Методические указания МУК 4.1.2333-08 "Измерение концентраций диквата в атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 15 февраля 2008 г.)

Методические указания МУК 4.1.2333-08
"Измерение концентраций диквата в атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 15 февраля 2008 г.)

Дата введения: 10 апреля 2008 г.
Введены впервые

Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для измерения массовой концентрации диквата в атмосферном воздухе в диапазоне 0,003-0,06 .

Дикват

1,1'-этилен-2,2'-дипиридилий; 9,10-дигидро-8а,10а-диазонийфенан-трен; (ИЮПАК)

Мол. масса 184,2

1,1'-этилен-2,2'-дипиридилий используется в виде дибромида:

1,1-этилен-2,2-дипиридилий дибромид (ИЮПАК).

Мол. масса 344,1

Химически чистый дикват дибромид представляет собой гигроскопическое белое кристаллическое вещество с температурой разложения 300°С. Давление паров: менее 0,01 мПа (моногидрат). Коэффициент распределения н-октанол/вода: (25°С).

Хорошо растворим в воде (700 ), плохо в спиртах и практически нерастворим в неполярных органических растворителях.

Агрегатное состояние в воздушной среде - аэрозоль и пары.

Вещество стабильно в нейтральном и кислом растворах, но легко гидролизуется в щелочной среде. Разлагается под действием УФ-облучения ( менее недели).

Сильно связывается почвами и быстро разрушается почвенными микроорганизмами ( неадсорбированного диквата менее недели).

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность для крыс - 408, для мышей - 234 мг/кг; острая дермальная токсичность для крыс > 800 мг/кг. Вызывает раздражение кожи и глаз у кроликов. Мало токсичен для птиц, рыб, пчел, дождевых червей и водорослей.

ОБУВ в атмосферном воздухе - 0,004 .

Область применения препарата

Дикват дибромид - контактный гербицид сплошного действия. Используется для уничтожения однолетних широколистных сорняков в виноградниках, садах, посевах овощных и декоративных культур, водной растительности в водоемах, а также для предуборочной десикации семенников сахарной свеклы, клевера, сорго, подсолнечника, льна, хлопчатника, рапса, сои, риса. Применяется в дозах от 0,4 до 1,0 кг/га.

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей , при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерений

Измерения концентраций диквата выполняют методом ион-парной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование диквата из воздуха осуществляют на последовательно соединенные фильтр "синяя лента" и поглотитель Рыхтера, заполненный дистиллированной водой, экстракцию с фильтров проводят водой.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 нг. Средняя полнота извлечения - 94,1%.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы Perkin-Elmer, США)	Номер Госреестра 15945-97
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104
Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ (ЗАО "ОПТЭК", г. Санкт-Петербург)	ГОСТ Р 51945-2002 Номер Госреестра 18860-05
Барометр-анероид М-67	ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1°С, пределы измерения 0-55°С	ТУ 215-73Е
Колбы мерные вместимостью 100 и 1000	ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10	ГОСТ 29227
Пробирки градуированные вместимостью 5 или 10	ГОСТ 1770
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 100 и 500	ГОСТ 1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Дикват дибромид (моногидрат) с содержанием д.в. 99,7% (50,9% катионов) (Зенека, Великобритания)
Аммония хлорид, х.ч.	ГОСТ 3773
Ацетонитрил для хроматографии, х.ч.	ТУ 6-09-4326-76
Вода дистиллированная или деионизованная	ГОСТ 6702
Диэтиламин для хроматографии в ампулах	ТУ 6-09-4356-77
Кислота ортофосфорная, х.ч.
Натрий хлористый, х.ч.	ГОСТ 4233
1-октансульфонат натрия

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с	ТУ 64-1-2851-78
Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные	ТУ 6-09-2678-77
Воронка Бюхнера	ГОСТ 9147
Воронки конусные диаметром 40-45 мм	ГОСТ 25336
Груша резиновая
Колба Бунзена	ГОСТ 25336
Колбы грушевидные на шлифе вместимостью 150	ГОСТ 9737
Мембранные фильтры капроновые диаметром 47 мм
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Насос водоструйный	ГОСТ 25336
Пинцет
Пробирки центрифужные	ГОСТ 25336
Стаканы химические с носиком вместимостью 150	ГОСТ 25336
Стекловата
Стеклянные палочки
Патроны для твердофазной экстракции - Waters Oasis MCS 6сс 500 mg LP Extraction Cartriges
Поглотительные приборы Рыхтера	ТУ 25-11-1136-75
Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария
Установка для перегонки растворителей
Фильтродержатель
Холодильник водяной, обратный	ГОСТ 9737
Хроматографическая колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Zorbax ODS, зернением 5 мкм
Хроматографическая колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2,0 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS2, зернением 5 мкм
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50-100
Шприц медицинский с разъемом Льюера, одноразовый

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка ацетонитрила (при необходимости), подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление градуировочных растворов, установление градуировочной характеристики, подготовка фильтров и поглотителей для отбора проб, патронов для концентрирования и очистки образцов, отбор проб.

7.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.2. Подготовка патрона Oasis MCS для очистки образцов

Концентрирующий патрон промывают с помощью медицинского шприца 10 насыщенного раствора хлорида натрия, затем 10 дистиллированной воды со скоростью прохождения растворителя через патрон 4-5 Патрон подготавливают непосредственно перед использованием.

7.3. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 помещают 405 деионизованной воды, 95 ацетонитрила, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр. В раствор вносят 5 ортофосфорной кислоты, 5 диэтиламина, 0,5 г октансульфоната натрия, перемешивают и помещают на ультразвуковую баню на 2 мин.

7.4. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.3) при скорости подачи растворителя 1,0 или 0,3 не менее 2-х часов до установления стабильной базовой линии.

7.5. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения

7.5.1. Исходный раствор диквата для градуировки (концентрация катиона диквата 1 ). В мерную колбу вместимостью 100 помещают 0,1965 г диквата дибромида моногидрата (молекулярная масса 362,1, содержание катиона 50,9%), растворяют в 40-50 насыщенного водного раствора хлорида аммония, доводят насыщенным раствором хлорида аммония до метки, тщательно перемешивают.

7.5.2. Раствор диквата N 1 для градуировки и внесения (концентрация 10 ). В мерную колбу вместимостью 100 помещают 1 исходного раствора диквата с концентрацией 1 (п. 7.5.1), разбавляют насыщенным раствором хлористого аммония до метки.

Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено".

Растворы хранят при комнатной температуре в темноте в течение 12-ти месяцев.

7.5.3. Рабочие растворы N 2-6 диквата для градуировки (концентрация 0.05-1,0 ). В 5 мерных колб вместимостью 100 помещают по 0,5, 1,0, 2,5, 5,0 и 10,0 градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 (п. 7.5.2), доводят до метки насыщенным раствором хлорида аммония, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 2-6 с концентрацией диквата 0,05, 0,1, 0,25, 0,5 и 1,0 , соответственно.

ГАРАНТ:

Нумерация подразделов приводится в соответствии с источником

7.5. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. ед.) от концентрации диквата в растворе , устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 20 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.5.1 или 7.5.1.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика действующего вещества.

Градуировочный график проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значения площадей отличаются более чем на 10% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

7.5.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором (фирмы Perkin-Elmer, США).

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил - вода (19:81, по объему)
	+ 0,1% (вес/объем) 1-октансульфонат натрия
	+ 1,0% (по объему) диэтиламин
	+ 1,0% (по объему) ортофосфорная кислота.

Рабочая длина волны: 310 нм.

Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 20 .

7.5.1.1. Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Zorbax ODS, зернением 5 мкм.

Скорость потока элюента: 1,0

Ориентировочное время выхода диквата: 3,4-4,2 мин.

Линейный диапазон детектирования: 1-20 нг.

7.5.1.2. Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм.

Скорость потока элюента: 0,3

Ориентировочное время выхода диквата: 4,7-5,3 мин.

Примечание: Ежедневно после завершения работы колонку необходимо промывать не менее 30 мин подвижной фазой метанол-вода (9:1, по объему), затем водой. Не рекомендуется оставлять на ночь в хроматографической системе фазу, содержащую комплекс ион-парных реагентов. Ежедневно перед началом работы до ввода в инжектор градуировочного раствора хроматографируют насыщенный раствор хлорида аммония. Эту операцию рекомендуется также осуществлять в течение рабочего дня после 4-х-5-ти вводов аналитических образцов или градуировочных растворов.

После осуществления 5-6-ти вводов образцов необходимо хроматографировать аналитический стандарт.

7.6. Подготовка фильтров для отбора проб воздуха

Диаметр бумажного фильтра "синяя лента" должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя.

Фильтры последовательно по 3 раза промывают на воронке Бюхнера этанолом, ацетоном, затем ацетонитрилом порциями 25-30 , сушат с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре. До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

7.7. Подготовка поглотительных приборов для отбора проб воздуха

В поглотительные приборы Рыхтера помещают по 10 дистиллированной воды, герметизируют заглушками.

8. Отбор и хранение проб воздуха

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 "ОПА. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ в воздухе населенных мест". Воздух с объемным расходом 3 аспирируют через пробоотборную систему - последовательно соединенные бумажный фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель, и поглотительный прибор Рыхтера, заполненный 10 дистиллированной воды.

Для измерения концентрации диквата на уровне 0,8 ОБУВ для атмосферного воздуха необходимо отобрать 50 воздуха. Срок хранения отобранных проб (фильтров, помещенных в полиэтиленовые пакеты, и поглотительных приборов, герметизированных заглушками) при комнатной температуре в темноте - 30 дней.

9. Выполнение измерений

Экспонированный фильтр ("синяя лента") переносят в химический стакан вместимостью 150 , заливают 30 дистиллированной воды, помещают на встряхиватель на 15 мин. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями воды объемом 20 , выдерживая на встряхивателе по 5 мин.

Экстракты объединяют в химическом стакане вместимостью 150 .

Содержимое поглотительного прибора переносят в тот же химический стакан, поглотитель дополнительно обмывают 2-3 дистиллированной воды, которую также переносят в стакан.

Объединенные экстракт и поглотительный раствор вносят с помощью медицинского шприца на концентрирующий патрон Oazis MCX, подготовленный по п. 7.2, со скоростью пропускания раствора 4-5 капель в сек., при нанесении последней порции продавливают растворитель до нижнего края сорбента. Вещество элюируют с патрона 3 насыщенного раствора хлорида аммония, собирая элюат в пробирку с пришлифованной пробкой, перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.1.1 или 7.5.1.2.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика действующего вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию диквата в хроматографируемом растворе.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1 , разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).

Перед анализом опытных образцов проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированного фильтра.

10. Обработка результатов анализа

Массовую концентрацию диквата в пробе атмосферного воздуха Х, , рассчитывают по формуле:

, где

С - концентрация диквата в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, ;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

- объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к нормальным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 0°С), .

, где

Т - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град. С,

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.,

u - расход воздуха при отборе пробы, ,

t - длительность отбора пробы, мин.

За результат анализа принимается среднее арифметическое результатов двух параллельных определений и , расхождение между которыми не превышает значений норматива оперативного контроля сходимости (d): .

, , где

d - норматив оперативного контроля сходимости, ;

- норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 13%).

Примечание: Идентификация и расчет концентрации диквата в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

11. Оформление результатов измерений

Результат количественного анализа представляют в виде:

- результат анализа в , характеристика погрешности , % , Р = 0,95 или:

, Р = 0,95, где

- абсолютная погрешность.

,

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание вещества менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание диквата в пробе атмосферного воздуха - менее 0,003 "*.

12. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

______________________________

* 0,003 - предел обнаружения при отборе 50 атмосферного воздуха.

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко