Методические указания МУК 4.1.1413-03 "Измерение концентраций клефоксидима в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 24 июня 2003 г.)

Методические указания МУК 4.1.1413-03
"Измерение концентраций клефоксидима в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 24 июня 2003 г.)

Дата введения: 30 июня 2003 г.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны массовой концентрации клефоксидима в диапазоне 0,5-5,0 .

Клефоксидим - действующее вещество препарата Аура Плюс, КЭ, (75 г/л), фирма-производитель БАСФ, Германия.

3-гидрокси-5-(цис-тиан-3-ил)-2-{1-[(2RS)-2-(4-хлорфенокси)пропоксиимино]-бутил}-циклогекс-2-ен-1-он (IUPAC)

Эмпирическая формула:

М. м.: 466,0

Бесцветная вязкая жидкость без запаха. Температура кипения 185°С (с разложением). Давление паров при 20°С: 0,17 мПа. Растворимость в органических растворителях при 20°С (г/л): ацетон и этилацетат - более 700; изопропиловый спирт - 330. Растворимость в воде при 20°С - 5,31 мг/л. Вещество мгновенно разлагается в водных растворах при рН 5, - 140 дней (рН 7), более 300 дней (рН 9).

Константа диссоциации рКа 5,91.

Агрегатное состояние в воздухе рабочей зоны - аэрозоль.

Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность для крыс 5 000 мг/кг; острая дермальная токсичность для крыс > 4 000 мг/кг, острая ингаляционная токсичность для крыс > 5 200 .

Область применения препарата. Клефоксидим - гербицид системного действия из группы ингибиторов биосинтеза жирных кислот, используется для уничтожения однолетних и многолетних злаковых сорняков в посевах риса.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) клефоксидима в воздухе рабочей зоны - 1 .

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей , при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерения

Измерения концентраций клефоксидима выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование клефоксидима из воздуха осуществляют на бумажные фильтры "синяя лента", экстракцию с фильтра проводят метанолом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 2 нг.

Определению не мешают компоненты препаративной формы.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104
Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ (ЗАО "ОПТЭК", г. Санкт-Петербург) или аспирационное устройство ЭА-1	ТУ 25-11-1414-78
Барометр-анероид М-67	ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1°С, пределы измерения 0-55°С	ТУ 215-73Е
Колбы мерные, вместимостью 100 и 1 000	ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2 класса точности, вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10	ГОСТ 29227
Пробирки градуированные, вместимостью 5 или 10	ГОСТ 1770
Цилиндры мерные 2 класса точности, вместимостью 500 и 1 000	ГОСТ 1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Клефоксидим с содержанием действующего вещества 98,5 % (БАСФ, Германия)
Ацетонитрил для хроматографии, х.ч.	ТУ-6-09-4326-76
Вода бидистиллированная, деионизованная или перегнанная над	ГОСТ 6709
Метиловый спирт (метанол), х.ч.	ГОСТ 6995

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные	ТУ 6-09-2678-77
Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм	ГОСТ 25336
Груша резиновая
Колбы грушевидные на шлифе, вместимостью 100	ГОСТ 10394
Колбы круглодонные на шлифе, вместимостью 250	ГОСТ 9737
Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм
Насос водоструйный	ГОСТ 10696
Пробирки центрифужные	ГОСТ 25336
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария	ТУ 25-11-917-74
Стаканы химические, вместимостью 100	ГОСТ 25336
Стекловата
Стеклянные палочки
Установка для перегонки растворителей
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Холодильник водяной, обратный	ГОСТ 9737
Хроматографическая колонка стальная, длиной 20 см, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа, вместимостью 50-100

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят очистку ацетонитрила (при необходимости), подготовку подвижной фазы для ВЭЖХ, приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

7.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 ч, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.2. Приготовление 0,005 М раствора ортофосфорной кислоты

Для приготовления 0,005 М раствора ортофосфорной кислоты в мерную колбу вместимостью 1 000 помещают 0,35 ортофосфорной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.3. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1 000 помещают 550 0,005 М ортофосфорной кислоты, добавляют 450 ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.4. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (п. 7.3) в течение 30 мин при скорости подачи растворителя 0,4 до установления стабильной базовой линии.

7.5. Приготовление градуировочных растворов

7.5.1. Исходный раствор клефоксидима для градуировки (концентрация 1 ). В мерную колбу вместимостью 100 помещают 0,1 г клефоксидима, доводят до метки метанолом, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике не более месяца.

Растворы NN 1-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного стандартного раствора.

7.5.2. Раствор N 1 клефоксидима для градуировки (концентрация 10 ). В мерную колбу вместимостью 100 помещают 1 исходного стандартного раствора клефоксидима с концентрацией 1 (п. 7.5.1), разбавляют метанолом до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение 2 недель.

7.5.3. Рабочие растворы NN 2-5 клефоксидима для градуировки (концентрация 0,1-1,0 ). В 4 мерные колбы вместимостью 100 помещают по 1,0, 2,5, 5,0 и 10,0 стандартного раствора N 1 с концентрацией 10 (п. 7.5.2), доводят до метки подвижной фазой (подготовленной по п. 7.3), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2-5 с концентрацией клефоксидима 0,1, 0,25, 0,5 и 1,0 , соответственно.

Растворы готовятся и используются в день анализа.

7.6. Отбор проб

Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны". В течение 15 мин последовательно отбирают 3 пробы, для чего воздух аспирируют в течение 5 мин с объемным расходом 1-5 через бумажный фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации клефоксидима на уровне 0,5 ОБУВ воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 1 воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной камере при 4°С - 5 дней.

7.7. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации клефоксидима в растворе , устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки NN 2-5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.7.1. Осуществляют не менее 3 параллельных измерений. Устанавливают площадь пика клефоксидима.

7.7.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2,1 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: 0,005 М ортофосфорная кислота - ацетонитрил (55:45, по объему).

Скорость потока элюента: 0,4 .

Рабочая длина волны: 250 нм.

Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 20 .

Ориентировочное время выхода клефоксидима: 8,9-9,1 мин.

Линейный диапазон детектирования: 2-20 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор клефоксидима с концентрацией 1,0 , разбавляют подвижной фазой (подготовленной по п. 7.3).

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2 стандартных растворов различной концентрации. Если значения площади отличаются более чем на 7% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие стандартные растворы.

8. Выполнение измерений

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 , заливают 10 метанола, помещают на встряхиватель на 10 мин. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями метанола, объемом 10 .

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35°С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 5 подвижной фазы (подготовленной по п. 7.3) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.7.1.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию клефоксидима в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированного фильтра.

9. Обработка результатов измерений

Массовую концентрацию клефоксидима в пробе воздуха рабочей зоны X, , рассчитывают по формуле:

, где

C - концентрация клефоксидима в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, ;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

- объем пробы воздуха, отобранного для анализа, приведенного к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20°С)

, где

T - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), °С;

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, ;

t - длительность отбора пробы, мин.

Примечание. Идентификация и расчет концентрации клефоксидима в пробах могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

10. Оформление результатов измерений

За результат анализа принимается среднее арифметическое результатов двух параллельных определений и , расхождение между которыми не превышает значений норматива оперативного контроля сходимости (d): .

, , где

d - норматив оперативного контроля сходимости, ;

- норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 15%).

Результат количественного анализа представляют в виде:

- результат анализа , характеристика погрешности , %, Р = 0,95 или

- , Р = 0,95, где

,

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

12. Разработчики

Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи Московской обл.).