Методические указания МУК 4.1.594-96 "Методические указания по хроматографическому (ВЭЖХ) определению D(-)-aльфа-аминофенилуксусной кислоты в атмосферном воздухе" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 31 октября 1996 г.)

Методические указания МУК 4.1.594-96
"Методические указания по хроматографическому (ВЭЖХ) определению D(-)-aльфа-аминофенилуксусной кислоты в атмосферном воздухе"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 31 октября 1996 г.)

Дата введения - с момента утверждения

Введены впервые

Настоящие методические указания устанавливают высокоэффективную жидкостную хроматографическую методику количественного химического анализа атмосферного воздуха для определения в нем содержания аминофенилуксусной кислоты в диапазоне концентраций 0,05-0,6 мг/м3.

C8H9O2N                 Мол. масса 151,17

D(-)-альфа-аминофенилуксусная кислота - кристаллическое вещество белого цвета. Трудно растворима в воде, метиловом и этиловом спиртах. Нерастворима в эфире, хлороформе. Хорошо растворяется в водных растворах кислот и щелочей. Температура плавления - 290°С (с разложением). В воздухе находится в виде аэрозоля.

Обладает общетоксическим действием. ОБУВ в воздухе - 0,05 мг/м3.

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей +-20%, при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерений

Измерение концентрации D(-)-альфа-аминофенилуксусной кислоты выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием. Концентрирование вещества из воздуха осуществляют на фильтр. Десорбцию проводят элюентом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы 0,25 мкг.

Определению не мешает присутствие L-фенилаланина.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.

3.1. Средства измерений

Микроколоночный хроматограф жидкостный "Милихром" (или другой модели) с УФ-детектором
Барометр-анероид М-67	ТУ 2504-1797-75
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104-80Е

ГАРАНТ:

См. ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания", утвержденный приказом Ростехрегулирования от 25 декабря 2008 г. N 739-ст

Линейка измерительная	ГОСТ 17435-72
Лупа измерительная	ГОСТ 8309-75
Меры массы	ГОСТ 7328-82Е

См. ГОСТ OIML R 111-1-2009 "Государственная система обеспечения единства измерений. Гири классов , , , , , , , и . Часть 1. Метрологические и технические требования", введеный в действие приказом Росстандарта от 22 августа 2011 г. N 233-ст

Посуда стеклянная лабораторная	ГОСТ 1770-74Е и 20292-74Е
Пробирки с пришлифованными пробками вместимостью 10 см3	ГОСТ 5072-79
Секундомер СДС пр-1-2-000	ГОСТ 5072-79
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2; пределы 0-55°С, цена деления 1°С	ГОСТ 215-73Е
Электроаспиратор ЭА-1, погрешность +-10%, Госреестр N 997-77	ТУ 25-11-1414-78

ГАРАНТ:

Взамен ГОСТ 8309-75 постановлением Госстандарта СССР от 8 апреля 1993 г. N 1684 с 1 января 1984 г. введен в действие ГОСТ 25706-83

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Имеется в виду "Пробирки с пришлифованными пробками..." по ГОСТ 10515-75

Взамен ГОСТ 10515-75 постановлением Госстандарта СССР от 15 июля 1982 г. N 2670 с 1 января 1984 г. введен в действие ГОСТ 25336-82

3.2. Вспомогательные устройства

Хроматографическая колонка длиной 120 мм и внутренним диаметром 2 мм, заполненная
сорбентом "Силасорб Sph С18" с размером зерен 6,0 мкм (Чехия)
Дистиллятор	ТУ 61-1-721-79
Фильтродержатель, производство ВО "Изотоп"

3.3. Материалы

Фильтр АФА-ВП-20

ТУ 85-743-80

3.4. Реактивы

D(-)-альфа-аминофенилуксусная кислота, ч.	ТУ 6-09-4455-77
Дистиллированная вода	ГОСТ 6709-79
Калий фосфорнокислый однозамещенный	ТУ 4198-75

4. Требования безопасности

4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.

4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают лиц, имеющих квалификацию не ниже инженера-химика, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях согласно ГОСТу 15150-69 при температуре воздуха (20+-10)°С, атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

7.1. Приготовление растворов

Элюент: 0,015 М фосфатный буферный раствор (рН = 4,6).

Готовят растворением 2,05 г калия фосфорного однозамещенного в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1,0 дм3.

Исходный раствор аминофенилуксусной кислоты для градуировки (р = 0,5 мг/см3).

50 мг вещества вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят до метки элюентом и тщательно перемешивают. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

7.2. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику устанавливают на градуировочных растворах аминофенилуксусной кислоты. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (мм2) от массы аминофенилуксусной кислоты (мкг) и строится по 5-ти сериям растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 5-ти растворов, готовят в мерных колбах вместимостью 50 см3. Для этого в каждую колбу вносят исходный раствор для градуировки в соответствии с табл. 1, доводят объем элюентом до метки и тщательно перемешивают.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении концентрации D(-)-альфа-аминофенилуксусной кислоты

Номер раствора для градуировки	1	2	3	4	5
Объем исходного раствора (с = 0,5 мг/см3), см	0,5	1,0	2,0	4,0	6,0
Содержание аминофенилуксусной кислоты в 50 мм3, мкг	0,25	0,5	1,0	2,0	3,0

В колонку хроматографа последовательно инжектируют по 50 мм3 каждого градуировочного раствора и анализируют в следующих условиях:

температура термостата колонки	+ 20°С
скорость подачи элюента	200 мм3/мин
длина волны УФ-детектора	202 нм
диапазон чувствительности детектора	0,8
скорость движения диаграммной ленты	6 мм/мин
время удерживания D(-)-альфа-аминофенилуксусной кислоты	2 мин 30 сек
элюирующий объем	500 мм3

На полученной хроматограмме рассчитывают площади пиков аминофенилуксусной кислоты и по средним результатам из 5-ти измерений строят градуировочную характеристику. Проверку градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал и при смене партии реактивов.

7.3. Отбор проб

Отбор проб воздуха проводят согласно ГОСТу 17.2.3.01-86. Воздух со скоростью 15 дм /мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-10, закрепленный в фильтродержателе. Продолжительность отбора 20 минут. Срок хранения проб - 5 суток.

8. Выполнение измерений

Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 3 см3 элюента и оставляют на 15 минут при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Степень десорбции с фильтра 97%.

Хроматографирование полученного раствора проводят в тех же условиях, что и при построении градуировочной характеристики по п. 7.2. Количественное определение содержания D(-)-альфа-аминофенилуксусной кислоты в хроматографируемом объеме проводят по градуировочной характеристике.

9. Вычисление результатов измерений

Концентрацию D(-)-альфа-аминофенилуксусной кислоты в атмосферном воздухе (мг/м3) вычисляют по формуле:

                    m x V

                         1

               С = --------, где

                    V x V

                     2   0

     m - масса D(-)-альфа-аминофенилуксусной  кислоты  в пробе, найденная

по градуировочной характеристике, мкг;

     V  - общий объем пробы, см3;

      1

     V  - хроматографируемый объем пробы, см3;

      2

     V  - объем  отобранного воздуха, приведенный к нормальным  условиям,

      0

дм3;

                     V x 273 x P

                      t

              V = ----------------, где

               0  (273 + t) x 760

     V  - объем воздуха, отобранный для анализа, дм3;

      t

     Р - атмосферное давление в месте отбора пробы, мм рт. ст.;

     t - температура воздуха в месте отбора пробы, °С.