Приложение Д (обязательное). Проверка чувствительности культуры микроводоросли Chlorella vulgaris

Приложение Д
(обязательное)

Проверка чувствительности культуры микроводоросли Chlorella vulgaris

Перед экспериментом проверяют чувствительность культуры микроводоросли воздействием эталонного токсиканта, в качестве которого используют калий двухромовокислый .

Исходный раствор бихромата калия готовят в концентрации 1 . Этот раствор может храниться в холодильнике до 4 месяцев. Рабочие растворы эталонного токсиканта для проведения анализа чувствительности культуры микроводоросли перед биотестированием готовят посредством разбавления исходного раствора дистиллированной водой и в дальнейшем не хранят.

Определение диапазона реагирования культуры микроводоросли на эталонный токсикант проводят в соответствии с процедурой биотестирования, (см. 9.7) в четырех повторностях для каждой концентрации токсиканта (0,1; 0,2; 0,4; 0,8; 1,6 ). Для получения указанных концентраций исходный раствор бихромата калия 1 разбавляют в 6,25 раза (1 смешать с 5,25 дистиллированной воды) для получения промежуточного раствора 160 .

Затем в 1 пенициллиновый флакон вносят 5 приготовленного раствора модельного токсиканта (160 ), в 4 других - по 2,5 дистиллированной воды. Путем последовательного переноса растворов из первого флакона во второй, из второго в третий и т.д. по 2,5 получают ряд разбавлений раствора кратный двум.

После этого в 6 стаканов с одинаковым объемом 48,5 дистиллированной воды вносят: в первый - 0,5 дистиллированной воды, а в остальные - по 0,5 всех пяти приготовленных разбавлений бихромата калия. В результате получают 6 растворов с концентрацией бихромата калия 0 (контрольная серия), 1,6; 0,8; 0,4; 0,2; 0,1 соответственно.

В завершение во все 6 стаканов добавляют по 1 культуры микроводоросли с оптической плотностью 0,050 отн. ед., приготовленной путем разбавления маточной культуры 100%-ной средой Тамия. Каждую полученную культуру разливают в 4 пенициллиновых флакона, закрывают пробками с отверстием и устанавливают в культиватор КВМ-07.

Культуру микроводоросли можно считать пригодной для биотестирования, а ее чувствительность соответствующей требованиям, если концентрация калия двухромовокислого, вызвавшая 50% подавление роста культуры микроводоросли в сравнении с контрольной серией после ч экспозиции, находится в интервале от 0,2 до 0,8 . При этом среднее арифметическое значение (из четырех повторностей) оптической плотности культуры микроводоро