Методика бактериологического исследования кормов на пастереллы (утв. Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 16 июля 1987 г.)

1. Общие положения

1.1. Бактериологическое исследование кормов на наличие возбудителей пастереллеза проводят с целью установления причины заболевания сельскохозяйственных животных и птицы.

1.2. Метод основан на предварительном подращивании бактерий в неселективных средах, заражении лабораторных животных и исследовании крови внутренних органов на наличие пастерелл, выделении чистой культуры и установлении ее принадлежности по культурно-морфологическим свойствам.

1.3. Отбор проб кормов проводят в соответствии с "Правилами бактериологического исследования кормов" (1975 г.).

2. Проведение исследований

2.1. Навеску корма в количестве 25 г помещают в колбу с бульоном Хоттингера или МПБ с 0,2% глюкозы в соотношении 1:5 (125 мл среды и 25 г корма) тщательно перемешивают и помещают в термостат на 16-18 часов при температуре 37°С для подращивания микрофлоры.

2.2. Через 16-18 часов из колбы делают посевы на 2-3 чашки Петри МПА с 0,5% глюкозы и одновременно заражают лабораторных животных (белые мыши) в количестве не менее трех подкожно в дозе до 0,2 мл.

2.3. После гибели мышей от возбудителей пастереллеза, наступающей обычно через 24-48 часов, из внутренних органов (сердце, печень, селезенка, почка) делают мазки, окрашивают по Граму и Муромцеву и просматривают под микроскопом.

2.4. Для получения чистой культуры проводят посев из органов павших лабораторных животных на МПА с 0,2% глюкозы. Посевы выдерживают в течение 24 часов в термостате при 37°С. Из выросших, характерных по внешнему виду колоний, отбирают 3-5 и исследуют на принадлежность к пастереллам по культурально-морфологическим свойствам (табл. 1).

2.5. Обнаружение в мазках из внутренних органов коротких палочек с закругленными концами и хорошо выраженной биполярностью, а в мазках из культуры неспорообразующих, грамотрицательных, неподвижных палочек и не имеющих биполярности, а также гибель лабораторных животных через 24-48 часов при заражении культурами указывают на наличие возбудителя пастереллеза.

3. Оценка кормов

3.1. Корма, в которых обнаружены возбудители пастереллеза, запрещается использовать для кормления сельскохозяйственных животных без обеззараживания.

3.2. Обеззараживание производят:

3.2.1. Гранулированием на прессах-грануляторах при давлении пара 4-5 атм.

3.2.2. Автоклавированием в автоклавах при 1.5 атм. в течение часа.

3.2.3. Провариванием в котлах в течение часа с момента закипания воды.

3.2.4. Провариванием в кормозапарниках или других емкостях при температуре 100°С в течение часа с момента достижения заданной температуры.

3.2.5. Корма животного происхождения обеззараживают и используют в соответствии с п. 3.2. "Правил бактериологического исследования кормов" (1975 г.).

3.2.6. Обеззараживание достигается также при обработке одной из органических кислот (в % к массе корма):

муравьиной кислотой - 0,12%, уксусной - 0,6%, пропионовой - 0,7% - через сутки;

муравьиной кислотой - 0,05%, уксусной или пропионовой - 0,5% - через 10 суток;

муравьиной кислотой - 0,04%, уксусной - 0,4%, пропионовой - 0,15% - через 30 суток.

Таблица 1

Дифференциально-диагностическая характеристика бактерий

Показатели	Возбудители
	пастереллеза	листериоза	рожистой септицемии
Морфология в препаратах-отпечатках из крови внутренних органов.	Неспорообразующие, мелкие палочки с закругленными концами, биполярно окрашенные.	Мелкие, полиморфные палочки, расположенные одиночно в виде римской цифры "V" или частокола.	Тонкие, прямые, слегка изогнутые палочки, расположенные одиночно или попарно или в виде скоплений.
Морфология в мазках из культуры.	Биполярность почти всегда отсутствует.	Короткие, прямые, овоидные палочки, иногда почти кокки, располагаются одиночно или кучками.	Короткие, прямые или слегка изогнутые палочки.
Окраска по Граму	Отрицательная	Положительная	Положительная
Подвижность	Неподвижные	Подвижные	Неподвижные
Рост на МПБ	Равномерное помутнение, затем просветление с образованием слизистого осадка, при встряхивании поднимающегося в виде косички.	Равномерное помутнение среды, при встряхивании получаются муаровые волны.	Легкое помутнение, при встряхивании осадок поднимается.
Рост на МПА	Мелкие, росинчатые слегка опалесцирующие прозрачные колонии, которые принимают через 2-3 суток серовато-белый цвет.	Мелкие росинчатые, прозрачные колонии, которые со временем мутнеют.	Мелкие росинчатые, прозрачные колонии.
Разжижение желатины	-	-	+
Свертывание молока	-	-	+
Образование сероводорода	+	-	-
Образование индола	+	о	-
	Примечание:	+ положительный результат, - отрицательный результат, о - анализы не проводятся.

Заместитель начальника Главного управления ветеринарии Госагропрома СССР

В.С. Осетров