Методические указания МУК 4.1.3907-23 "Определение остаточных количеств хлорантранилипрола в белокочанной капусте методом капиллярной газожидкостной хроматографии" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 29 июня 2023 г.)

Методические указания МУК 4.1.3907-23
"Определение остаточных количеств хлорантранилипрола в белокочанной капусте методом капиллярной газожидкостной хроматографии"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 29 июня 2023 г.)

ББК 51.231

О-62

ISBN 978-5-7508-2105-1

Введены впервые

I. Общие положения и область применения

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода капиллярной газожидкостной хроматографии (далее - ГЖХ) для определения уровня остаточных количеств хлорантранилипрола в яблочном соке в диапазоне 0,01 - 0,10 мг/кг.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

II. Физико-химические свойства

2.1. Физико-химические свойства хлорантранилипрола.

Название по ИЮПАК: 3-бром-4'-хлор-1-(3-хлор-2-пиридил)-2'-метил-6'-(метилкарбамоил)пиразол-5- карбоксанилид.

Эмпирическая формула: C ₁₈H ₁₄BrC ₂N ₅O ₂.

Молекулярная масса: 483,15.

Агрегатное состояние: мелкий порошок.

Цвет, запах: белого цвета без запаха.

Давление насыщенного пара 6,3 х 10 ^-9 мПа при плюс 25 °C.

Коэффициент распределения в системе октанол/вода при pH 7 и плюс 20 °C: К _ow logP = 2,76.

Растворимость в воде при pH 4 ~ 0,972 мг/дм ³; при pH 7 ~ 0,88 мг/дм ³; при pH 9 ~ 0,971 мг/дм ³.

Растворимость в органических растворителях: в ацетоне - 3446, в метаноле - 1714, в этилацетате - 1144, в ацетонитриле - 710 (все в мг/дм ³).

Хлорантранилипрол быстро разлагается на свету. Полураспад при фотолизе в стерильном буфере pH 7 0,37 дней при постоянном освещении. При естественном освещении фотолиз хлорантранилипрола медленнее, с ДТ ₅₀ 33 дня.

Вещество долго сохраняется в почве с ДТ ₅₀ в лаборатории 200 дней, в поле от 3 до 12 месяцев. Под покровом культур разрушается быстрее.

Стабилен при хранении в течение 2 лет.

2.2. Хлорантранилипрол относится к малоопасным веществам по острой пероральной (ЛД ₅₀ для крыс более 5000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД ₅₀ более 5000 мг/кг), но к умеренно опасным по ингаляционной токсичности (ЛК ₅₀ (4 часа) для крыс более 5100 мг/дм ³ воздуха). Не обладает генотоксичностью и онкогенными свойствами, не оказывает влияния на репродуктивную функцию.

2.3. Хлорантранилипрол - инсектицид кишечного действия, нарушающий баланс кальция в миофибриллах мускулов насекомых. Подавляет развитие вредителей из отрядов чешуекрылых, жесткокрылых (колорадский жук), двукрылых (минеры).

III. Метод измерения

3.1. Метод основан на определении хлорантранилипрола методом капиллярной ГЖХ с использованием электронозахватного детектора после его извлечения из растительного материала этилацетатом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами с последующим превращением хлорантранилипрола в его основной метаболит IN-EQW78.

Идентификация проводится по времени удерживания IN-EQW78. Количественное определение - методом абсолютной калибровки, в пересчете на хлорантранилипрол.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Избирательность метода достигается за счет подбора колонки и условий программирования.

IV. Метрологические характеристики

4.1. При соблюдении всех условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Метрологические характеристики

Анализируемый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Показатель точности (границы относительной погрешности) , %, Р = 0,95	Стандартное отклонение повторяемости,  r, %	Стандартное отклонение воспроизводимости,  R, %	Предел повторяемости, r, %	Предел воспроизводимости, R, %
Кочаны капусты	0,05 - 0,10 вкл.	25	3,1	4,3	9	12
	0,1 - 0,5 вкл.		4,5	6,3	13	18

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для хлорантранилипрола

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Полнота извлечения вещества, %	Стандартное отклонение S, %	Доверительный интервал среднего результата, , %
Кочаны капусты	0,05	0,05 - 0,50	94,4	3,7	1,7

V. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

5.1. Средства измерений:

- весы аналитические класса точности по ГОСТ Р 53228 - специальный (I), с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г;

- весы лабораторные общего назначения класса точности по ГОСТ Р 53228 - средний (III) с наибольшим пределом взвешивания до 400 г и пределом допустимой погрешности 0,5 г;

- колбы мерные на 10, 50 и 100 см ³, ГОСТ 1770;

- микрошприц объемом 10 мм ³ со шкалой деления 0,1 мм ³ и погрешностью измерения вытесняемого объема 1 %;

- пипетки мерные на 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 см ³, ГОСТ 29227;

- цилиндры мерные на 10, 25, 50, 100, 250, 500 и 1000 см ³, ГОСТ 1770;

- хроматографическая система, включающая:

- хроматограф газовый с электронозахватным детектором, снабженный приспособлениями для капиллярной колонки и системой автоматического ввода проб;

- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

5.2. Реактивы:

- хлорантранилипрол, аналитический стандарт с содержанием действующего вещества не менее 97,3 %;

- аммиак водный, 25 %, чистый для анализа, ГОСТ 3760;

- азот, особой чистоты, ГОСТ 9293;

- ацетон, химически чистый;

- ацетонитрил, особой чистоты, УФ-200 нм;

- вода дистиллированная по ГОСТ 6709 и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости);

- гелий, очищенный;

- калий марганцовокислый, чистый для анализа, ГОСТ 20490;

- кальций хлористый, чистый;

- метилен хлористый, химически чистый;

- натрий сернокислый, безводный, химически чистый, ГОСТ 4166;

- натрий углекислый, кислый, химически чистый, ГОСТ 4201;

- натрий хлористый, химически чистый, ГОСТ 4233;

- этилацетат, чистый для анализа, ГОСТ 22300.

5.3. Вспомогательные устройства, материалы:

- блок нагревательный для виал или песчаная баня;

- ванна ультразвуковая с потребляемой мощностью 140 Вт, рабочей частотой 50 Гц, рабочим объемом 4,5 дм ³;

- вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная, ГОСТ 5556;

- виалы объемом 2 см ³, закрываемые завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой, прокалываемой микрошприцем для автоматического дозатора проб;

- виалы с тефлоновыми прокладками, стеклянные, объемом не менее 40 см ³;

- воронки делительные на 250 см ³, ГОСТ 25336;

- воронки лабораторные, стеклянные, ГОСТ 25336;

- испаритель ротационный вакуумный с ручным подъемником, с диагональным конденсором и объемом испарительной колбы от 50 до 3000 см ³, с изменяемой скоростью вращения штока испарителя от 5 до 240 об/мин, с водяной баней с антикоррозионным покрытием объемом 5 дм ³ и с диапазоном температур от плюс 20 до плюс 100 °C;

- колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1000 см ³, ГОСТ 25336;

- колбы круглодонные со шлифом объемом 100, 250 см ³ и 4000 см ³ ТС;

- колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла, с внутренний диаметром 0,32 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5 % дифенила- и 95 % диметилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 мкм;

- миксер ручной погружной, мощностью 260 Ватт и с максимальной скоростью вращения от 2000 до 12500 об/мин;

- насос диафрагменный, химически стойкий на 100 %, с мощностью электропривода 245 Вт, предельным вакуумом 100 мбар/абс, с избыточным давлением 1 бар и скоростью откачки 34 дм ³/мин;

- стаканы стеклянные, термостойкие объемом 100 - 1000 см ³, ГОСТ 25336;

- установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4000 см ³ и приемной конической колбой объемом 1000 см ³;

- фильтры обеззоленные нейтральные, быстро фильтрующие, диаметром 11 см, зольность одного фильтра 0,00072 г.

Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам, а также посуды, реактивов и материалов, по качеству не хуже вышеуказанных.

VI. Требования безопасности

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

VII. Квалификация операторов

7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

VIII. Отбор проб

8.1. Отбор проб производится в соответствии с правилами ¹.

------------------------------

¹Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.

------------------------------

Пробы капусты хранят в холодильнике в полиэтиленовых пакетах при температуре плюс (4 2) °C в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранятся в морозильной камере при температуре минус 18 °C.

IX. Условия проведения измерений

9.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (20 5) °C, относительной влажности не более 80 %;

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

X. Подготовка к определению

10.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, проверка хроматографического поведения вещества, установление градуировочной характеристики.

Подготовка органических растворителей.

10.1.1. Очистка ацетонитрила.

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм ³. Выдерживают его над осушителем в течение 5 - 6 часов. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см ³ аппарата для перегонки растворителей.

Ацетонитрил перегоняют при температуре плюс 81,5 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 81,5 °C отбрасывают.

10.1.2. Очистка хлористого метилена.

Хлористый метилен промывают равным объемом 5 % раствора натрия углекислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 г/дм ³. Выдерживают его над осушителем в течение 12 - 24 часов. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см ³ аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре плюс 40,0 °С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 40,0 °C, отбрасывают.

10.1.3. Приготовление бидистиллированной воды.

Дистиллированную воду помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см ³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к ней марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм ³ и кипятят в течение 6 часов.

Собирают фракции, отогнанные при температуре плюс 100,0 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 100,0 °C отбрасывают.

10.1.4. Очистка ацетона.

Ацетон помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4000 см ³ от аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 г/дм ³.

Ацетон перегоняют при температуре плюс 56,2 °C, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше плюс 56,2 °C отбрасывают.

10.2. Приготовление вспомогательных растворов для проведения анализа.

10.2.1. Приготовление 5,0 % водного раствора аммиака для дериватизации.

Мерной пипеткой на 10 см ³ отбирают 10 см ³ 25 % раствора аммиака и переносят в мерную колбу на 50 см ³, куда предварительно наливают около 10 см ³ бидистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и доводят объем в колбе до метки бидистиллированной водой (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой). Полученный раствор хранят под тягой в течение одного месяца.

ГАРАНТ:

Нумерация подпунктов приводится в соответствии с источником

10.2.1.2. Приготовление насыщенного раствора хлорида натрия.

400 г хлорида натрия переносят в стеклянную емкость объемом 1000 см ³, доливают 800 см ³ дистиллированной воды, помещают на 15 минут в ультразвуковую ванну, а затем на 30 минут на аппарат для встряхивания проб. Получают насыщенный раствор хлорида натрия над слоем нерастворившейся соли.

10.2.2. Приготовление 5 % раствора гидрокарбоната натрия.

50 г гидрокарбоната натрия переносят в мерную колбу на 1000 см ³, добавляют 200 - 300 см ³ дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и доводят водой объем в колбе до метки. Раствор используют для очистки хлористого метилена.

10.3. Приготовление растворов аналитического стандарта хлорантранилипрола.

10.3.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией хлорантранилипрола 100,0 мкг/см ³.

Взвешивают 10 мг хлорантранилипрола в мерной колбе объемом 100 см ³. Навеску растворяют в ацетоне, помещая колбу в ультразвуковую ванну, и доводят объем до метки ацетоном. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования и установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор N 1 убирают в морозильную камеру сразу после приготовления и использования, срок хранения при температуре не выше минус 18 °C составляет 120 суток.

10.3.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией хлорантранилипрола 20,0 мкг/см ³.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 2,0 см ³, помещают в мерную колбу объемом 10 см ³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 2 используют для приготовления растворов производного хлорантранилипрола (IN-EQW78) и для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 2 убирают в морозильную камеру сразу после приготовления и использования, срок хранения при температуре не выше минус 18 °C составляет 120 суток.

10.3.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией хлорантранилипрола 10,0 мкг/см ³.

Из стандартного раствора N 1 отбирают пинеткой 1,0 см ³, помещают в мерную колбу объемом 10 см ³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 3 используют для приготовления растворов для внесения в контрольные образцы. Стандартный раствор N 3 убирают в морозильную камеру сразу после приготовления и использования, срок хранения при температуре не выше минус 18 °C составляет 120 суток.

10.3.4. Приготовление стандартных растворов хлорантранилипрола для внесения в контрольные образцы матрицы.

Из стандартного раствора N 3 путем последовательного разбавления в мерных колбах объемом 10 см ³ готовят растворы с концентрациями: 0,5; 1,0; 2,0 и 5,0 мкг/см ³, которые используют для внесения в матрицу при отработке и апробации методики. Стандартные растворы убирают в морозильную камеру сразу после приготовления и использования, срок хранения при температуре не выше минус 18 °C составляет 120 суток.

10.4. Дериватизация (превращение) хлорантранилипрола в метаболит IN-EQW7 и приготовление градуировочных растворов метаболита хлорантранилипрола IN-EQW78.

10.4.1. Дериватизация (превращение) хлорантранилипрола в метаболит IN-EQW7 с концентрацией 10 мкг/см ³ по хлорантранилипролу (стандартный раствор N 4).

Из стандартного раствора N 2 с концентрацией хлорантранилипрола 20,0 мкг/см ³ отбирают пипеткой 1,0 см ³, помещают в виалу на 40 см ³, затем удаляют растворитель током теплого воздуха.

Сухой остаток в виале растворяют в 0,4 см ³ ацетонитрила при помощи ультразвуковой ванны в течение 2 минут. В виалу добавляют 1 см ³ 5,0 % водного раствора аммиака и перемешивают содержимое в ультразвуковой ванне еще 2 минуты. Плотно закрывают виалу крышкой и помещают в блок для виал, нагретый до плюс 75 °C. Виалу выдерживают в блоке в течение 2 часов. Далее виалу охлаждают до комнатной температуры, добавляют в нее 10 см ³ этилацетата, закрывают виалу крышкой и интенсивно встряхивают в течение 30 секунд. Добавляют в виалу 2 г безводного сульфата натрия и снова интенсивно встряхивают в течение 30 секунд. После полного разделения фаз из верхнего этилацетатного слоя отбирают аликвоту 5 см ³ и переносят в отгонную колбу объемом 100 см ³. Затем выпаривают растворитель на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше плюс 35 °C. Сухой остаток растворяют в 10 см ³ ацетона и переносят в чистую виалу. Получают раствор метаболита хлорантранилипрола (IN-EQW78) с концентрацией, по хлорантранилипролу равной 10 мкг/см ³. Раствор убирают в холодильник сразу после приготовления и использования, срок хранения в холодильнике при температуре плюс (4 2) °C составляет 120 суток.

10.4.2. Приготовление градуировочных растворов IN-EQW7.

10.4.2.1. Стандартный раствор N 5 с концентрацией IN-EQW7 1,0 мкг/см ³ по хлорантранилипролу.

Из стандартного раствора N 4 отбирают пипеткой 1,0 см ³, помещают в мерную колбу объемом 10 см ³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 5 используют для приготовления растворов для установления градуировочной характеристики. Раствор убирают в морозильную камеру сразу после приготовления и использования, срок хранения при температуре не выше минус 18 °C составляет 14 суток.

10.4.2.2. Стандартный раствор N 6 с концентрацией IN-EQW7 0,50 мкг/см ³ по хлорантранилипролу.

Из стандартного раствора N 5 отбирают пипеткой 5,0 см ³, помещают в мерную колбу объемом 10 см ³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 6 используют для установления градуировочной характеристики. Раствор убирают в морозильную камеру сразу после приготовления и использования, срок хранения при температуре не выше минус 18 °C составляет 14 суток.

10.4.2.3. Стандартный раствор N 7 с концентрацией IN-EQW7 0,25 мкг/см ³ по хлорантранилипролу.

Из стандартного раствора N 5 отбирают пипеткой 2,5 см ³, помещают в мерную колбу объемом 10 см ³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 7 используют для установления градуировочной характеристики. Раствор убирают в морозильную камеру сразу после приготовления и использования, срок хранения при температуре не выше минус 18 °C составляет 14 суток.

10.4.2.4. Стандартный раствор N 8 с концентрацией IN-EQW7 0,10 мкг/см ³ по хлорантранилипролу.

Из стандартного раствора N 5 отбирают пипеткой 1,0 см ³, помещают в мерную колбу объемом 10 см ³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 8 используют для установления градуировочной характеристики. Раствор убирают в морозильную камеру сразу после приготовления и использования, срок хранения при температуре не выше минус 18 °C составляет 14 суток.

10.4.2.5. Стандартный раствор N 9 с концентрацией IN-EQW7 0,05 мкг/см ³ по хлорантранилипролу.

Из стандартного раствора N 6 отбирают пипеткой 1,0 см ³, помещают в мерную колбу объемом 10 см ³ и доводят объем до метки ацетоном. Стандартный раствор N 9 используют для установления градуировочной характеристики. Раствор убирают в морозильную камеру сразу после приготовления и использования, срок хранения при температуре не выше минус 18 °C составляет 14 суток.

10.5. Установление градуировочной характеристики.

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации хлорантранилипрола по его метаболиту IN-EQW7 в растворе (мкг/см ³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 0,05; 0,10; 0,25; 0,50 мкг/см ³.

В испаритель хроматографа вводят по 1 мм ³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования, указанных в п. 11.2. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

XI. Проведение измерений

11.1. Кочаны капусты.

11.1.1. Экстракция.

Образец измельченных сегментов кочанов капусты массой 10 г помещают в стеклянный стакан объемом 500 см ³, прибавляют 75 см ³ этилацетата и экстрагируют 2 минуты при помощи погружного миксера. Экстракт фильтруют через фильтр низкой плотности в отгонную колбу объемом 250 см ³. Осадок в стакане промывают 30 см ³ этилацетата и фильтруют в ту же отгонную колбу. Объединенный экстракт упаривают досуха (или до водного остатка) на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше плюс 35 °C.

11.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей.

К остатку в отгонной колбе, полученному по п. 10.1.1, прибавляют 2 см ³ ацетона, добавляют двумя порциями 40 см ³ воды, ополаскивают стенки отгонной колбы и переносят водную фазу в делительную воронку объемом 250 см ³. Добавляют 20 см ³ насыщенного раствора хлорида натрия, 30 см ³ хлористого метилена, перемешивают, дегазируют и интенсивно встряхивают в течение 2 минут. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) собирают в отгонную колбу объемом 250 см ³, пропуская его через слой безводного сульфата натрия. Повторяют экстракцию еще два раза, используя каждый раз по 30 см ³ хлористого метилена и встряхивая воронку в течение 2 минут. Хлористый метилен объединяют в отгонной колбе объемом 250 см ³ и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше плюс 35 °C.

11.1.3. Проведение дериватизации проб (получение IN-EQW78).

Сухой остаток, полученный в п. 9.1.2, переносят из отгонной колбы тремя порциями по 2 см ³ ацетона в виалу объемом 40 см ³. Растворитель удаляют током теплого воздуха.

Сухой остаток в виале растворяют в 0,4 см ³ ацетонитрила при помощи ультразвуковой ванны в течение 2 минут. В виалу добавляют 1 см ³ 5,0 % водного раствора аммиака и перемешивают содержимое в ультразвуковой ванне еще 2 минуты. Плотно закрывают виалу крышкой и помещают в блок для виал, нагретый до плюс 75 °C. Виалу выдерживают в блоке в течение 2 часов. Далее виалу охлаждают до комнатной температуры, добавляют в нее 10 см ³ этилацетата, закрывают виалу крышкой и интенсивно встряхивают в течение 30 секунд. Добавляют в виалу 2 г безводного сульфата натрия и снова интенсивно встряхивают в течение 30 секунд. После полного разделения фаз из верхнего этилацетатного слоя отбирают аликвоту 5 см ³ и переносят в отгонную колбу объемом 100 см ³. Затем выпаривают растворитель на ротационном вакуумном испарителе при температуре водяной бани не выше плюс 35 °C.

Сухой остаток в отгонной колбе растворяют в 5 см ³ ацетона и 1 мм ³ вводят в хроматограф.

11.2. Условия хроматографирования.

11.2.1. Хроматографическая система, включающая:

- хроматограф газовый с электронозахватным детектором, снабженный приспособлениями для капиллярной колонки;

- компьютерное программное обеспечение, контролирующее работу всего прибора, обеспечивающее сбор и хранение всех хроматограмм в процессе проведения хроматографического анализа, обеспечивающее обработку результатов измерений, вывод и расчет хроматограмм и количественный анализ.

Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла, с внутренний диаметром 0,32 мм, длиной 30 м, с неподвижной фазой, содержащей 5 % фенилсилоксана и 95 % метилсилоксана, толщина пленки 0,25 мкм.

Температура детектора - плюс 320 °C, поток поддува в детектор постоянный (азот) - 30,0 см ³/мин.

Температура испарителя - плюс 300 °C, газ-носитель - гелий, режим с делением потока (сплит), деление потока 20:1, общий поток 57,6 см ³/мин, расход сбросной 52 см ³/мин. Поток обдува септы - 3 см ³/мин.

Температура колонки: градиентный нагрев колонки, начиная с плюс 180 °C (выдержка 1 мин) по 25 град/мин до плюс 270 °C (выдержка 0 мин), нагрев по 5 град/мин до плюс 300 °C (выдержка 5 мин). Поток газа-носителя (гелий) - 2,6 см ³/мин, скорость 48,6 см/сек.

Объем вводимой пробы: 1 мм ³.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 0,05 - 0,50 нг.

Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор производного хлорантранилипрола (IN-EQW78) с концентрацией в пересчете на хлорантранилипрол 0,5 мкг/см ³, соответственно разбавляют.

XII. Обработка результатов измерения

12.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используется компьютерное программное обеспечение химического анализа, которое входит в хроматографическую систему.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание хлорантранилипрола в пробах рассчитывают по формуле, без учета полноты извлечения вещества из проб:

,

(1)

где Х - содержание хлорантранилипрола в пробе, мг/кг;

S _ст - высота (площадь) пика стандарта, Hz;

S _пр - высота (площадь) пика образца, Hz;

А - концентрация стандартного раствора, мкг/см ³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см ³;

m - масса анализируемого образца, г;

P - содержание хлорантранилипрола в аналитическом стандарте, %.

XIII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

13.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости:

,

(2)

где Х ₁, Х ₂ - результаты параллельных определений, мг/кг или мг/дм ³;

r - значение предела повторяемости (таблица 1), при этом r = 2,8 х  _r.

При невыполнении условия (2) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

XIV. Оформление результатов

14.1. Результат анализа представляют в виде:

() мг/кг, при вероятности Р = 0,95,

где - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

,

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

- при определении остаточного количества хлорантранилипрола в капусте содержание вещества в пробе менее 0,05 мг/кг;

Примечание: 0,05 мг/кг - предел обнаружения определяемой концентрации хлорантранилипрола в капусте.

XV. Контроль качества результатов измерений

15.1. Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6.

Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание производного Хлорантранилипрола (IN-EQW78) в пересчете на хлорантранилипрол в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,05 до 0,50 мкг/см ³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

,

(3)

Х - концентрация хлорантранилипрола (IN-EQW78) в пересчете на хлорантранилипрол контрольного измерения, мкг/см ³;

С - известная концентрация градуировочного раствора производного хлорантранилипрола (IN-EQW78) в пересчете на хлорантранилипрол в ацетоне, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см ³;

10 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (А) превышает 10 %, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов производного хлорантранилипрола (IN-EQW78), предусмотренных методикой выполнения измерений. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 10.3.

15.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки С _д должна удовлетворять условию:

,

где , () - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом:

,

где - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

,

где - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

Результат контроля процедуры К _к рассчитывают по формуле:

,

(4)

где , , С _д - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 13.1), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

,

(5)

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К _к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

,

(6)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (6) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (6) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

15.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

,

где Х ₁, Х ₂ - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 1), %.

Библиографические ссылки

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. ГОСТ Р 8.563 "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики (методы) измерений".

3. ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

4. ГОСТ 12.0.004 "Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения".

5. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

6. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

7. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования".

8. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

9. ГОСТ 12.0.004 "Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения".

10. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

11. ГОСТ 1770 (ИСО 1042, ИСО 4788) "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

12. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

13. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

14. ГОСТ 6709 "Вода дистиллированная. Технические условия".

15. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

16. ГОСТ 5556 "Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия".

17. ГОСТ 9293 "Азот газообразный и жидкий. Технические условия".

18. ГОСТ 2603 "Реактивы. Ацетон. Технические условия"

19. ГОСТ 20490 "Реактивы. Калий марганцовокислый. Технические условия".

20. ГОСТ 4166 "Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия".

21. ГОСТ 4201 "Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия".

22. ГОСТ 4233 "Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия".

23. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов, утвержденные заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 N 2051-79.

24. ГОСТ Р 51809 "Капуста белокочанная свежая, реализуемая в розничной торговой сети. Технические условия".

25. ГОСТ 1724 "Капуста белокочанная свежая, заготовляемая и поставляемая. Технические условия".