Методические указания по измерению концентраций 2-[4-(1,2-Дифенил-1-бутенил)фенокси]-N,N-диметилэтанамина-(Z)-2-гидрокси- 1,2,3-пропантрикарбоксилата (тамоксифен цитрата) и 2-[4-(1,2-Дифенил-1-бутенил)фенокси]-N,N-диметилэтанамина (тамоксифен основания) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. МУК 4.1.1583-03 (утв. Министерством здравоохранения РФ 29 июня 2003 г.)

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания по измерению концентраций 2-[4-(1,2-Дифенил-1-бутенил)фенокси]-N,N-диметилэтанамина-(Z)-2-гидрокси-1,2,3-пропантрикарбоксилата (тамоксифен цитрата) и 2-[4-(1,2-Дифенил-1-бутенил)фенокси]-N,N-диметилэтанамина (тамоксифен основания) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
МУК 4.1.1583-03
(утв. Министерством здравоохранения РФ 29 июня 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

	М.м. 563.64		М.м. 371.51

Тамоксифена цитрат, почти белый мелкокристаллический порошок, с температурой плавления 142-145°C, растворим в метиловом и этиловом спирте, мало растворим в ацетоне, практически не растворим в воде.

Тамоксифена основание, белый кристаллический порошок с температурой плавления 101-102°C, нерастворим в воде, растворим в 95% этиловом спирте и хлороформе.

В воздухе находятся в виде аэрозоля.

Оказывают выраженное раздражающее действие на кожу.

ПДК тамоксифена цитрата и тамоксифена основания в воздухе - 0.001 . 1 класс опасности.

Характеристика метода

Методика основана на применении высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания веществ в хроматографируемом объеме (20 мкл) - 0.08 мкг.

Нижний предел измерения концентрации веществ в воздухе - 0.0005 (при отборе 1600 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций веществ в воздухе от 0.0005 до 0.0075 .

Определение веществ избирательно на стадиях сушки, просеивания, фасовки и хранения.

Определению не мешают лимонная кислота, пары этилового и изопропилового спиртов.

Суммарная погрешность измерения не превышает .

Время выполнения измерения, включая отбор проб, 4 часа.

Приборы, аппаратура, посуда

Микроколоночный жидкостной хроматограф "Милихром" или другие модели с УФ-детектором.

Хроматографическая колонка размером мм, заполненная твердым сорбентом Силасорб .

Весы аналитические ВЛА-200, кл., ГОСТ 24104-88 Е.

Микрошприц МШ-10, ТУ 2833-106.

Аспирационное устройство ПУ-3Э/220 или ПУ-3Э/12.

Фильтродержатели ТУ 95.72.05-77.

Колбы мерные, вместимостью 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74 Е.

Колбы круглодонные, вместимостью 50 мл, ГОСТ 19908-74.

Пипетки мерные, вместимостью 1, 2, 5, 10 мл, ГОСТ 29227-91.

Фильтры типа "Миллипор" или "Владипор", с диаметром пор 0.45 мкм, ТУ 6-05-221-433-79.

Роторный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917.76.

Секундомер, ГОСТ 5072-97.

Линейка измерительная металлическая, ГОСТ 8309-75.

Лупа измерительная ЛИ-3-10Х, ГОСТ 8309-75.

Реактивы, растворы, материалы

Тамоксифен цитрат ВФС 42-2421-94.

Тамоксифен основания (полупродукт в синтезе тамоксифен цитрата. Временный технологический регламент на производство тамоксифен цитрата. ПЭЗ ВНИХФИ (М., 1992 г.).

Этиловый спирт, ГОСТ 5963-67.

Метиловый спирт, х.ч., ГОСТ 6995-77.

Дистиллированная вода, ГОСТ 6709-72.

Элюент: метиловый спирт : вода в соотношении 2:8.

Стандартный раствор N 1 тамоксифена основания с концентрацией 200 мкг/мл готовят растворением 0.0200 г вещества в этаноле в мерной колбе вместимостью 100 мл. Раствор хранят в склянке оранжевого стекла в течение двух недель при хранении в холодильнике.

Стандартный раствор N 2 тамоксифена цитрата с концентрацией 200 мкг/мл готовят растворением 0.0200 г вещества в этаноле в мерной колбе вместимостью 100 мл. Раствор хранят в склянке оранжевого стекла в течение двух недель при хранении в холодильнике.

Стандартный раствор N 3 тамоксифена основания с концентрацией 20 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 этанолом. Растворы используют свежеприготовленными.

Стандартный раствор N 4 тамоксифена цитрата с концентрацией 20 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 2 этанолом. Растворы используют свежеприготовленными.

Градуировочные растворы с концентрацией 0,16-0,32-0,48-0,8-1,6-2,4 мкг/мл тамоксифена основания и тамоксифена цитрата готовят соответствующим разбавлением этанолом стандартных растворов N 3 и N 4. Растворы используют свежеприготовленными.

Фильтры АФА-ВП-20, ТУ 95-7181-76.

Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 100 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-20. В патрон за фильтром следует установить металлическую сетку. Для определения 1/2 ПДК следует отобрать 1600 л воздуха. Пробы хранят в защищенном от света месте в течение суток.

Подготовка к измерению

По 5 мл каждого градуировочного раствора, что соответствует 0.8-1.6-2.4-4.0-8.0-12.0 мкг, переносят в круглодонную колбу и упаривают досуха под вакуумом в роторном испарителе при температуре 50-60°C. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл элюента (метанол-вода в соотношении 2:8 мл) и анализируют на хроматографе, инжектируя по 20 мкл (0,02 мл), что соответствует 0.08; 0.16; 0.24; 0.40; 0.80; 1.2 мкг вещества.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

Температура термостата колонки	20°C
Скорость подачи элюента	100 мкл/мин
Чувствительность измерения детектора	0.4
Длина волны УФ-детектора	240 нм
Скорость движения диаграммной ленты	180 мм/мин
Диапазон измерения самописца	100 мв
Максимальный объем вводимой пробы	20 мкл.

Время удерживания тамоксифенов в колонке для цитрата и основания одно и то же 2,3 мин, в связи с разложением соли тамоксифена до тамоксифена основания в условиях среды подвижной фазы.

На основании полученных хроматограмм строят градуировочный график, выражающий зависимость площади пиков от содержания вещества в хроматографируемом объеме пробы (мкг).

Построение градуировочного графика необходимо проводить не менее чем по 5 точкам, выполняя 5 параллельных измерений для каждого раствора. Проверку градуировочного графика следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

Проведение измерения

Фильтр с отобранной пробой переносят в круглодонную колбу, вместимостью 50 мл, приливают 5 мл этанола и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой. Затем фильтр тщательно отжимают и удаляют. Степень десорбции вещества с фильтра 97%. Отгоняют этанол при 50-60°C в роторном испарителе досуха. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл подвижной фазы и хроматографируют.

Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях, что и при построении градуировочного графика.

Количественное определение содержания тамоксифена основания и тамоксифена цитрата в хроматографируемом объеме (мкг) проводят по предварительно построенным градуировочным графикам.

Расчет концентрации

Концентрацию определяемых веществ "С" в воздухе вычисляют по формуле:

, где

а - количество вещества в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

б - хроматографируемый объем пробы, взятый для анализа, мл;

в - общий объем раствора пробы, мл;

- объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (Приложение 1).

Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко