Методические указания по измерению концентраций тринексапак-этила в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии МУК 4.1.2085-06 (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 30 июля 2006 г.)

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания по измерению концентраций тринексапак-этила в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
МУК 4.1.2085-06
(утв. Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 30 июля 2006 г.)

Дата введения - 1 сентября 2006 г.

Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для измерения массовой концентрации тринексапак-этила в воздухе рабочей зоны в диапазоне 0,1-1,0 .

Тринексапак-этил (CGA 163935) - действующее вещество препарата МОДУС, КЭ (250 г/л), фирма-производитель "Сингента".

4-циклопропил(гидрокси)метилен-3,5-диоксоциклогексанкарбоновая кислота, этиловый эфир (IUPAC).

Мол. масса 252,3

Белое твердое вещество без запаха (технический продукт с содержанием д.в. - жидкость (30°С) от желтого до красно-коричневого цвета или полурасплавившаяся масса (20°С), со слабым сладким запахом). Температура плавления: 36°С, кипения >270°С. Давление паров: 1,6 мПа (20°С); 2,16 мПа (25°С). Коэффициент распределения н-октанол/вода: (pH 5.3, 25°С). Плотность 1,215 (20°С). Растворимость в этаноле, ацетоне, толуоле, н-октаноле - 100%; н-гексане - 5% (25°С). Растворимость в воде (, 25°С): 2.8 (pH 4.9); 10.2 (pH 5.5); 21.1 (pH 8.2).

Вещество стабильно к нагреванию до температуры кипения. Фотолитически и гидролитически устойчиво при нормальных условиях окружающей среды (pH 6-7, 25°С), менее стабильно в щелочах.

Основным продуктом деградации тринексапак-этила является тринексапак-кислота.

Краткая токсикологическая характеристика тринексапак-этила

Острая пероральная токсичность для крыс - более 4460 мг/кг; острая дермальная токсичность для крыс - более 4000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность для крыс - более 5300 воздуха (48 часов).

Тринексапак-этил не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кроликов.

Область применения препарата

Препарат МОДУС, КЭ (250 г/л), д.в. тринексапак-этил - регулятор роста растений, рекомендуемый для применения на зерновых - пшеница, ячмень (яровые и озимые), рожь (озимая), овес, а также рапсе с нормой расхода 0.25-0.5 л/га (1-3 опрыскивания с интервалом 7 дней) для зерновых и 1.0-1.5 л/га для рапса.

Рекомендуемый ОБУВ тринексапак-этила в воздухе рабочей зоны 0,9 .

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей , при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерений

Измерения концентраций тринексапак-этила выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование тринексапак-этила из воздуха осуществляют на последовательно соединенные бумажные фильтры "синяя лента" и фильтры из пенополиуретана, экстракцию с фильтров проводят метанолом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 2 нг. Средняя полнота извлечения 92,6%.

Определению не мешают компоненты препаративной формы.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы PerkinElmer, США)	Номер Госреестра 15945-97
Барометр-анероид М-67	ТУ 2504-1797-75
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104
Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2	ГОСТ 1770
Меры массы	ГОСТ 7328
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10	ГОСТ 29227
Пробоотборник воздуха автоматический ОП-442ТЦ	Номер Госреестра 18860-05
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1°С, пределы измерения 0-55°С	ТУ 215-73Е
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 50, 100, 500 и 1000	ГОСТ 1770
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Тринексапак-этил, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества 99,6% (Сингента, Швейцария)
Ацетон, о.с.ч.	ГОСТ 2306
Ацетонитрил для хроматографии, х.ч.	ТУ 6-09-4326-76
Вода деионизованная	ГОСТ 6702
Кислота орто-фосфорная, х.ч., 85%	ГОСТ 6552
Метилен хлористый (дихлорметан), х.ч.	ГОСТ 12794
Метиловый спирт (метанол), х.ч.	ГОСТ 6995
Этиловый спирт (этанол) ректификованный	ГОСТ Р 51652 или ГОСТ 18300

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)
Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные	ТУ 6-09-2678-77
Воронки конусные диаметром 30-37 мм	ГОСТ 25336
Груша резиновая
Колбы грушевидные на шлифе вместимостью 150	ГОСТ 9737
Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Насос водоструйный вакуумный	ГОСТ 10696
Пенополиуретан ППУ ПЕНОР-301	ТУ 2254-018-329-57768-2002
Пробирки центрифужные	ГОСТ 25336
Стаканы химические с носиком, вместимостью 150 и 500	ГОСТ 25336
Стекловата
Стеклянные палочки
Ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария
Установка для перегонки растворителей
Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Кромасил 100 С18, зернением 7 мкм
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50-100

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха и относительной влажности не более 80%.

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка ацетонитрила (при необходимости), приготовление градуировочных растворов, подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка фильтров для отбора проб.

7.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 помещают 500 ацетонитрила, 500 деионизованной воды, 1 ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр.

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.2) при скорости подачи растворителя 1 не менее 2-х часов до установления стабильной базовой линии.

7.4. Приготовление градуировочных растворов и раствора внесения

7.4.1. Исходный раствор тринексапак-этила для градуировки (концентрация 200 ). В мерную колбу вместимостью 100 помещают 0,02 г тринексапак-этила, растворяют в 40-50 ацетонитрила, доводят ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в холодильнике при температуре 4-6°С в течение 3-х месяцев.

7.4.2. Раствор тринексапак-этила N 1 для градуировки (концентрация 10 ). В мерную колбу вместимостью 100 помещают 5 исходного раствора тринексапак-этила с концентрацией 200 (п. 7.4.1), разбавляют ацетонитрилом до метки.

Градуировочный раствор N 1 хранят в холодильнике при температуре 4-6°С в течение месяца.

Этот раствор тринексапак-этила используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения действующего вещества методом "внесено-найдено".

7.4.3. Рабочие растворы N 2-5 тринексапак-этила для градуировки (концентрация 0.1-1.0 )

В 4 мерные колбы вместимостью 100 помещают по 1.0; 2.0; 5.0 и 10.0 градуировочного раствора N 1 тринексапак-этила с концентрацией 10 (п. 7.4.2), доводят до метки подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 2-5 с концентрацией тринексапак-этила 0.1; 0.2; 0.5 и 1.0 , соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед употреблением.

7.5. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации тринексапак-этила в растворе , устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 20 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика действующего вещества.

Градуировочный график проверяют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Если значения площадей отличаются более чем на 11% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

7.5.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором (фирмы Perkin-Elmer, США)

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100 С18, зернением 7 мкм.

Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: ацетонитрил - вода - ортофосфорная кислота (50:50:0,1, по объему)

Скорость потока элюента: 1

Рабочая длина волны: 280 нм

Объем вводимой пробы: 20

Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу

Ориентировочное время выхода тринексапак-этила: 8,4-8,7 мин

Линейный диапазон детектирования 2-20 нг.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 , разбавляют подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2.

7.6. Подготовка фильтров для отбора проб воздуха

Из пенополиуретана вырезают фильтр толщиной 2-2,5 мм, диаметром 48-50 мм, соответствующим внутреннему диаметру фильтродержателя. Диаметр бумажного фильтра "синяя лента" также должен соответствовать внутреннему диаметру фильтродержателя.

Фильтры из бумаги последовательно по 3 раза промывают этанолом, затем ацетонитрилом порциями 25-30 , сушат на воздухе при комнатной температуре.

Фильтры из пенополиуретана последовательно по 2 раза промывают хлористым метиленом, затем ацетоном порциями 30-40 , каждый раз помещая стакан с фильтром и растворителем на ультразвуковую баню на 5-6 мин, затем сушат на воздухе при комнатной температуре.

До использования фильтры хранят в герметично закрытой стеклянной таре.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны". Воздух с объемным расходом 2-4 аспирируют через пробоотборную систему - последовательно соединенные бумажный фильтр "синяя лента" и фильтр из пенополиуретана, помещенные в фильтродержатель.

Для измерения концентрации тринексапак-этила на уровне 0,5 ОБУВ для воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 2 воздуха.

Экспонированные фильтры, помещенные в полиэтиленовые пакеты, хранят в холодильнике при температуре 4-6°С не более 5 дней, для длительного хранения герметично упакованные фильтры помещают в морозильную камеру (температура - -18°С).

ГАРАНТ:

Нумерация разделов приводится в соответствии с источником

8. Выполнение измерений

Экспонированные фильтры ("синяя лента" + пенополиуретан) переносят в химический стакан вместимостью 150 , заливают 30 метанола, помещают на ультразвуковую баню на 4 минуты. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями метанола объемом 30 , выдерживая на ультразвуковой бане соответственно 2 и 1 минуту.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40°С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 5 подвижной фазы (подготовленной по п. 7.2) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.5.1.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика действующего вещества, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию тринексапак-этила в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированных фильтров.

Образцы, дающие пики, большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 1,0 , разбавляют подвижной фазой, приготовленной по п. 7.2.

9. Обработка результатов анализа

Массовую концентрацию тринексапак-этила в пробе воздуха Х, , рассчитывают по формуле:

,

где:

С - концентрация тринексапак-этила в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, ;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

- объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20°С), .

,

где:

T - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град. С;

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, ;

t - длительность отбора пробы, мин;

R = 0,386 (для воздуха рабочей зоны).

Примечание: Идентификация и расчет концентрации тринексапак-этила в пробах могут быть проведены с помощью программы обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

10. Оформление результатов измерений

За результат анализа принимается среднее арифметическое результатов двух параллельных определений и , расхождение между которыми не превышает значений норматива оперативного контроля сходимости (d): .

, ,

где:

d - норматив оперативного контроля сходимости, ;

- норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 10%).

Результат количественного анализа представляют в виде:

- результат анализа , характеристика погрешности , % (равна 25%), Р = 0,95 или

, Р = 0,95, где - абсолютная погрешность.

,

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание тринексапак-этила в пробе воздуха менее 0,1 "*.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

12. Разработчики

Юдина Т.В., Федорова И.Е., Волкова В.И. (ФГУН "Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Роспотребнадзора"); Иванов Г.Е. (Роспотребнадзор).

______________________________

* 0.1 - предел обнаружения при отборе 5 воздуха.

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко