Методические указания МУК 4.1.3841-23 "Методика измерений массовой концентрации (+-)-1-[4-[[2-(1-метилэтокси)этокси)метил]фенокси]-3-[(1-метилэтил)амино] -2-пропанола фумарата (2:1) (соль) (бисопролола фумарат) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 18 января 2023 г.)

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания МУК 4.1.3841-23
"Методика измерений массовой концентрации ()-1-[4-[[2-(1-метилэтокси)этокси)метил]фенокси]-3-[(1-метилэтил)амино]-2-пропанола фумарата (2:1) (соль) (бисопролола фумарат) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 18 января 2023 г.)

Введены впервые

Свидетельство о государственной метрологической аттестации N 205-07/RA.RU.311787/2020.

I. Общие положения и область применения

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для измерений массовой концентрации бисопролола фумарата в воздухе рабочей зоны в диапазоне массовых концентраций 0,005 - 0,05 мг/м ³.

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области качества и безопасности воздуха рабочей зоны по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

II. Физико-химические и токсикологические свойства

2.1. Физико-химические свойства бисопролола фумарата.

Эмпирическая формула: [C ₁₈H ₃₁NO ₄] ₂·C ₄H ₄O ₄.

Молекулярная масса: 766,958.

Регистрационный номер CAS: 104344-23-2.

Бисопролола фумарат - белый или почти белый кристаллический порошок с температурой плавления плюс 100 - 105 °C, растворим в воде, этаноле, метаноле, диметилсульфоксиде.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.2. Токсикологическая характеристика бисопролола фумарата:

- гипотензивное, антиангинальное, антиаритмическое средство, высокоактивный кардиоселективный  ₁-адреноблокатор длительного действия, при передозировке наблюдается брадикардия, артериальная гипотензия, сердечная недостаточность;

- умеренно опасен при введении внутрь, кумулятивная активность слабая, обладает общетоксическим действием.

III. Метрологические характеристики

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой при выполнении измерений массовой концентрации бисопролола фумарата метрологические характеристики не превышают значений, представленных в табл. 1 (при доверительной вероятности Р = 0,95).

Таблица 1

Метрологические характеристики методики

Диапазон измерений массовой концентрации бисопролола фумарата, мг/м 3	Показатель точности (границы относительной погрешности), , %, при Р = 0,95	Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости),  r, %	Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости),  R, %	Предел повторяемости, r, %, Р = 0,95, n = 2	Критическая разность для результатов анализа, полученных в двух лабораториях, CD 0,95, % (n 1 = n 2 = 2)
От 0,005 до 0,05 вкл.	25,0	6,0	9,0	17,0	22,0

IV. Метод измерений

4.1. Измерение массовой концентрации бисопролола фумарата выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием. Метод основан на разделении бисопролола фумарата и других компонентов анализируемой смеси на хроматографической колонке, заполненной сорбентом с последующей регистрацией бисопролола фумарата с помощью ультрафиолетового детектора. Сигнал детектора прямо пропорционален концентрации бисопролола фумарата.

Измерение проводят при длине волны 225 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на аналитические аэрозольные фильтры.

Минимально определяемое содержание бисопролола фумарата в анализируемом объеме пробы - 0,04 мкг.

Нижний предел измерений массовой концентрации бисопролола фумарата в воздухе - 0,005 мг/м ³ (при отборе 800 дм ³ воздуха).

Метод специфичен в условиях приготовления препаративных форм на основе бисопролола фумарата. Измерению не мешают: кальция гидрофосфат безводный, крахмал кукурузный, кремния диоксид коллоидный, целлюлоза микрокристаллическая, кросповидон, магния стеарат, гипромеллоза, макрогол 400.

V. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

5.1. Средства измерений

Хроматограф жидкостной, с градиентной системой элюирования, ультрафиолетовым детектором, с термостатом колонки и соответствующей системой сбора данных
Весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания 200 г, диапазон взвешивания по шкале 1 - 100 мг, цена деления шкалы 1 мг, погрешность взвешивания по шкале 0,2 мг	ГОСТ OIML R 76-1
Аспирационное устройство трехканальное с диапазоном расхода 40,0 - 200 дм 3/мин и пределом допустимой погрешности 5 %	ТУ 4215-000-11696625
Колбы мерные, 2-50-2, 2-100-2, 2-2000-2	ГОСТ 1770
Пипетки 1-1-2-1, 1-1-2-5, 1-2-2-10, 1-2-2-25	ГОСТ 29227
Пробирки мерные с пришлифованными пробками, П-2-10-14/23 ХС	ГОСТ 1770
Цилиндры мерные 1-500, 1-1000	ГОСТ 1770
Микрошприц для хроматографии вместимостью 0,10 см 3	ТУ 4215-002-84030495

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

5.2. Реактивы

Бисопролола фумарат с содержанием основного вещества не менее 99 % в пересчете на сухое вещество	ФС 001636-100417
Кислота ортофосфорная, чистая для анализа, 85 %, плотность 1,69 г/см 3	ГОСТ 6552
Ацетонитрил особо чистый	ТУ 6-09-14-2167
Спирт метиловый, химически чистый	ГОСТ 6995
Вода дистиллированная	ГОСТ Р 58144
Вода особо чистая	ТУ 6-09-2502

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

5.3. Вспомогательные устройства и материалы

Колонка аналитическая, размером 250 мм х 4,6 мм, заполненная октадецилсилил-силикагелем С 18 с размером частиц 5,0 мкм
Аналитические аэрозольные фильтры гидрофобные на основе перхлорвинила с площадью рабочей поверхности 20 см 2	ТУ 95-1892
Фильтродержатели	ТУ 95-1021
Мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм	ТУ 9471-002-10471723
Бюксы стеклянные, СН 70/35	ГОСТ 25336
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336
Воронки химические	ГОСТ 25336
Фольга алюминиевая для упаковки	ГОСТ 745
Дистиллятор	ГОСТ Р 50444

Примечание. Допускается применение оборудования, вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

VI. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007, ГОСТ 12.1.005.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Необходимо провести обучение работающих правилам безопасности труда согласно ГОСТ 12.0.004.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать гигиенических нормативов ⁶.

ГАРАНТ:

Нумерация сноски приводится в соответствии с источником

------------------------------

⁶Таблицы 2.1 и 2.2 СанПин 1.2.3685-21 "Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и/или безвредности для человека факторов среды обитания", утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 2 (зарегистрировано Минюстом России 29.01.2021 регистрационный N 62296).

------------------------------

VII. Квалификация оператора

7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

VIII. Условия измерений

8.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

- температура воздуха плюс	(20 5) °C;
- атмосферное давление	(84 - 106) кПа;
- относительная влажность воздуха не более	80 %.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

IX. Подготовка к выполнению измерений

9.1. Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб воздуха.

Приготовление растворов

9.2. Приготовление основного раствора бисопролола фумарата: основной раствор бисопролола фумарата с массовой концентрацией 500 мкг/см ³ готовят растворением (0,0500 0,0002) г бисопролола фумарата в спирте метиловом в мерной колбе вместимостью 100 см ³. Срок хранения раствора 2 недели в холодильнике.

9.3. Приготовление рабочего раствора бисопролола фумарата N 1: рабочий раствор бисопролола фумарата N 1 с массовой концентрацией 100 мкг/см ³ готовят разбавлением 10,0 см ³ основного раствора бисопролола фумарата спиртом метиловым в мерной колбе вместимостью 50 см ³. Срок хранения раствора 1 неделя в холодильнике.

9.4. Приготовление рабочего раствора бисопролола фумарата N 2: рабочий раствор бисопролола фумарата N 2 с массовой концентрацией 20 мкг/см ³ готовят разбавлением 10,0 см ³ рабочего раствора бисопролола фумарата N 1 спиртом метиловым в мерной колбе вместимостью 50 см ³. Срок хранения раствора 1 сутки в холодильнике.

Примечание. Растворы бисопролола фумарата следует предохранять от света путем обертывания мерных колб алюминиевой фольгой или используя посуду из темного стекла.

9.5. Приготовление подвижной фазы А: 0,8 %-й раствор ортофосфорной кислоты в воде особо чистой: в мерную колбу вместимостью 2000 см ³, наливают 1400 см ³ воды особо чистой, с помощью пипетки вместимостью 25 см ³ добавляют 11,8 см ³ ортофосфорной кислоты 85 % и перемешивают, доводят водой особо чистой до метки и снова перемешивают. Перед использованием подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазируют. Срок хранения раствора 1 месяц в хорошо укупоренной таре в защищенном от света месте в холодильнике.

9.6. Приготовление подвижной фазы В: 0,8 %-й раствор ортофосфорной кислоты в ацетонитриле: в мерную колбу вместимостью 2000 см ³ наливают 1400 см ³ ацетонитрила, с помощью пипетки вместимостью 25 см ³ добавляют 11,8 см ³ ортофосфорной кислоты 85 % и перемешивают, доводят объем ацетонитрилом до метки и снова перемешивают. Перед использованием подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазируют. Срок хранения раствора 1 месяц в хорошо укупоренной таре в защищенном от света месте в холодильнике.

Подготовка хроматографа

9.7. Подготовку хроматографа проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

Установление градуировочной характеристики

9.8. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пиков (приборные единицы) от содержания бисопролола фумарата в анализируемом объеме градуировочных растворов, устанавливают по методу абсолютной градуировки по шести сериям измерений по семи концентрациям вещества в каждой серии и контрольного раствора N 0 согласно табл. 2.

Таблица 2

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении бисопролола фумарата

Номер градуировочного раствора	Объем рабочего раствора N 1 с концентрацией бисопролола фумарата, 100 мкг/см 3, см 3	Объем рабочего раствора N 2 с концентрацией бисопролола фумарата, 20 мкг/см 3, см 3	Содержание бисопролола фумарата на фильтре, мкг	Массовая концентрация бисопролола фумарата в градуировочном растворе, мкг/см 3	Содержание бисопролола фумарата в анализируемом объеме градуировочного раствора, мкг
0 *	0,00	0,0	0,0	0,0	0,00
1	0,00	0,2	4,0	0,4	0,04
2	0,00	0,3	6,0	0,6	0,06
3	0,00	0,5	10,0	1,0	0,10
4	0,16	0,0	16,0	1,6	0,16
5	0,24	0,0	24,0	2,4	0,24
6	0,32	0,0	32,0	3,2	0,32
7	0,40	0,0	40,0	4,0	0,40
Примечание: * - контрольный раствор. Градуировочные растворы используют свежеприготовленные

На аэрозольные фильтры, помещенные в бюксы, пипеткой вместимостью 1 см ³ наносят рабочий раствор бисопролола фумарата N 1 с массовой концентрацией 100 мкг/см ³ и рабочий раствор бисопролола фумарата N 2 с массовой концентрацией 20 мкг/см ³ в соответствии с табл. 2. Фильтры подсушивают при комнатной температуре и с помощью пипетки вместимостью 5,0 см ³, приливают по 5,0 см ³ спирта метилового и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтры тщательно отжимают, растворы сливают в мерные пробирки вместимостью 10 см ³. Фильтры повторно обрабатывают 5,0 см ³ спирта метилового и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтры тщательно отжимают и удаляют. Растворы сливают в те же пробирки и доводят объем до 10,0 см ³ спиртом метиловым. Далее растворы фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографические виалы. Аналогично обрабатывается чистый аналитический аэрозольный фильтр (контрольный раствор).

Инжектируют в хроматограф по 0,1 см ³ каждого из градуировочных растворов.

По полученным данным строят градуировочную характеристику зависимости площади пика (приборные единицы) от содержания бисопролола фумарата в анализируемом объеме градуировочных растворов (мкг).

Условия хроматографирования

9.9. Условия хроматографирования градуировочных растворов и анализируемых проб:

- длина волны детектора	225 нм;
- объем вводимой пробы	0,1 см 3;
- температура колонки	плюс 20 °C;
- расход подвижной фазы	1,0 см 3/мин;
- подвижная фаза А (далее - ПФ А) - 0,8 % раствор ортофосфорной кислоты в воде особо чистой;
- подвижная фаза В (далее - ПФ В) - 0,8 % раствор ортофосфорной кислоты в ацетонитриле;
- время удерживания бисопролола фумарата не менее (22,0 1,0) мин.

Таблица 3

Градиентная программа

Время, мин	ПФ А, %	ПФ В, %
0 4	95	5
4 8	95 80	5 20
8 15	80	20
15 34	80 20	20 80
34 36	20	80

Контроль стабильности градуировочной характеристики

9.10. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа (после ремонта и поверки прибора). Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества по п. 9.8 (соответствующих началу, середине и концу диапазона измерений) и анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

, где

(1)

S _изм, S _гр - значение площади пика (приборные единицы) бисопролола фумарата в образце для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно;

К _гр - норматив контроля, К _гр = 0,5·, где

- границы относительной погрешности, % (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то выполняют повторное хроматографирование этого образца с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировочная характеристика не стабильна и (условие (1) не выполняется для двух или более образцов градуировочных растворов), выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов (табл. 2) для установления градуировочной характеристики, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики ее устанавливают заново.

Отбор проб воздуха

9.11. Отбор проб проводят в соответствии с ГОСТ 12.1.005 и приложением 9 к Р 2.2.2006-05.

Одновременно отбирают две пробы. При отборе проб фиксируется температура воздуха и атмосферное давление.

Воздух аспирируют через аналитический аэрозольный фильтр с площадью рабочей поверхности 20 см ², помещенный в фильтродержатель, снабженный металлической сеткой. Для определения массовой концентрации бисопролола фумарата на уровне 0,005 мг/м ³ отбирают не менее 800 дм ³ воздуха в течение 8 минут. Срок хранения отобранных проб в бюксах в течение суток в холодильнике.

X. Выполнение измерения

10.1. Аэрозольный фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс и с помощью пипетки вместимостью 5 см ³ приливают 5,0 см ³ спирта метилового, помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 15 минут для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в мерную пробирку вместимостью 10 см ³. Фильтр повторно обрабатывают 5,0 см ³ спирта метилового и оставляют на 15 минут, помешивая стеклянной палочкой, фильтр снова тщательно отжимают и удаляют. Раствор сливают в ту же пробирку, объем раствора доводят до 10 см ³ спиртом метиловым. Далее раствор фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографическую виалу.

Хроматографический анализ проб выполняют в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов.

Регистрируют не менее двух хроматограмм для каждой анализируемой пробы, соблюдая все условия, требуемые для градуировки хроматографической системы.

Устанавливают содержание бисопролола фумарата (а в мкг) в анализируемом объеме пробы по градуировочной характеристике (п. 9.8).

Примечание. Фильтрование проб проводится для удаления нерастворимых в спирте метиловом вспомогательных веществ, входящих в состав препаративных форм бисопролола фумарата.

XI. Вычисление результатов измерений

11.1. Массовую концентрацию бисопролола фумарата в воздухе рабочей зоны С, мг/м ³, вычисляют по формуле:

, где

(2)

а - содержание вещества в анализируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

В - общий объем раствора пробы, см ³;

б - анализируемый объем раствора пробы, см ³;

V ₂₀ - объем воздуха, отобранный для анализа, приведенный к условиям в соответствии с ГОСТ 8.395 при температуре 293 °К (плюс 20 °C) и атмосферном давлении 101,33 кПа (760 мм. рт. ст.), дм ³ (приложение 1 к настоящим методическим указаниям).

За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

, где

(3)

С ₁, С ₂ - результаты параллельных определений массовой концентрации бисопролола фумарата в воздухе, мг/м ³;

r - значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями методики измерений.

XII. Оформление результатов измерений

12.1. Результат количественного химического анализа представляют в виде:

, при Р = 0,95, где

- среднее арифметическое значение результатов и определений, признанных приемлемыми, мг/м ³;

- границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

Если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "массовая концентрация бисопролола фумарата менее 0,005 мг/м ³ (более 0,05 мг/м ³)".

XIII. Контроль результатов измерений

13.1. Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сравнительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью CD _0,95 по формуле:

, где

(4)

C _ср1, C _ср2 - средние значения массовой концентрации бисопролола фумарата, полученные в первой и второй лабораториях, мг/м ³;

CD _0,95 - значение критической разности, % (табл. 1).

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в п. 5.3.3 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

При разногласиях руководствуются в п. 5.3.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории

13.2. Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6 и показатель правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.