Приложение Д (обязательное). Проверка чувствительности культуры микроводоросли Chlorella vulgaris

Приложение Д
(обязательное)

Проверка чувствительности культуры микроводоросли Chlorella vulgaris

Перед экспериментом проверяют чувствительность культуры микроводоросли воздействием эталонного токсиканта, в качестве которого используют калий двухромовокислый .

Исходный раствор бихромата калия готовят в концентрации 1 . Этот раствор может храниться в холодильнике до 4 месяцев. Рабочие растворы эталонного токсиканта для проведения анализа чувствительности культуры микроводоросли перед биотестированием готовят посредством разбавления исходного раствора дистиллированной водой и в дальнейшем не хранят.

Определение диапазона реагирования культуры микроводоросли на эталонный токсикант проводят в соответствии с процедурой биотестирования, (см. 9.7) в четырех повторностях для каждой концентрации токсиканта (0,1; 0,2; 0,4; 0,8; 1,6 ). Для получения указанных концентраций исходный раствор бихромата калия 1 разбавляют в 6,25 раза (1 смешать с 5,25 дистиллированной воды) для получения промежуточного раствора 160 .

Затем в 1 пенициллиновый флакон вносят 5 приготовленного раствора модельного токсиканта (160 ), в 4 других - по 2,5 дистиллированной воды. Путем последовательного переноса растворов из первого флакона во второй, из второго в третий и т.д. по 2,5 получают ряд разбавлений раствора кратный двум.

После этого в 6 стаканов с одинаковым объемом 48,5 дистиллированной воды вносят: в первый - 0,5 дистиллированной воды, а в остальные - по 0,5 всех пяти приготовленных разбавлений бихромата калия. В результате получают 6 растворов с концентрацией бихромата калия 0 (контрольная серия), 1,6; 0,8; 0,4; 0,2; 0,1 соответственно.

В завершение во все 6 стаканов добавляют по 1 культуры микроводоросли с оптической плотностью 0,050 отн. ед., приготовленной путем разбавления маточной культуры 100%-ной средой Тамия. Каждую полученную культуру разливают в 4 пенициллиновых флакона, закрывают пробками с отверстием и устанавливают в культиватор КВМ-07.

Культуру микроводоросли можно считать пригодной для биотестирования, а ее чувствительность соответствующей требованиям, если концентрация калия двухромовокислого, вызвавшая 50% подавление роста культуры микроводоросли в сравнении с контрольной серией после ч экспозиции, находится в интервале от 0,2 до 0,8 . При этом среднее арифметическое значение (из четырех повторностей) оптической плотности культуры микроводоросли в контрольной серии за этот период культивирования должно достигнуть величины отн. ед. Этот же показатель может быть использован для текущего контроля состояния культуры микроводоросли.

При несоответствии этому результату следует проверить точность приготовления растворов эталонного токсиканта и условия проведения биотестирования. Если ошибки при проведении экспериментов исключены, необходимо сменить культуру т.е. взять новую культуру микроводоросли Chlorella vulgaris с паспортом в учреждениях, специализирующихся на ведении культур микроводорослей или осуществить пересев микроводоросли.

Если значения оптической плотности суспензии микроводоросли в контрольном варианте после 45 ч культивирования регулярно не достигает или существенно превышает отн. ед., следует, соответственно, увеличить или уменьшить интенсивность света в культиваторе КВМ-07.

Проверку пригодности культуры микроводоросли к биотестированию проводят один раз в квартал. После продолжительного хранения без пересева состояние маточной культуры микроводоросли проверяют непосредственно перед анализом.