Методические указания МУК 4.1.3982-24 "Определение остаточных количеств ацибензолар-С-метила и его метаболита бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты (CGA210007) в воде и почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 19 февраля 2024 г.)

Методические указания МУК 4.1.3982-24
"Определение остаточных количеств ацибензолар-С-метила и его метаболита бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты (CGA210007) в воде и почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 19 февраля 2024 г.)

Дата введения 19 мая 2024 г.

I. Общие положения и область применения

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием для определения массовой концентрации ацибензолар-С-метила и его метаболита бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновой кислоты в воде в диапазоне 0,002 - 0,050 мг/дм ³ - без разбавления, 0,002 - 2,500 мг/дм ³ - с учетом разбавления в 50 раз; в почве в диапазоне 0,01 - 0,20 мг/кг без разбавления, 0,01 - 10,00 мг/кг - с учетом разбавления в 50 раз.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

II. Физико-химические свойства

2.1. Ацибензолар-С-метил - S-метил бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоксилат ¹. Брутто-формула: C ₈H ₆N ₂OS ₂. Молекулярная масса 210,3 г/моль.

2.2. Физические и химические свойства.

Светло-бежевый порошок. Температура плавления плюс 132,9 °C. Давление паров (в МПа): 0,44 (при плюс 25 °C). Растворимость в органических растворителях при плюс 25 °C (в г/дм ³): метанол - 4,2; этилацетат - 25; ацетон - 28; толуол - 36; гексан - 1,3. Растворимость в воде при плюс 25 °C - 7,7 мг/дм ³. Коэффициент распределения н-октанол-вода - logКow 3,1 (при плюс 20 °C, pH 7).

2.3. Краткая токсикологическая характеристика.

Острая оральная и дермальная токсичность (LD ₅₀) для крыс > 2000 мг/кг. Не раздражает кожу и слизистую глаз кроликов.

2.4. Ацибензолар-С-метил - фунгицид химического класса бензотиадиазолов, используется для борьбы с рядом инфекционных заболеваний пшеницы на ранней стадии болезни или как профилактическое средство. Применяется в качестве активатора природных защитных механизмов растений, значительно повышающих их устойчивость к мучнистой росе, септориозу, бурой ржавчине на озимой и яровой пшенице, яровом ячмене. Эффективен также против ряда заболеваний риса, табака, овощных культур.

2.5. Метаболит ацибензолар-С-метила. Бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновая кислота ¹. Брутто-формула C ₇H ₄N ₂O ₂S. Молекулярная масса 180,19 г/моль (далее - Метаболит CGA210007).

------------------------------

¹ В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

------------------------------

III. Погрешность измерений

3.1. При соблюдении условий проведения анализа ² и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

------------------------------

²ГОСТ P ИСО 5725-1 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-2 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст, ГОСТ Р ИСО 5725-4 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст (далее - ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)).

------------------------------

Таблица 3.1

Метрологические характеристики

Анализируемый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/дм 3, мг/кг	Показатель точности (границы относительной погрешности, Р = 0,95), , %	Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости),  r, %	Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости),  R, %	Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %	Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, % (P = 0,95)
Ацибензолар-С-метил
Вода	0,002 - 2,500	50	7,7	10,8	22	30
Почва	0,01 - 10,00	50	8,4	16,9	24	47
Метаболит CGA210007
Вода	0,002 - 2,500	50	7,1	10,0	20	28
Почва	0,01 - 10,00	50	8,6	17,3	24	48
Примечание: диапазон определяемых концентраций приведен с учетом разбавления экстракта образца в 50 раз.

IV. Метод измерений

4.1. Измерение концентраций ацибензолар-С-метила и его метаболита выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием.

4.2. Пробы воды очищают с помощью мембранных шприцевых фильтров с размером пор не более 0,20 мкм. Экстракцию из предварительно увлажненной почвы проводят ацетонитрилом в присутствии солей (смесь сульфата магния, хлорида натрия, буферных солей лимонной кислоты).

4.3. Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 20 пг (при определении в воде), 50 пг (при определении в почве). Средняя полнота извлечения: ацибензолар-С-метил - 95 % (вода), 85 % (почва); Метаболит CGA210007 - 100 % (вода), 91 % (почва).

4.4. Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки.

V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.

Таблица 5.1

Средства измерений

Наименование средств измерения	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
1	2
Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь, снабженный автоматическим пробоотборником и термостатом колонки	Внесено в реестр "Утвержденные типы средств измерений" Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Весы лабораторные аналитические	С пределом допустимой погрешности 0,0005 г, ГОСТ Р 53228
Весы лабораторные	С пределом допустимой погрешности 0,01 г, ГОСТ Р 53228
Меры массы	ГОСТ OIML R 111-1
Колбы мерные	Вместимостью 50, 100, 1000 см 3 типа 2-50-2, 2-100-2 и 2-1000-2, ГОСТ 1770
Цилиндры мерные	Вместимостью 25, 50 и 500 см 3, исполнение 1-4, 1(2-4)-25-2, 1(2-4)-50-2 и 1(2-4)-500-2, ГОСТ 1770
Пипетки градуированные	Вместимостью 1, 2, 5 и 10 см 3 типа 1-1(2)-2-1, 1-1(2)-2-2, 1-1(2)-2-5 и 1-1(2)-2-10, ГОСТ 29227
Прибор/приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха	Внесено в реестр "Утвержденные типы средств измерений" Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Таблица 5.2

Реактивы

Наименование реактивов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Ацибензолар-С-метил	Аналитический стандартный образец с содержанием основного компонента не менее 95 %
Бензо[1,2,3]тиадиазол-7-карбоновая кислота (CGA210007)	Аналитический стандартный образец с содержанием основного компонента не менее 95 %
Азот особой чистоты, сорт 1, в баллонах	ГОСТ 9293 (ИСО 2435)
Азотная кислота концентрированная	Химически чистая, ГОСТ 4461
Ацетонитрил	Для ВЭЖХ, чистота не менее 99,9 %
Вода	Для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная), ГОСТ Р 52501
Магний сернокислый (сульфат магния)	Безводный химически чистый
Метиловый спирт (метанол)	Химически чистый, ГОСТ 6995
Муравьиная кислота	99,7 %, чистая для анализа, ГОСТ 5848
Натрий хлористый (хлорид натрия)	Химически чистый, ГОСТ 4233
Натрий лимоннокислый двузамещенный, 1,5-водный	Химически чистый
Натрий лимоннокислый трехзамещенный, 2-водный	Химически чистый
Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

Таблица 5.3

Вспомогательное оборудование, устройства, материалы

Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Аппарат для встряхивания или орбитальный шейкер	Орбита до 10 мм, диапазон регулировки оборотов 50 - 200 об/мин
Бумага индикаторная универсальная	pH 0 - 12
Бутыли	Стеклянные, вместимостью 1000 см 3
Виалы хроматографические	Вместимостью 2 см 3 с фторопластовой септой и навинчивающейся крышкой
Груша резиновая	-
Колбы круглодонные (грушевидные) на шлифе	Типа К-1 или Гр-1 вместимостью 50 см 3 с взаимозаменяемым конусом 14/23, 19/26 или 29/32, ГОСТ 25336
Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками	Вместимостью 50 см 3
Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом	Обеспечивающий вакуум до 10 мбар
Стаканы химические с носиком	Вместимостью 100 - 150 см 3, типа В-1-100(150) или Н-1-100(150), ГОСТ 25336
Фильтры мембранные	Для фильтрации проб с помощью шприца, размер пор 0,20 мкм, мембрана - гидрофильная (политетрафторэтилен, англ. Polytetrafluoroethylene, PTFE)
Холодильная/морозильная камера	ГОСТ 26678
Хроматографическая колонка	Стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, зернением 1,8 мкм
Центрифуга лабораторная, роторная	Максимальная скорость вращения не менее 4000 об/мин
Шприцы медицинские одноразовые	Вместимостью 2 см 3, ГОСТ ISO 7886-1
Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

VI. Требования безопасности

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009. Организуется обучение работников безопасности труда.

6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 Мпа (150 кгс/см ²), осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации ³. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

------------------------------

³Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 N 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

------------------------------

6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментальное соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

VII. Условия измерений

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс 15 - 30 °C и относительной влажности не более 80 %;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.

VIII. Подготовка к выполнению измерений

8.1. Выполнению измерений предшествуют следующие операции: подготовка подвижной фазы, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление раствора для разбавления, приготовление растворов для градуировки и внесения, установление градуировочных характеристик, приготовление смеси солей для экстракции.

8.2. Приготовление растворов муравьиной кислоты.

8.2.1. Приготовление 0,1 % раствора муравьиной кислоты в воде (компонент А подвижной фазы).

В мерную колбу вместимостью 1000 см ³ помещают 500 см ³ деионизированной воды, вносят 1,0 см ³ муравьиной кислоты, доводят до метки деионизированной водой, перемешивают. При необходимости приготовленный раствор дегазируют. Компонент подвижной фазы хранят в темном месте в стеклянной бутыли не более 14 дней.

8.2.2. Приготовление 0,2 % раствора муравьиной кислоты в воде.

В мерную колбу вместимостью 1000 см ³ помещают 500 см ³ деионизированной воды, вносят 2,0 см ³ муравьиной кислоты, доводят до метки деионизированной водой, перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в темном месте в стеклянной бутыли не более 14 дней.

8.3. Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ.

Промывают колонку подвижной фазой при объемном соотношении компонентов А и Б (компонент А - 0,1 % раствор муравьиной кислоты в воде, компонент Б - метанол) 1:1 и скорости подачи растворителя 0,3 см ³/мин до установления стабильной базовой линии.

8.4. Приготовление смеси солей для экстракции ⁴.

------------------------------

⁴Примечание: возможно использование готовых наборов солей для экстракции проб фруктов и овощей (массой 6,5 г).

------------------------------

Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают (4,000,01) г магния сернокислого, (1,000,01) г натрия хлористого, (1,000,01) г натрия лимоннокислого трехзамещенного, 2-водного и (0,500,01) г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного, до использования хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев).

8.5. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.

8.5.1. Исходные растворы ацибензолар-С-метила и его метаболита CGA210007 для градуировки (концентрация 100 мкг/см ³).

В две мерные колбы вместимостью 100 см ³ помещают раздельно по (0,01000,0005) г ацибензолар-С-метила и Метаболит CGA210007, растворяют в 50 - 70 см ³ ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Растворы готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в герметично закрытой таре в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 6 месяцев.

Растворы N 1 - 8 и N 1' - 8' готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходных растворов для градуировки.

8.5.2. Раствор N 1 ацибензолар-С-метила и раствор N 1' метаболита CGA210007 для градуировки и внесения (концентрация 10 мкг/см ³).

В две мерные колбы вместимостью 100 см ³ помещают раздельно по 10 см ³ исходных растворов ацибензолар-С-метила и Метаболит CGA210007 с концентрацией 100 мкг/см ³ (п. 8.5.1), разбавляют ацетонитрилом до метки, тщательно перемешивают. Градуировочные растворы N 1 и N 1' готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике в герметично закрытой таре при температуре плюс 2 - 6 °C не более месяца.

8.5.3. Раствор N 2 ацибензолар-С-метила и раствор N 2' метаболита CGA210007 для градуировки и внесения (концентрация 1 мкг/см ³).

В две мерные колбы вместимостью 100 см ³ помещают раздельно по 10 см ³ градуировочных растворов N 1 ацибензолар-С-метила и N 1' метаболита CGA210007 с концентрацией 10 мкг/см ³ (п. 8.5.2), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Градуировочные растворы N 2 и N 2' готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике в герметично закрытой таре при температуре плюс 2 - 6 °C не более месяца.

Растворы N 1, N 2, N 1' и N 2' используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения веществ методом "внесено-найдено" и контроля качества результатов измерений методом добавок.

8.5.4. Рабочие растворы N 3 - 8 ацибензолар-С-метила для градуировки (концентрация 0,002 - 0,1 мкг/см ³).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см ³ помещают 10,0; 5,0; 2,0 и 1,0 см ³ градуировочного раствора N 2 с Концентрацией ацибензолар-С-метила 1 мкг/см ³ (п. 8.5.3), доводят до метки раствором, приготовленным по п. 8.2.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 3 - 6 с концентрацией ацибензолар-С-метила 0,1; 0,05; 0,02 и 0,01 мкг/см ³, соответственно.

В 2 мерные колбы вместимостью 100 см ³ помещают 5,0 и 2,0 см ³ градуировочного раствора N 3 с концентрацией ацибензолар-С-метила 0,1 мкг/см ³ (п. 8.5.4), доводят до метки раствором, приготовленным по п. 8.2.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 7 и N 8 с концентрацией ацибензолар-С-метила 0,005 и 0,002 мкг/см ³, соответственно.

Растворы готовят при температуре плюс 20 °C, хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более недели.

8.5.5. Рабочие растворы N 3' - 8' метаболита CGA210007 для градуировки (концентрация 0,002 - 0,1 мкг/см ³).

В 4 мерные колбы вместимостью 100 см ³ помещают 10,0; 5,0; 2,0 и 1,0 см ³ градуировочного раствора N 2' с концентрацией метаболита CGA210007 1 мкг/см ³ (п. 8.5.3), доводят до метки раствором, приготовленным по п. 8.2.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 3' - 6' с концентрацией метаболита CGA210007 0,1; 0,05; 0,02 и 0,01 мкг/см ³, соответственно.

В 2 мерные колбы вместимостью 100 см ³ помещают 5,0 и 2,0 см ³ градуировочного раствора N 3' с концентрацией метаболита CGA210007 0,1 мкг/см ³ (п. 8.5.5), доводят до метки раствором, приготовленным по п. 8.2.2, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 7' и N 8' с концентрацией метаболита CGA210007 0,005 и 0,002 мкг/см ³, соответственно.

Растворы готовят при температуре плюс 20 °C, хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более недели.

8.6. Установление градуировочных характеристик.

Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площадей пиков от концентраций ацибензолар-С-метила и его метаболита CGA210007 в растворе (мкг/см ³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 10 мм ³ каждого градуировочного раствора N 4 - 8 для определения ацибензолар-С-метила в воде и N 3 - 7 для определения ацибензолар-С-метила в почве; N 4' - 8' для определения метаболита CGA210007 в воде и N 3' - 7' для определения метаболита CGA210007 в почве, анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

Устанавливают площади пиков ацибензолар-С-метила и его метаболита CGA210007.

8.7. Контроль стабильности градуировочных характеристик.

Контроль стабильности градуировочных характеристик проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

Проводят измерения не менее двух образцов растворов для градуировки, содержание ацибензолар-С-метила и метаболита CGA210007 в которых должно входить в диапазон линейности градуировочной характеристики от 0,002 до 0,05 мкг/см ³ (при определении в воде) и от 0,005 до 0,1 мкг/см ³ (при определении в почве).

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1), (2):

;

(1)

AB,

(2)

где: А - величина расхождения, %;

Х - концентрация вещества в пробе при контрольном измерении, мкг/см ³;

С - известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см ³;

В - норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, % (равен 20 % при Р = 0,95).

Если величина расхождения (А) превышает 20 %, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов ацибензолар-С-метила и метаболита CGA210007, предусмотренных методикой измерения (МИ). При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики устанавливают ее заново в соответствии с п. 8.6.

IX. Отбор и хранение проб

9.1. Отбор проб осуществляется в соответствии с методическими документами ⁵.

------------------------------

⁵ГОСТ Р 59024 "Вода. Общие требования к отбору проб", введенный приказом Росстандарта от 10.09.2020 N 640-ст; ГОСТ 17.4.3.01 "Почвы. Общие требования к отбору проб", введенный приказом Росстандарта от 01.06.2018 N 302-ст; ГОСТ Р 58595 "Почвы. Отбор проб", введенный приказом Росстандарта от 10.10.2019 N 954-ст.

------------------------------

9.2. Пробы воды отбирают и хранят в бутылях из полиэтилена (полипропилена) при температуре плюс 2 - 6 °C не более недели. При отборе допускается консервация азотной кислотой до pH 3. Пробы почвы (предварительно подсушивают) и хранят при комнатной температуре не более 2 недель. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C.

Перед анализом образцы размораживают.

X. Выполнение определения

10.1. Вода.

Очистку проб воды проводят шприцевыми мембранными фильтрами с размером пор 0,20 мкм. Анализ проводят в условиях хроматографирования по п. 10.3.

10.2. Почва.

Образец массой 2 г помещают в полипропиленовую пробирку на 50 см ³, добавляют 2 см ³ воды и оставляют на 10 минут. После увлажнения пробу заливают 20 см ³ ацетонитрила, перемешивают, добавляют смесь солей, приготовленную по п. 8.4 и помещают на аппарат для встряхивания на 30 минут. После пробу центрифугируют не менее 5 мин при скорости вращения 4000 об/мин. Экстракт объемом 10 см ³ переносят в круглодонную колбу на 50 см ³ и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше плюс 40 °C.

Сухой остаток растворяют в 2 см ³ деионизированной воды, тщательно перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 0,20 мкм) в виалу и анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3.

10.3. Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь с источником ионизации электроспрей (англ. Electrospray ionization, ESI) при регистрация дочерних положительных ионов после разрушения материнских (регистрация "перехода"). Режим работы: мониторинг множественных реакций (англ. Multiple Reaction Monitoring, MRM).

Параметры масс-спектрометрического детектора ⁶:

------------------------------

⁶Примечание: параметры масс-спектрометрического детектора могут различаться в зависимости от марки и модели прибора.

------------------------------

ацибензолар-С-метил:

- материнский ион (масса/заряд): 211;

- дочерние ионы (масса/заряд): 136 (количественный расчет), 69,1;

- напряжение на фрагментаторе, В: 99;

- энергия разрушения (соударения), В: 33 (211136), 73 (21169,1);

метаболит CGA210007:

- материнский ион (масса/заряд): 181;

- дочерние ионы (масса/заряд): 65,1 (количественный расчет), 53,1;

- напряжение на фрагментаторе, В: 124;

- энергия разрушения (соударения), В: 25 (18165,1), 37 (18153,1);

- скорость сканирования: 200 мс;

- давление на распылителе: 35 psi;

- скорость газа распыления (азот): 12 дм ³/мин;

- скорость осушающего газа (азот): 10 дм ³/мин;

- температура осушающего газа: плюс 350 °C.

Условия хроматографирования:

- хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, зернением 1,8 мкм;

- температура колонки: плюс 40 °C;

- скорость потока элюента: 0,4 см ³/мин;

- объем вводимой пробы: 10 мм ³;

- подвижная фаза: 0,1 % раствор муравьиной кислоты в воде - метанол.

Режим элюирования градиентный (таблица 10.1), общее время анализа 6 мин.

Линейный диапазон детектирования 20 - 500 пг (при определении в воде), 50 - 1000 пг (при определении в почве).

Градиентный режим представлен в табл. 10.1.

Таблица 10.1

Градиентный режим

Время, мин	Содержание растворителя в подвижной фазе, % (по объему)
	Компонент А, %	Компонент Б, %
0	80	20
1,0	80	20
3,0	10	90
4,0	10	90
4,3	80	20
6,0	80	20

XI. Обработка результатов анализа

11.1. Содержание ацибензолар-С-метила и его метаболита CGA210007 в пробах воды (X, мг/дм ³) рассчитывают по формуле (3):

X=C·Кр,

(3)

где: С - концентрация вещества, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см ³;

Кр - коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).

11.2. Содержание ацибензолар-С-метила и его метаболита CGA210007 в почве (X', мг/кг) рассчитывают по формуле (4):

,

(4)

где: С - концентрация вещества, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, мкг/см ³;

Vк - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см ³ (2 см ³);

m - масса анализируемого образца, г (2 г);

К - коэффициент, учитывающий объем аликвоты экстракта, взятой для анализа, К = 2;

Кр - коэффициент разбавления (если экстракт подвергался разбавлению).

Идентификация и расчет концентрации вещества в пробах могут быть проведены с помощью компьютерной программы обработки хроматографических данных, включенной в аналитическую систему.

Для выражения содержания метаболита CGA210007 в эквиваленте действующего вещества ацибензолар-С-метила, уровень метаболита умножают на коэффициент, равный соотношению молекулярных масс действующего вещества и его метаболита (1,167).

11.3. Проверка приемлемости результатов параллельных определений.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости и удовлетворяет условие (5):

,

(5)

где: X ₁, X ₂ - результаты параллельных определений, мг/дм ³, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом r=2,8· _r.

При невыполнении условия (5) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

XII. Оформление результатов

12.1. Результат количественного анализа представляют в виде формулы (6):

, мг/дм ³, мг/кг,

(6)

где: - среднее арифметическое результатов определений, мг/дм ³, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/дм ³, мг/кг, рассчитанная по формуле (7).

=·X/100,

(7)

где: - граница относительной погрешности методики (показатель точности по диапазону концентраций, табл. 3.1), %.

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

Если содержание ацибензолар-С-метила и метаболита CGA210007 менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: содержание вещества в воде - менее 0,002 мг/дм ³, в почве - менее 0,01 мг/кг ⁷.

------------------------------

⁷Примечание: 0,002 мг/дм ³ - предел обнаружения ацибензолар-С-метила и метаболита CGA210007 в воде; 0,01 мг/кг - предел обнаружения ацибензолар-С-метила и метаболита CGA210007 в почве.

------------------------------

XIII. Контроль качества результатов измерений

13.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с методическими документами ⁸.

------------------------------

⁸ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6).

------------------------------

Периодичность и формы контроля определяются системой менеджмента качества лаборатории.

Библиографические ссылки

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Постановление Правительства Российской Федерации от 16.11.2020 N 1847 "Об утверждении перечня измерений, относящихся к сфере государственного регулирования обеспечения единства измерений".

3. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.

4. ГОСТ Р ИСО 5725-1 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения".

5. ГОСТ Р ИСО 5725-2 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений".

6. ГОСТ Р ИСО 5725-3 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений".

7. ГОСТ Р ИСО 5725-4 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений".

8. ГОСТ Р ИСО 5725-5 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений".

9. ГОСТ Р ИСО 5725-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

10. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

11. ГОСТ 29227 "Межгосударственный стандарт. Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

12. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

13. ГОСТ OIML R 111-1 "Гири классов E(1), Е(2), F(1), F(2), M(1), М(1-2), М(2), М(2-3) и М(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

14. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

15. ГОСТ ISO 7886-1 "Межгосударственный стандарт. Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования".

16. ГОСТ 5848 "Кислота муравьиная. Технические условия".

17. ГОСТ 6995 "Метанол-яд. Технические условия".

18. ГОСТ 4233 "Натрий хлористый. Технические условия".

19. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

20. ГОСТ 26678 "Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия".

21. ГОСТ 9293 "Азот газообразный и жидкий. Технические условия".

22. ГОСТ 4461 "Кислота азотная. Технические условия".

23. ГОСТ 12.1.007 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

24. ГОСТ 12.1.019 "Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

25. ГОСТ 12.1.004 "Пожарная безопасность. Общие требования".

26. ГОСТ 12.4.009 "Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

27. ГОСТ 59024 "Вода. Общие требования к отбору проб".

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Вместо слов "ГОСТ 59024" следует читать "ГОСТ Р 59024"

28. ГОСТ 17.4.3.01 "Почвы. Общие требования к отбору проб".

29. ГОСТ Р 58595 "Почвы. Отбор проб".

30. ГОСТ 27384 "Вода. Нормы погрешности измерений показателей состава и свойств".