Методические указания МУК 4.1.3841-23 "Методика измерений массовой концентрации (+-)-1-[4-[[2-(1-метилэтокси)этокси)метил]фенокси]-3-[(1-метилэтил)амино] -2-пропанола фумарата (2:1) (соль) (бисопролола фумарат) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 18 января 2023 г.)

4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания МУК 4.1.3841-23
"Методика измерений массовой концентрации ()-1-[4-[[2-(1-метилэтокси)этокси)метил]фенокси]-3-[(1-метилэтил)амино]-2-пропанола фумарата (2:1) (соль) (бисопролола фумарат) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 18 января 2023 г.)

Введены впервые

Свидетельство о государственной метрологической аттестации N 205-07/RA.RU.311787/2020.

I. Общие положения и область применения

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для измерений массовой концентрации бисопролола фумарата в воздухе рабочей зоны в диапазоне массовых концентраций 0,005 - 0,05 мг/м ³.

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области качества и безопасности воздуха рабочей зоны по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

II. Физико-химические и токсикологические свойства

2.1. Физико-химические свойства бисопролола фумарата.

Эмпирическая формула: [C ₁₈H ₃₁NO ₄] ₂·C ₄H ₄O ₄.

Молекулярная масса: 766,958.

Регистрационный номер CAS: 104344-23-2.

Бисопролола фумарат - белый или почти белый кристаллический порошок с температурой плавления плюс 100 - 105 °C, растворим в воде, этаноле, метаноле, диметилсульфоксиде.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.2. Токсикологическая характеристика бисопролола фумарата:

- гипотензивное, антиангинальное, антиаритмическое средство, высокоактивный кардиоселективный  ₁-адреноблокатор длительного действия, при передозировке наблюдается брадикардия, артериальная гипотензия, сердечная недостаточность;

- умеренно опасен при введении внутрь, кумулятивная активность слабая, обладает общетоксическим действием.

III. Метрологические характеристики

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой при выполнении измерений массовой концентрации бисопролола фумарата метрологические характеристики не превышают значений, представленных в табл. 1 (при доверительной вероятности Р = 0,95).

Таблица 1

Метрологические характеристики методики

Диапазон измерений массовой концентрации бисопролола фумарата, мг/м 3	Показатель точности (границы относительной погрешности), , %, при Р = 0,95	Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости),  r, %	Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости),  R, %	Предел повторяемости, r, %, Р = 0,95, n = 2	Критическая разность для результатов анализа, полученных в двух лабораториях, CD 0,95, % (n 1 = n 2 = 2)
От 0,005 до 0,05 вкл.	25,0	6,0	9,0	17,0	22,0

IV. Метод измерений

4.1. Измерение массовой концентрации бисопролола фумарата выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием. Метод основан на разделении бисопролола фумарата и других компонентов анализируемой смеси на хроматографической колонке, заполненной сорбентом с последующей регистрацией бисопролола фумарата с помощью ультрафиолетового детектора. Сигнал детектора прямо пропорционален концентрации бисопролола фумарата.

Измерение проводят при длине волны 225 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на аналитические аэрозольные фильтры.

Минимально определяемое содержание бисопролола фумарата в анализируемом объеме пробы - 0,04 мкг.

Нижний предел измерений массовой концентрации бисопролола фумарата в воздухе - 0,005 мг/м ³ (при отборе 800 дм ³ воздуха).

Метод специфичен в условиях приготовления препаративных форм на основе бисопролола фумарата. Измерению не мешают: кальция гидрофосфат безводный, крахмал кукурузный, кремния диоксид коллоидный, целлюлоза микрокристаллическая, кросповидон, магния стеарат, гипромеллоза, макрогол 400.

V. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

5.1. Средства измерений

Хроматограф жидкостной, с градиентной системой элюирования, ультрафиолетовым детектором, с термостатом колонки и соответствующей системой сбора данных
Весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания 200 г, диапазон взвешивания по шкале 1 - 100 мг, цена деления шкалы 1 мг, погрешность взвешивания по шкале 0,2 мг	ГОСТ OIML R 76-1
Аспирационное устройство трехканальное с диапазоном расхода 40,0 - 200 дм 3/мин и пределом допустимой погрешности 5 %	ТУ 4215-000-11696625
Колбы мерные, 2-50-2, 2-100-2, 2-2000-2	ГОСТ 1770
Пипетки 1-1-2-1, 1-1-2-5, 1-2-2-10, 1-2-2-25	ГОСТ 29227
Пробирки мерные с пришлифованными пробками, П-2-10-14/23 ХС	ГОСТ 1770
Цилиндры мерные 1-500, 1-1000	ГОСТ 1770
Микрошприц для хроматографии вместимостью 0,10 см 3	ТУ 4215-002-84030495

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

5.2. Реактивы

Бисопролола фумарат с содержанием основного вещества не менее 99 % в пересчете на сухое вещество	ФС 001636-100417
Кислота ортофосфорная, чистая для анализа, 85 %, плотность 1,69 г/см 3	ГОСТ 6552
Ацетонитрил особо чистый	ТУ 6-09-14-2167
Спирт метиловый, химически чистый	ГОСТ 6995
Вода дистиллированная	ГОСТ Р 58144
Вода особо чистая	ТУ 6-09-2502

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

5.3. Вспомогательные устройства и материалы

Колонка аналитическая, размером 250 мм х 4,6 мм, заполненная октадецилсилил-силикагелем С 18 с размером частиц 5,0 мкм
Аналитические аэрозольные фильтры гидрофобные на основе перхлорвинила с площадью рабочей поверхности 20 см 2	ТУ 95-1892
Фильтродержатели	ТУ 95-1021
Мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм	ТУ 9471-002-10471723
Бюксы стеклянные, СН 70/35	ГОСТ 25336
Палочки стеклянные	ГОСТ 25336
Воронки химические	ГОСТ 25336
Фольга алюминиевая для упаковки	ГОСТ 745
Дистиллятор	ГОСТ Р 50444

Примечание. Допускается применение оборудования, вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

VI. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007, ГОСТ 12.1.005.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Необходимо провести обучение работающих правилам безопасности труда согласно ГОСТ 12.0.004.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать гигиенических нормативов ⁶.

ГАРАНТ:

Нумерация сноски приводится в соответствии с источником

------------------------------

⁶Таблицы 2.1 и 2.2 СанПин 1.2.3685-21 "Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и/или безвредности для человека факторов среды обитания", утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 2 (зарегистрировано Минюстом России 29.01.2021 регистрационный N 62296).

------------------------------

VII. Квалификация оператора

7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

VIII. Условия измерений

8.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:

- температура воздуха плюс	(20 5) °C;
- атмосферное давление	(84 - 106) кПа;
- относительная влажность воздуха не более	80 %.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

IX. Подготовка к выполнению измерений

9.1. Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб воздуха.

Приготовление растворов

9.2. Приготовление основного раствора бисопролола фумарата: основной раствор бисопролола фумарата с массовой концентрацией 500 мкг/см ³ готовят растворением (0,0500 0,0002) г бисопролола фумарата в спирте метиловом в мерной колбе вместимостью 100 см ³. Срок хранения раствора 2 недели в холодильнике.

9.3. Приготовление рабочего раствора бисопролола фумарата N 1: рабочий раствор бисопролола фумарата N 1 с массовой концентрацией 100 мкг/см ³ готовят разбавлением 10,0 см ³ основного раствора бисопролола фумарата спиртом метиловым в мерной колбе вместимостью 50 см ³. Срок хранения раствора 1 неделя в холодильнике.

9.4. Приготовление рабочего раствора бисопролола фумарата N 2: рабочий раствор бисопролола фумарата N 2 с массовой концентрацией 20 мкг/см ³ готовят разбавлением 10,0 см ³ рабочего раствора бисопролола фумарата N 1 спиртом метиловым в мерной колбе вместимостью 50 см ³. Срок хранения раствора 1 сутки в холодильнике.

Примечание. Растворы бисопролола фумарата следует предохранять от света путем обертывания мерных колб алюминиевой фольгой или используя посуду из темного стекла.

9.5. Приготовление подвижной фазы А: 0,8 %-й раствор ортофосфорной кислоты в воде особо чистой: в мерную колбу вместимостью 2000 см ³, наливают 1400 см ³ воды особо чистой, с помощью пипетки вместимостью 25 см ³ добавляют 11,8 см ³ ортофосфорной кислоты 85 % и перемешивают, доводят водой особо чистой до метки и снова перемешивают. Перед использованием подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазируют. Срок хранения раствора 1 месяц в хорошо укупоренной таре в защищенном от света месте в холодильнике.

9.6. Приготовление подвижной фазы В: 0,8 %-й раствор ортофосфорной кислоты в ацетонитриле: в мерную колбу вместимостью 2000 см ³ наливают 1400 см ³ ацетонитрила, с помощью пипетки вместимостью 25 см ³ добавляют 11,8 см ³ ортофосфорной кислоты 85 % и перемешивают, доводят объем ацетонитрилом до метки и снова перемешивают. Перед использованием подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазируют. Срок хранения раствора 1 месяц в хорошо укупоренной таре в защищенном от света месте в холодильнике.

Подготовка хроматографа

9.7. Подготовку хроматографа проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

Установление градуировочной характеристики

9.8. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пиков (приборные единицы) от содержания бисопролола фумарата в анализируемом объеме градуировочных растворов, устанавливают по методу абсолютной градуировки по шести сериям измерений по семи концентрациям вещества в каждой серии и контрольного раствора N 0 согласно табл. 2.

Таблица 2

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении бисопролола фумарата

Номер градуировочного раствора	Объем рабочего раствора N 1 с концентрацией бисопролола фумарата, 100 мкг/см 3, см 3	Объем рабочего раствора N 2 с концентрацией бисопролола фумарата, 20 мкг/см 3, см 3	Содержание бисопролола фумарата на фильтре, мкг	Массовая концентрация бисопролола фумарата в градуировочном растворе, мкг/см 3	Содержание бисопролола фумарата в анализируемом объеме градуировочного раствора, мкг
0 *	0,00	0,0	0,0	0,0	0,00
1	0,00	0,2	4,0	0,4	0,04
2	0,00	0,3	6,0	0,6	0,06
3	0,00	0,5	10,0	1,0	0,10
4	0,16	0,0	16,0	1,6	0,16
5	0,24	0,0	24,0	2,4	0,24
6	0,32	0,0	32,0	3,2	0,32
7	0,40	0,0	40,0	4,0	0,40
Примечание: * - контрольный раствор. Градуировочные растворы используют свежеприготовленные

На аэрозольные фильтры, помещенные в бюксы, пипеткой вместимостью 1 см ³ наносят рабочий раствор бисопролола фумарата N 1 с массовой концентрацией 100 мкг/см ³ и рабочий раствор бисопролола фумарата N 2 с массовой концентрацией 20 мкг/см ³ в соответствии с табл. 2. Фильтры подсушивают при комнатной температуре и с помощью пипетки вместимостью 5,0 см ³, приливают по 5,0 см ³ спирта метилового и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтры тщательно отжимают, растворы сливают в мерные пробирки вместимостью 10 см ³. Фильтры повторно обрабатывают 5,0 см ³ спирта метилового и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтры тщательно отжимают и удаляют. Растворы сливают в те же пробирки и доводят объем до 10,0 см ³ спиртом метиловым. Далее растворы фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографические виалы. Аналогично обрабатывается чистый аналитический аэрозольный фильтр (контрольный раствор).

Инжектируют в хроматограф по 0,1 см ³ каждого из градуировочных растворов.

По полученным данным строят градуировочную характеристику зависимости площади пика (приборные единицы) от содержания бисопролола фумарата в анализируемом объеме градуировочных растворов (мкг).

Условия хроматографирования

9.9. Условия хроматографирования градуировочных растворов и анализируемых проб:

- длина волны детектора	225 нм;
- объем вводимой пробы	0,1 см 3;
- температура колонки	плюс 20 °C;
- расход подвижной фазы	1,0 см 3/мин;
- подвижная фаза А (далее - ПФ А) - 0,8 % раствор ортофосфорной кислоты в воде особо чистой;
- подвижная фаза В (далее - ПФ В) - 0,8 % раствор ортофосфорной кислоты в ацетонитриле;
- время удерживания бисопролола фумарата не менее (22,0 1,0) мин.

Таблица 3

Градиентная программа

Время, мин	ПФ А, %	ПФ В, %
0 4	95	5
4 8	95 80	5 20
8 15	80	20
15 34	80 20	20 80
34 36	20	80

Контроль стабильности градуировочной характеристики

9.10. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа (после ремонта и поверки прибора). Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.

Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества по п. 9.8 (соответствующих началу, середине и концу диапазона измерений)