Методические указания по спектрофотометрическому измерению концентраций 3beta-холест-5,7-диен-3-ола бензоата (бензоата-7-дегидрохолестерина) и 3beta-холест-5-ен-3-ола бензоата (бензоата холестерина) в воздухе рабочей зоны МУК 4.1.1571-03 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания по спектрофотометрическому измерению концентраций -холест-5,7-диен-3-ола бензоата (бензоата-7-дегидрохолестерина) и -холест-5-ен-3-ола бензоата (бензоата холестерина) в воздухе рабочей зоны
МУК 4.1.1571-03
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

		М.м. 488,76
	Бензоат 7-дегидрохолестерин

		М.м. 490,78
	Бензоат холестерина

Бензоат 7-дегидрохолестерин - белый кристаллический порошок без запаха и вкуса. Температура плавления - 134°C. Растворим в жирах и органических растворителях, нерастворим в воде.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Бензоат 7-дегидрохолестерин является малотоксичным веществом, не обладает раздражающим действием на кожу и слизистые оболочки глаз кроликов. Обладает специфическим влиянием на липидный обмен.

ПДК бензоата 7-дегидрохолестерина в воздухе - 1 . 3 класс опасности.

Бензоат холестерина - белый кристаллический порошок без запаха и вкуса. Температура плавления - 147°C. Растворим в жирах и органических растворителях, нерастворим в воде.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Бензоат холестерина является малотоксичным веществом, не обладает раздражающим действием на кожу и слизистые оболочки глаз кроликов. Специфическое влияние на липидный обмен менее выражено.

ПДК бензоата холестерина в воздухе - 4 . 3 класс опасности.

Характеристика метода

Определение основано на образовании окрашенного комплексного соединения при взаимодействии холестерина с уксусным ангидридом и серной кислотой в хлороформе с последующим фотометрическим измерением продукта реакции при длине волны 675 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания бензоата 7-дегидрохолестерина в анализируемом объеме раствора - 40 мкг.

Нижний предел измерения бензоата 7-дегидрохолестерина в воздухе - 0,5 (при отборе 80 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций бензоата 7-дегидрохолестерина в воздухе от 0,5 до 10,0 .

Определению не мешают: остаточные количества органических растворителей; мешают: холестерин и бензоат холестерина.

Нижний предел измерения содержания бензоата холестерина в анализируемом объеме раствора - 80 мкг.

Нижний предел измерения бензоата холестерина в воздухе - 2 (при отборе 40 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций бензоата холестерина в воздухе от 2 до 20 .

Определению не мешают: остаточные количества органических растворителей; мешают: холестерин и бензоат 7-дегидрохолестерин.

Суммарная погрешность измерения не превышает .

Приборы, аппаратура, посуда

Спектрофотометр Specord M-40, Carl Zess.

Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 24104-88 Е.

Аспирационное устройство, модель 822, ТУ 64-1-862-82.

Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74Е

Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 29227-91.

Пробирки колориметрические с пришлифованными пробками вместимостью 10 мл, ГОСТ 25336-82Е.

Бюксы вместимостью 10 мл, ГОСТ 7148-70.

Роторный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Колбы грушевидные вместимостью 25 мл, ГОСТ 9737-70.

Воронки химические, ГОСТ 86-13-75.

Баня водяная лабораторная, МРТУ 64-186-23-68.

Стеклянные палочки.

Реактивы, растворы, материалы

Бензоат 7-дегидрохолестерин, СТП 0431-507-92.

Бензоат холестерина, содержание основного вещества не менее 99,0%.

Спирт этиловый, ректификат, ГОСТ 5963-67, 95% и в смеси с хлороформом в соотношении (3:2).

Кислота серная, ГОСТ 4204-77, х.ч., 1 н раствор.

Хлороформ, ГОСТ 215-74, х.ч.

Уксусный ангидрид, ГОСТ 5815-77, ч.

Стандартный раствор N 1 бензоата 7-дегидрохолестерина концентрацией 1000 мкг/мл готовят растворением 0,1400 г вещества в смеси этанол-хлороформ (3:2) в мерной колбе вместимостью 100 мл. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

Стандартный раствор N 2 с концентрацией бензоат 7-дегидрохолестерина 200 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 смесью этанол-хлороформ (3:2). Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

Стандартный раствор N 1 бензоата холестерина концентрацией 1000 мкг/мл готовят растворением 0,1000 г вещества в смеси этанол-хлороформ (3:2) в мерной колбе вместимостью 100 мл. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

Стандартный раствор N 2 с концентрацией бензоата холестерина 200 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 смесью этанол-хлороформ (3:2). Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

Фильтры АФА-ВП-10, ТУ 85-743-80.

Отбор проб воздуха

Воздух с объемным расходом 10 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-10. Для измерения 1/2 ПДК бензоат 7-дегидрохолестерина следует отобрать 80 л воздуха, для измерения 1/2 ПДК бензоат холестерина - 40 л воздуха.

Подготовка к измерению

Градуировочные растворы (устойчивы в течение 7 часов) готовят согласно таблице.

Таблица

Шкала градуировочных растворов бензоат 7-дегидрохолестерина

N стандарта	Стандартный раствор N 2, мл	Этанол-хлороформ (3:2), мл	Содержание бензоат 7-дегидрохолестерина в градуировочном растворе, мкг
1	0,00	5,00	0
2	0,20	4,80	40
3	0,40	4,60	80
4	0,80	4,20	160
5	1,60	3,40	320
6	3,20	1,80	640
7	4,00	1,00	800

Таблица

Шкала градуировочных растворов бензоат холестерина

N стандарта	Стандартный раствор N 2, мл	Этанол-хлороформ (3:2), мл	Содержание бензоат холестерина в градуировочном растворе, мкг
1	0,00	5,00	0
2	0,40	4,60	80
3	0,80	4,20	160
4	1,20	3,80	240
5	1,60	3,40	320
6	3,20	1,80	640
7	4,00	1,00	800

Градуировочные растворы перемешивают, затем переносят в грушевидные колбы и упаривают досуха под вакуумом при температуре водяной бани 60-70°C. Сухой остаток растворяют в 4 мл хлороформа, добавляют по 1 мл уксусного ангидрида и 0,1 мл концентрированной серной кислоты и перемешивают. Через 20 минут после стояния пробирок в темном месте проводят фотометрирование.

Измеряют оптическую плотность полученных растворов при длине волны 675 нм. Измерения проводят в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм по отношению к контрольной пробе, не содержащей определяемого вещества (раствор N 1 по таблице).

Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им величины содержания вещества в градуировочном растворе (мкг).

Проверка градуировочного графика проводится 1 раз в 3 месяца или в случае использования новой партии реактивов.

Проведение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в бюкс, заливают 5 мл растворителя (смеси этанол-хлороформ в соотношении 3:2) и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают и удаляют. Степень десорбции бензоата 7-дегидрохолестерина с фильтра - 96%, а бензоат холестерина - 96,7%.

Раствор переносят в грушевидную колбу и упаривают досуха под вакуумом при температуре водяной бани 60-70°C. Сухой остаток растворяют в 4 мл хлороформа, добавляют по 1 мл уксусного ангидрида и 0,1 мл концентрированной серной кислоты и перемешивают. Через 20 минут после стояния пробирок в темном месте проводят фотометрирование. Оптическую плотность полученных растворов пробы измеряют аналогично градуировочным растворам по сравнению с контролем, который готовят одновременно и аналогично пробе, используя чистый фильтр.

Количественное определение содержания веществ (в мкг) в анализируемой пробе проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Расчет концентрации

Концентрацию веществ "C" в воздухе (в ) вычисляют по формуле:

, где

a - содержание вещества в анализируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

V - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко