Методические указания МУК 4.1.3906-23 "Определение остаточных количеств сульфоксафлора в зерне и соломе зерновых колосовых культур, в плодовых семечковых, в плодовых овощных культурах, в яблочном и томатном соке и в клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 29 июня 2023 г.)

Методические указания МУК 4.1.3906-23
"Определение остаточных количеств сульфоксафлора в зерне и соломе зерновых колосовых культур, в плодовых семечковых, в плодовых овощных культурах, в яблочном и томатном соке и в клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 29 июня 2023 г.)

ББК 51.231

О-62

ISBN 978-5-7508-2106-8

Введены впервые

I. Общие положения и область применения

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) с масс-спектрометрическим детектированием для определения уровня остаточных количеств сульфоксафлора в зерне зерновых колосовых культур и в клубнях картофеля в диапазоне 0,01 - 0,10 мг/кг, в соломе зерновых колосовых культур в диапазоне 0,5 - 5,0 мг/кг, в яблоках и яблочном соке в диапазоне 0,2 - 2,0 мг/кг, в плодах томата и томатном соке в диапазоне 0,1 - 1,0 мг/кг, в плодах огурца в диапазоне 0,2 - 2,0 мг/кг.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

II. Физико-химические свойства

2.1. Физико-химические свойства сульфоксафлора.

Название вещества по ИЮПАК: [метил(оксо){1-[6-трифторметил)-3-пиридил]этил}-гамма6- сульфанилиден]цианамид.

Технический материал представляет собой смесь четырех диастереомеров.

Эмпирическая формула: C ₁₀H ₁₀F ₃N ₃OS.

Молекулярная масса: 277,27.

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: белый, с кислым запахом.

Давление насыщенного пара (при плюс 20 °C): 1,4 х 10 ^-6 Па.

Температура плавления: плюс 112,9 °C.

Коэффициент распределения в системе октанол/вода при плюс 25 °C: K _ow log Р = 0,802 (при pH 5; 7; 9).

Растворимость в воде (в г/дм ³ при плюс 20 °C): 1,38 (pH 5), 0,57 (pH 7), 0,55 (pH 9).

Растворимость в органических растворителях (в г/дм ³ при плюс 20 °C): ацетон - более 256; этилацетат - 95; ацетонитрил - 93; 1,2-дихлорэтан - 40; ксилол - 0,74: н-гептан - 2 x 10 ^-4.

Сульфоксафлор гидролитически стабилен в кислой, нейтральной и щелочной среде.

В почве DT ₅₀ составляет 1 - 7 дней.

2.2. Сульфоксафлор относится к малоопасным веществам по острой оральной (ЛД ₅₀ для крыс более 5000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД ₅₀ для кроликов более 5000 мг/кг) и к умеренно опасным по ингаляционной токсичности (ЛК ₅₀ для крыс (4 часа) более 2210 мг/м ³ воздуха).

2.3. Сульфоксафлор системный инсектицид из класса сульфоксиминов, активирует никотиновые ацетилхолиновые рецепторы насекомых, активен в отношении широкого спектра насекомых-вредителей.

III. Метод измерения

3.1. Метод основан на определении сульфоксафлора с помощью ВЭЖХ на обращенной фазе с использованием тандемного масс-спектрометрического детектора.

Определение сульфоксафлора в зерне зерновых колосовых культур и клубнях картофеля проводится после его экстракции из образцов этилацетатом и дальнейшей очистки экстракта на концентрирующих патронах N 1 со слабоосновным анионообменником с привитыми аминогруппами.

Определение сульфоксафлора в плодах огурца, томата и яблоках проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом и дальнейшей очистки экстракта на концентрирующих патронах N 1 со слабоосновным анионообменником с привитыми аминогруппами.

Определение сульфоксафлора в томатном соке проводится после его экстракции из образцов ацетонитрилом и очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами.

Определение сульфоксафлора в яблочном соке проводится после разбавления образца сока водой и экстракции сульфоксафлора хлористым метиленом.

Определение сульфоксафлора в соломе зерновых колосовых культур проводится после его экстракции из образцов водным ацетонитрилом и дальнейшей очистки экстракта на концентрирующих патронах N 1 со слабоосновным анионообменником с привитыми аминогруппами.

Идентификация сульфоксафлора проводится по времени удерживания, наличию характеристичных фрагментарных ионов и соотношению интенсивностей (площадей) пиков этих ионов. Количественное определение сульфоксафлора проводится методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность метода достигается за счет использования масс-спектрометрического детектора.

IV. Метрологические характеристики

4.1. При соблюдении всех условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Метрологические характеристики

Анализируемый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Показатель точности (границы относительной погрешности) , %, Р = 0,95	Стандартное отклонение повторяемости,  r, %	Стандартное отклонение воспроизводимости,  R, %	Предел повторяемости, r, %	Предел воспроизводимости, R, %
1	2	3	4	5	6	7
Зерно зерновых колосовых культур	0,01 - 0,10 вкл.	50	3,2	4,5	9	12
Солома зерновых колосовых культур	0,5 - 1,0 вкл.	50	3,6	5,0	10	14
	2,0 - 5,0 вкл.	50	2,1	2,9	6	9
Плоды огурца	0,2 - 0,4 вкл.	50	4,3	6,0	12	18
	1,0 - 2,0 вкл.	50	2,5	3,4	7	10
Плоды томата	0,1 - 1,0 вкл.	50	6,1	8,5	17	24
Томатный сок	0,1 - 1,0 вкл.	50	3,9	5,5	11	16
Яблоки	0,2 - 0,4 вкл.	50	4,6	6,4	13	18
	1,0 - 2,0 вкл.	50	1,8	2,5	5	7
Яблочный сок	0,2 - 0,4 вкл.	50	3,6	5,0	10	14
	1,0 - 2,0 вкл.	50	3,6	5,0	10	14
Клубни картофеля	0,01 - 0,10 вкл.	50	7,1	9,9	20	28

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для сульфоксафлора

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Полнота извлечения вещества, %	Стандартное отклонение S, %	Доверительный интервал среднего результата, , %
1	2	3	4	5	6
Зерно зерновых колосовых культур	0,01	0,01 - 0,10 вкл.	88,6	3,5	1,5
Солома зерновых колосовых культур	0,5	0,5 - 5,0 вкл.	96,0	4,2	1,9
Плоды огурца	0,2	0,2 - 2,0 вкл.	98	3,2	1,5
Плоды томата	0,1	0,1 - 1,0 вкл.	90,8	4,0	1,7
Томатный сок	0,1	0,1 - 1,0 вкл.	85,5	2,2	0,9
Яблоки	0,2	0,2 - 2,0 вкл.	90,5	3,4	1,5
Яблочный сок	0,2	0,2 - 2,0 вкл.	98,8	4,0	1,8
Клубни картофеля	0,01	0,01 - 0,10 вкл.	77,3	6,1	2,2

V. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

5.1. Средства измерений:

- весы аналитические класса точности по ГОСТ Р 53228 - специальный (1), с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г;

- весы лабораторные общего назначения класса точности по ГОСТ Р 53228 средний (III) с наибольшим пределом взвешивания до 400 г и пределом допустимой погрешности 0,5 г;

- колбы мерные на 10, 100, 250, 500 и 1000 см ³, ГОСТ 1770;

- пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 см ³, ГОСТ 29227;

- цилиндры мерные на 10, 25, 50, 100, 250, 500 и 1000 см ³, ГОСТ 1770;

- система высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектором, включающая;

- модульный жидкостной хроматограф, состоящий из градиентного насоса на два растворителя, позволяющий регулировать поток элюента от 0,001 до 5,0 см ³/мин и создавать давление от 0 до 600 бар; вакуумного дегазатора; термостата колонок с двумя независимо нагреваемыми зонами с диапазоном температур от плюс 10 до плюс 80 °C и с возможностью использования стандартного автосамплера с дозирующим объемом от 0,1 до 100 мм ³ для автоматического ввода пробы в хроматографическую систему. ВЭЖХ система соединена с тандемным масс-спектрометрическим детектором типа тройной квадруполь с двумя высокопроизводительными турбомолекулярными насосами, позволяющим регистрировать отдельные ионы с заданными массами от 50 до 3000 а.е.м.;

- система оснащена компьютерной системой обработки данных, контролирующей работу всего прибора, обеспечивающей сбор и хранение всех масс-хроматограмм в процессе проведения хромато-масс-спектрометрического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет масс-хроматограмм и количественный анализ.

5.2. Реактивы:

- сульфоксафлор, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 99,7 %;

- азот, особой чистоты, ГОСТ 9293;

- ацетон, химически чистый;

- ацетонитрил, особой чистоты, УФ-200 нм;

- вода дистиллированная по ГОСТ 6709 и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости);

- n-Гексан, химически чистый;

- калий марганцовокислый, чистый для анализа, ГОСТ 20490;

- кальций хлористый, чистый;

- кислота муравьиная, чистая для анализа, ГОСТ 5848;

- концентрирующие патроны для твердофазной экстракции со слабоосновным анионообменником с привитыми аминогруппами 63 - 200 мкм (объем - 1 см ³, масса сорбента - 0,6 г) (патрон N 1);

- метилен хлористый, химически чистый;

- натрий сернокислый, безводный, химически чистый, ГОСТ 4166;

- натрий хлористый, химически чистый, ГОСТ 4233;

- этилацетат, чистый для анализа, ГОСТ 22300.

5.3. Вспомогательные устройства, материалы:

- алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами - ГОСТ 25336;

- аппарат для встряхивания проб с возвратно-поступательным направлением колебаний, с максимальной загрузкой 10 кг, с амплитудой колебаний 30 мм и скоростью от 10 до 300 колебаний в минуту;

- банки полипропиленовые с крышками для экстракции вместимостью 250 см ³;

- ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 дм ³;

- вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная, ГОСТ 5556;

- виалы объемом 2 см ³, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, прокалываемой микрошприцем для автоматического дозатора проб;

- виалы с тефлоновыми прокладками, стеклянные, объемом не менее 20 см ³;

- воронки делительные на 250 и 500 см ³, ГОСТ 25336;

- воронки лабораторные, стеклянные, ГОСТ 25336;

- испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см ³, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин. с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм ³ и с диапазоном температур от 20 до 100 °C;

- колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 см ³, ГОСТ 25336;

- колбы круглодонные со шлифом объемом 100, 250 см ³ и 4000 см ³ ТС;

- колонка хроматографическая стальная, длиной 150 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, зернением 3,5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18;

- насос диафрагменный, химически стойкий на 100 %, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс, с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм ³/мин;

- предколонка хроматографическая стальная, длиной 12,5 мм, внутренним диаметром 2,1 мм. зернением 5 мкм, заполненная сорбентом с привитыми полярными группами С18;

- стаканы стеклянные, термостойкие объемом 100 - 1000 см ³, ГОСТ 25336;

- установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 см ³ и приемной конической колбой объемом 1000 см ³;

- фильтры для фильтрации проб с помощью шприца с размером пор 0,45 мкм;

- фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие, диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г;

- фильтры мембранные для очистки растворителей, диаметром 47 мм с отверстиями пор 0,45 мкм;

- центрифуга лабораторная, настольная с максимальным рабочим числом оборотов 4000 об/мин, с рабочим объемом ротора 200 см ³ - 4 ячейки, выбираемый временной диапазон работы от 0 до 100 минут и с набором полипропиленовых банок емкостью 200 см ³;

- шприц инъекционный многократного применения объемом 10 см ³, ГОСТ 22967.

Примечание: Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам, а также посуды, реактивов и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных.

VI. Требования безопасности

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

VII. Квалификация операторов

7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

VIII. Отбор проб

8.1. Отбор проб производится в соответствии с правилами ¹.

------------------------------

¹Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.

------------------------------

Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы клубней картофеля, плодов огурцов, томатов и яблок хранят в холодильнике при температуре плюс (4 2) °C не более суток, для длительного хранения пробы замораживают и хранят в полиэтиленовой таре в морозильной камере при температуре минус 18 °C.

Пробы соков храпят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс (4 2) °C не более 5 суток.

IX. Условия проведения измерении

9.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (20 5) °C, относительной влажности не более 80 %;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

X. Подготовка к определению

10.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка колонок с окисью алюминия для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонках с окисью алюминия, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах N 1, N 2, установление градуировочной характеристики.

Подготовка органических растворителей.

10.1.1. Очистка ацетонитрила.

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм ³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см ³ аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,5 °C, отбрасывают.

10.1.2. Очистка ацетона.

Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм ³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см ³ аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 мг/дм ³. Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,2 °C, отбрасывают.

10.1.3. Очистка этилацетата.

Этилацетат, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм ³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем этилацетат сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см ³ аппарата для перегонки растворителей.

Этилацетат перегоняют при температуре плюс 77,1 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 77,1 °C, отбрасывают.

10.1.4. Очистка гексана.

Гексан, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм ³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем гексан сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см ³ аппарата для перегонки растворителей.

Гексан перегоняют при температуре плюс 68,7 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 68,7 °C, отбрасывают.

10.1.5. Очистка хлористого метилена.

Хлористый метилен промывают равным объемом 5 % раствора натрия углекислого кислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм ³. Выдерживают его над осушителем в течение 12 - 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см ³ аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре плюс 40,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 40,0 °C, отбрасывают.

10.1.6. Приготовление бидистиллированной воды.

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см ³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм ³ и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 100,0 °C, отбрасывают.

10.2. Приготовление растворов для проведения анализа.

10.2.1. Приготовление рабочих растворов.

10.2.1.1. Приготовление 0,01 % водного раствора муравьиной кислоты.

В мерную колбу объемом 1 дм ³ помещают 500 см ³ бидистиллированной воды, прибавляют 0,1 см ³ муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки бидистиллированной водой. Раствор используется как компонент подвижной фазы.

10.2.1.2. Приготовление 0,01 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле.

В мерную колбу объемом 1 дм ³ помещают 500 см ³ ацетонитрила, прибавляют 0,1 см ³ муравьиной кислоты, перемешивают, объем доводят до метки ацетонитрилом. Раствор используется как компонент подвижной фазы.

10.2.1.3. Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия.

400 г хлорида натрия переносят в стеклянную емкость объемом 1000 см ³, доливают 800 см ³ дистиллированной воды, помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли.

10.2.2. Приготовление градуировочных растворов.

10.2.2.1. Стандартный раствор N 1 концентрацией сульфоксафлора 100,0 мкг/см ³.

Взвешивают 10 мг сульфоксафлора в мерной колбе объемом 100 см ³. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании. Полученный стандартный раствор N 1 используют для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 1 хранят в холодильнике температуре плюс (4 2) °C в течение 3 месяцев.

10.2.2.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией сульфоксафлора 10,0 мкг/см ³.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 10,0 см ³ и помещают в мерную колбу объемом 100 см ³. Доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании. Стандартный раствор N 2 используют для хроматографического исследования и приготовления градуировочных растворов и хранят в холодильнике температуре плюс (4 2) °C в течение 3 месяцев.

10.2.2.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией сульфоксафлора 1,0 мкг/см ³.

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 10,0 см ³ и помещают в мерную колбу объемом 100 см ³. Доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 3 используют для хроматографического исследования и приготовления градуировочных растворов и хранят в холодильнике температуре плюс (4 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией сульфоксафлора 0,25 мкг/см ³.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 2,5 см ³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см ³. Доводят объем до метки смесью 0,01 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле с 0,01 % водным раствором муравьиной кислоты в соотношении 95:5 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 4 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике температуре плюс (4 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией сульфоксафлора 0,2 мкг/см ³.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 2,0 см ³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см ³. Доводят объем до метки смесью 0,01 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле с 0,01 % водным раствором муравьиной кислоты в соотношении 95:5 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 5 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике температуре плюс (4 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией сульфоксафлора 0,15 мкг/см ³.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 1,5 см ³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см ³. Доводят объем до метки смесью 0,01 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле с 0,01 % водным раствором муравьиной кислоты в соотношении 95:5 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 6 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике температуре плюс (4 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.7. Стандартный раствор N 7 с концентрацией сульфоксафлора 0,1 мкг/см ³.

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 2,5 см ³ и помещают в мерную колбу объемом 25 см ³. Доводят объем до метки смесью 0,01 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле с 0,01 % водным раствором муравьиной кислоты в соотношении 95:5 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 7 используют для приготовления градуировочных растворов, для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике при температуре плюс (4 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.8. Стандартный раствор N 8 с концентрацией сульфоксафлора 0,07 мкг/см ³.

Из стандартного раствора N 7 отбирают пипеткой 7,0 см ³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см ³. Доводят объем до метки смесью 0,01 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле с 0,01 % водным раствором муравьиной кислоты в соотношении 95:5 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 8 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике температуре плюс (4 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.9. Стандартный раствор N 9 с концентрацией сульфоксафлора 0,02 мкг/см ³.

Из стандартного раствора N 7 отбирают пипеткой 2,0 см ³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см ³. Доводят объем до метки смесью 0,01 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле с 0,01 % водным раствором муравьиной кислоты в соотношении 95:5 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 9 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике температуре плюс (4 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.10. Стандартный раствор N 10 с концентрацией сульфоксафлора 0,01 мкг/см ³.

Из стандартного раствора N 7 отбирают пипеткой 1,0 см ³ и помещают в мерную колбу объемом 10 см ³. Доводят объем до метки смесью 0,01 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле с 0,01 % водным раствором муравьиной кислоты в соотношении 95:5 (по объему) и перемешивают. Стандартный раствор N 10 используют для установления градуировочной характеристики и хранят в холодильнике температуре плюс (4 2) °C в течение 1 месяца.

10.2.2.11. Стандартные растворы сульфоксафлора с концентрацией 5,00; 4,00; 2,50; 2,00; 1,00; 0,50; 0,25; 0,20; 0,10 и 0,05 мкг/см ³ для внесения в контрольные образцы матриц.

Методом последовательного разведения ацетонитрилом стандартного раствора N 2 готовят растворы, содержащие по 5,00; 4,00; 2,50; 2,00; 1,00; 0,50; 0,25; 0,20; 0,10 и 0,05 мкг/см ³ сульфоксафлора и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы анализируемых матриц. Растворы для внесения готовят непосредственно перед использованием.

10.3. Установление градуировочной характеристики.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость отклика фрагментарного иона, используемого для количественного определения, от концентрации сульфоксафлора в растворе, устанавливают методом абсолютной калибровки по 6 растворам для градуировки с концентрацией 0,01; 0,02; 0,07; 0,15; 0,20 и 0,25 мкг/см ³.

В инжектор хроматографа вводят по 10 мм ³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.7. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

Производят расчет параметров градуировочной характеристики (при помощи программного обеспечения): формулы зависимости отклика фрагментарного иона от концентрации сульфоксафлора в растворе, коэффициента корреляции, который должен быть не менее 0,995 и регрессионных остатков, которые не должны превышать 20 % для каждого уровня градуировочной характеристики.

Если линейность градуировочной характеристики была продемонстрирована, то при анализе серий образцов допускается устанавливать градуировочную характеристику методом абсолютной калибровки при однократном измерении по 5 и более уровням концентраций, охватывающим весь диапазон измерений. Данные для построения градуировочной зависимости набираются перед началом серии анализов и после ее окончания (рамочная калибровка; не менее 10 измерений не менее чем по пяти уровням концентраций). По полученным данным производят расчет параметров градуировочной характеристики. Рекомендуется в серию анализов образцов включать не более 12 инъекций.

10.4. Подготовка концентрирующих патронов N 1 (слабоосновный анионообменник с привитыми аминогруппами) для очистки экстрактов и проверка хроматографического поведения сульфоксафлора на них.

10.4.1. Подготовка концентрирующих патронов N 1 для очистки экстракта.

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 см ³/мин.

Патрон N 1 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 см ³ (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 5 см ³ ацетонитрила, элюат отбрасывают.

10.4.2. Проверка хроматографического поведения сульфоксафлора на концентрирующих патронах N 1.

В отгонную колбу объемом 100 см ³ вносят 1 см ³ раствора аналитического стандарта сульфоксафлора в ацетонитриле с концентрацией 1,0 мкг/см ³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

К сухому остатку в колбе прибавляют 5 см ³ ацетонитрила, обмывают стенки колбы и вносят на подготовленный патрон. Элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см ³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Исходную колбу обмывают еще двумя порциями ацетонитрила объемом по 5 см ³ каждая и последовательно вносят их на патрон. Элюат после прохождения каждой порции растворителя собирают в чистые отгонные колбы объемом по 100 см ³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток после упаривания каждой порции элюата растворяют в 5 см ³ смеси 0,01 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле с 0,01 % водным раствором муравьиной кислоты в соотношении 95:5 (по объему) и анализируют на содержание сульфоксафлора в условиях хроматографирования по п. 11.7.

Определяют фракции, содержащие сульфоксафлор, полноту смывания с патрона и необходимый объем элюентов.

Изучение поведения сульфоксафлора на концентрирующих патронах N 1 проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии патронов.

10.5. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии.

Хроматографическую колонку с предколонкой устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре плюс 40 °C 3 - 4 часа.

XI. Проведение измерений

11.1. Зерно зерновых колосовых культур.

11.1.1. Экстракция.

Образец измельченного зерна массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см ³, прибавляют 30 см ³ этилацетата и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют в отгонную колбу объемом 250 см ³ через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют 30 см ³ этилацетата в тех же условиях. Экстракты объединяют в отгонной колбе объемом 250 см ³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

11.1.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах N 1.

Сухой остаток, полученный по п. 11.1.1, растворяют в 5 см ³ ацетонитрила, обмывают стенки колбы, перемешивают и вносят на подготовленный патрон (п. 10.4.1), элюат собирают в чистую отгонную колбу объемом 100 см ³. Исходную колбу обмывают 5 см ³ ацетонитрила и также вносят на патрон, элюаты объединяют в отгонной колбе объемом 100 см ³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 2,5 см ³ смеси 0,01 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле с 0,01 % водным раствором муравьиной кислоты в соотношении 95:5 (по объему).

Перед анализом пробу дополнительно фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм. переносят в виалу объемом 2 см ³ для автоматического дозатора проб и анализируют на содержание сульфоксафлора в условиях хроматографирования по п. 11.7.

11.2. Солома зерновых колосовых культур.

11.2.1. Экстракция.

Образец измельченной соломы массой 2 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см ³, прибавляют 50 см ³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 95:5 (по объему) и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют в мерный цилиндр объемом 100 см ³ через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют 50 см ³ смеси ацетонитрила с водой в соотношении 95:5 (по объему) в тех же условиях. Экстракты объединяют в мерном цилиндре объемом 100 см ³, доводят объем до 100 см ³ ацетонитрилом, переносят в коническую колбу объемом 200 см ³, перемешивают и отбирают аликвоту экстракта объемом 10 см ³.

11.2.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах N 1.

Аликвоту экстракта объемом 10 см ³ вносят на подготовленный патрон (п. 10.4.1), элюат собирают в отгонную колбу объемом 100 см ³. Затем на патрон вносят 5 см ³ ацетонитрила. Элюаты объединяют в колбе объемом 100 см ³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 5 см ³ смеси 0,01 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле с 0,01 % водным раствором муравьиной кислоты в соотношении 95:5 (по объему).

Перед анализом пробу дополнительно фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм, переносят в виалу объемом 2 см ³ для автоматического дозатора проб и анализируют на содержание сульфоксафлора в условиях хроматографирования по п. 11.7.

11.3. Яблоки, плоды огурца и томата.

11.3.1. Экстракция.

Образец измельченных яблок или огурцов массой 5 г (или томатов массой 10 г) помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см ³, прибавляют 20 см ³ ацетонитрила и помещают на 5 минут в ультразвуковую ванну. Экстракт фильтруют в мерный цилиндр объемом 50 см ³ через фильтр низкой плотности. Экстракцию повторяют 20 см ³ ацетонитрила в тех же условиях. Экстракты объединяют в мерном цилиндре объемом 50 см ³, доводят объем до 50 см ³ ацетонитрилом, экстракт переносят в коническую колбу объемом 100 см ³, перемешивают и отбирают аликвоту экстракта объемом 5 см ³ и проводят очистку экстракта на концентрирующем патроне N 1 как указано в п. 11.2.2. Очистка экстракта на концентрирующих патронах N 1.

Сухой остаток растворяют в 5 см ³ смеси 0,01 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле с 0,01 % водным раствором муравьиной кислоты в соотношении 95:5 (по объему).

Перед анализом пробу дополнительно фильтруют через фильтр с размером пор 0,45 мкм, переносят в виалу объемом 2 см ³ для автоматического дозатора проб и анализируют на содержание сульфоксафлора в условиях хроматографирования по п. 11.7.

11.4. Томатный сок.

11.4.1. Экстракция.

Образец томатного сока массой 5 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 см ³, прибавляют 30 см ³ ацетонитрила и помещают на 5 минут на аппарат для встряхивания проб. Экстракт фильтруют в отгонную колбу объемом 250 см ³ через фильтр низкой плотности. Полипропиленовую банку для экстракции обмывают 10 см ³ ацетонитрила, смыв с остатками сока вносят на фильтр, фильтруют и объединяют с основным экстрактом в колбе объемом 250 см ³. Объединенный экстракт упаривают до водного остатка (~ 2 - 2,5 см ³) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

11.4.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

К остатку в колбе, полученному по п. 11.4.1, прибавляют 30 см ³ дистиллированной воды и 10 см ³ насыщенного раствора хлорида натрия, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см ³.

Исходную колбу обмывают 20 см ³ хлористого метилена, смыв переносят в ту же делительную воронку. Сульфоксафлор экстрагируют, встряхивая делительную воронку 2 минуты. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в чистую отгонную колбу объемом 250 см ³, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, помещенного в химическую воронку. Экстракцию повторяют двумя порциями хлористого метилена по 20 см ³ и 10 см ³ в тех же условиях. Экстракты объединяют в колбе объемом 250 см ³, осушитель обмывают 10 см ³ хлористого метилена, смыв объединяют с основным экстрактом. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 25 см ³ смеси 0,01 % раствора муравьиной кислоты в ацетонитриле с 0,01 % водным раствором муравьиной кислоты в соотношении 95:5 (по объему), пробу переносят в виалу объемом 2 см ³ для автоматического дозатора проб и анализируют на содержание сульфоксафлора в условиях хроматографирования по п. 11.7.

11.5. Яблочный сок.

11.5.1. Экстракция.

Образец яблочного сока массой 5 г помещают в химический стакан объемом 100 см ³, прибавляют 50 см ³ воды и 10 см ³ насыщенного раствора поваренной соли, перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 см ³.