вместимостью 50 мл, приливают 10 мл метанола и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой. Затем фильтр тщательно отжимают и удаляют. Степень десорбции вещества с фильтра - 98,4%.

Отгоняют метанол при 70°C в роторном испарителе досуха. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл метанола.

Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях по отношению к тому же элюенту, что и при построении градуировочного графика.

Количественное содержание кломифен цитрата в хроматографируемом объеме (мкг) проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Расчет концентрации

Концентрацию кломифен цитрата (C, ) в воздухе вычисляют по формуле:

, где:

a - количество вещества в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

- хроматографируемый объем пробы, взятый для анализа, мл;

в - общий объем раствора пробы, мл;

V - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям, л (Приложение 1).

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко