Приложение 7 (обязательное). Определение безвредности, "остаточной" токсигенности, реактогенности и приживаемости вакцинного штамма холерного вибриона при внутрижелудочном введении взрослым кроликам

Приложение 7
(обязательное)

Определение безвредности, "остаточной" токсигенности, реактогенности и приживаемости вакцинного штамма холерного вибриона при внутрижелудочном введении взрослым кроликам

В опыт берут 51 взрослого кролика массой 2 - 2,5 кг. За 24 ч до эксперимента животных лишают пищи.

Перед иммунизацией кроликам вводят внутривенно 50 мг циметидина на 1 кг массы животного. Через 15 мин, используя желудочный зонд, в полость желудка вливают 15 мл 5%-го раствора соды (5 г гидрокарбоната натрия на 100 мл раствора). Еще через 15 мин через зонд повторно вливают 15 мл 5%-го раствора соды и взвесь культуры холерных вибрионов в 1 мл питательного бульона или 1%-й пептонной воды в дозах 5 х 10(7), 5 х 10(9) и 5 х 10(10) м. к. Каждую дозу вводят 16 животным. Контрольную группу из 3 кроликов обрабатывают аналогичным образом, за исключением того, что культуру холерного вибриона не вводят.

Животных до введения испытуемой культуры и ежедневно после ее введения взвешивают и термометрируют. Кроме этого, реактогенность и иммунологическую эффективность по титрам вибриоцидных и антитоксических антител определяют у кроликов, привитых аналогично для определения иммуногенности в острых опытах.

Умерщвляют опытных и контрольных кроликов через 1, 3, 7, 14, 28 и 35 - 40 сут. после введения испытуемого штамма - по 2 кролика на каждую дозу в каждый срок. Оставшихся кроликов (не умерщвленных в указанные выше сроки и погибших) исследуют в последний срок. Морфологическому исследованию подвергают животных, обработанных максимальной дозой (5 х 10(10) м.к.) и контрольных. У животных наблюдают патоморфологическую картину в тонком и толстом кишечнике и других внутренних органах, кусочки из которых берут для гистологического исследования, забирают кровь - для определения титров вибриоцидных и антитоксических антител и для определения действия штамма на иммунную систему; производят посевы кусочков органов (печень, селезенка, кровь, легкие, лимфатические узлы) и содержимого желудка, желчного пузыря, краниального и каудального отделов тонкого и толстого кишечника. Посевы производят на заранее проверенные по ростовым качествам щелочной агар и 1%-ю пептонную воду. Посевы органов производят методом отпечатков, кровь - мазком-отпечатком отсеченной верхушки сердца. У животных, умерщвленных через 7 и 28 дней содержимое желудка, кишечника и желчного пузыря засевают во флаконы с 1% пептонной водой для накопления холерных вибрионов и далее пересевают на пластинку щелочного агара и 1%-ю пептонную воду (вторая среда накопления). Погибших животных исследуют так же, как и умерщвленных, обращая внимание на несвойственные для холеры изменения, связанные с возможным обострением скрытой инфекции.

После проведения посевов для гистологического исследования в каждом случае берут кусочки легких, сердца, печени, селезенки, почек с надпочечниками и несколько (3 - 4) отрезков толстого и тонкого кишечника. Перед взятием перевязывают отрезки кишечника длиной 3 - 4 см, в просвет вводят шприцем 10%-й раствор формалина. После взятия материал помещают в 10% раствор нейтрального формалина, затем обезвоживают, заливают в парафин, срезы окрашивают гематоксилином и эозином для обзорных исследований. В случае необходимости применяют специальные методы окраски препаратов.