Приложение 2. Пример протокола об оценке фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов методом атомно-силовой микроскопии после воздействия микро- и наночастиц магнетита

Приложение 2
к MP 1.2.0309-22

Пример протокола об оценке фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов методом атомно-силовой микроскопии после воздействия микро- и наночастиц магнетита

1.1. Характеристика исследованных наночастиц (НЧ):

Параметр	Характеристика НЧ
Наименование НЧ	Fe 3O 4
Размер, нм	10 нм, 50 нм, 1 мкм
Форма	Сферическая
Концентрация НЧ	0,5 мг/мл
Растворитель	Деионизированная вода

1.2. Полученные результаты.

Выполнена трехмерная картина изменения топографии поверхности альвеолярного макрофага (АМ) (образование "вдавлений") после взаимодействия с частицами разного размера магнетита отражает стадию инвагинации клеточной мембраны как фазу фагоцитоза микро- и наночастиц (рис. 1).

(а)	(б)
(в)	(г)

Рис. 1. Трехмерная реконструкция пк-АСМ изображений топографии поверхности АМ из БАЛЖ крыс после интратрахеальной инстилляции (а) воды; (б) суспензии частиц магнетита диаметром 10 нм; (в) суспензии частиц магнетита диаметром 50 нм; (г) суспензии частиц магнетита диаметром 1 мкм

1.2.1. Число микровдавлений представлено на рисунках 2, 3.

Рис. 2. Среднее число микровдавлений всех поперечных размеров на поверхности клеток каждой группы по номинальному размеру введенных частиц

Рис. 3. Среднее число микровдавлений диаметром > 1 мкм на поверхности клеток всех экспериментальных групп

1.2.2. Плотность микровдавлений представлена на рисунках 4 - 6.

Рис. 4. Средняя плотность микровдавлений всех поперечных размеров на поверхности клеток каждой группы по номинальному размеру введенных частиц

Рис. 5. Средняя поверхностная плотность микровдавлений диаметром > 1 мкм на поверхности клеток всех экспериментальных групп

(а)	(б)
(в)	(г)

Рис. 6. Гистограммы распределения поверхностных плотностей микровдавлений по диаметру для клеток контрольной группы (а) и групп, получивших частицы магнетита размером 10 нм (б), 50 нм (в) или 1 мкм (г)

1.2.3. Средний диаметр микровдавлений. Оценка не проводилась.

1.2.3.1. Анализ данных микровдавлений на поверхности клеток животных, которые подверглись воздействию частиц магнетита, значительно больше, чем на поверхности клеток контрольных животных. У клеток, которые контактировали с более крупными частицами, поперечный размер микровдавлений выше. После инстилляции наименьших частиц размером 10 нм число относительно крупных микровдавлений является наименьшим, а после инстилляции наиболее крупных частиц размером 1 мкм - наибольшим (рисунки 2, 3).

Анализ распределения крупных микровдавлений на поверхности клеток контрольной группы отражает долю частиц микр