Методические указания МУК 4.1.763-99
"Газохроматографический метод количественного определения ацетона в биосредах (моча)"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 6 июля 1999 г.)
Дата введения: 6 сентября 1999 г.
Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 "Методики выполнения измерений" и ГОСТа Р1.5-92 "Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов". Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение ацетона в диапазоне концентраций 0,01-0,20 мкг/см3.
СН3СОСН3 Мол. масса - 58,08
Диметилкетон (ацетон) - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Т_кип - 56,24°С, Т_плавл - минус 95,35°С. Ацетон растворим в воде и органических растворителях. Ацетон - наркотик, относится к 4 классу опасности.
Общая погрешность метода определения ацетона - 16,5%.
Сущность метода
Методика основана на предварительном выделении ацетона из биологического материала путем нагревания объекта и последующего газохроматографического анализа парогазовой фазы.
Измерение концентрации ацетона выполняют методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием.
Определению не мешают этанол, бензол и др. ароматические углеводороды, метилэтилкетон.
Длительность анализа - 10 мин.
Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы
При выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными метрологическими характеристиками.
Средства измерений
|
Хроматограф газовый с пламенно-ионизационным детектором
|
|
|
|
Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические
|
|
ГОСТ 24104-80Е
|
|
Секундомер "Агат"
|
|
ГОСТ 5072-79Е
|
|
Микрошприцы МШ-10
|
|
ТУ 5Е2.833.106
|
|
Шприцы медицинские стеклянные вместимостью 5 см3
|
|
ТУ 64-1-378-83
|
|
Колбы мерные вместимостью 100, 1000 см3
|
|
ГОСТ 1770-74Е
|
|
Пипетки вместимостью 1,5, 10 см3
|
|
ГОСТ 20292-74
|
Вспомогательные устройства
|
Хроматографическая колонка стеклянная длиной 3 м и внутренним диаметром 4 мм
|
|
|
|
Бидистилятор
|
|
ГОСТ 15150-69
|
|
Редуктор кислородный
|
|
ТУ 26-05-235-70
|
Материалы
|
Гелий в баллоне
|
|
ТУ 51-940-80
|
|
Водород технический
|
|
ГОСТ 3022-80
|
Реактивы
|
Полиэтиленгликоль - 1540 на хроматоне
|
|
|
|
N-cynep фракции 0,16-0,20 мм -неподвижная фаза для заполнения хроматографической колонки
|
|
|
|
Ацетон х. ч.
|
|
ТУ 6-09-1707-77
|
|
Вода дистиллированная
|
|
ГОСТ 6709-72
|
Требования к безопасности
Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям "Пожарных норм проектирования зданий и сооружений" (СНиП ПА-5-700) и "Санитарных норм проектирования промышленных предприятий"(СН-245-71) и СНиП-74.
При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76.
При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях", утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М., 1981), и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением", утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989).
При работе с реактивом соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.
При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора
Требования к квалификации оператора
К выполнению измерений допускаются лица, прошедшие специализацию по работе на газовом хроматографе.
Условия измерений
При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:
- температура воздуха - (20 +- 5)°С;
- атмосферное давление 630-800 мм рт. ст.;
- влажность воздуха - не более 80 % при температуре 25°С.
Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.
Подготовка к выполнению измерений
Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка хроматографической колонки, приготовление стандартных смесей, установление градуировочной характеристики.
Приготовление стандартных смесей
Для построения градуировочного графика собирают мочу, не содержащую определяемый компонент, и готовят серию рабочих стандартных растворов. Исходный стандартный раствор для градуировки: в колбу вместимостью 1000 см3 вводят микрошприцем 5 мм3 ацетона. Весовое содержание ацетона в исходной стандартной смеси составляет (с учетом плотности ацетона и содержания основного вещества) - 3,95 мкг/см3. Срок хранения - 3 ч.
Подготовка хроматографической колонки
Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (гелия) с расходом 30 см3/мин при температуре 200°С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.
Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной градуировки на градуировочных смесях ацетона. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (мм2) от массы ацетона (мкг) и строится по 5 сериям стандартных растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 5 стандартных растворов, готовят в мерных колбах вместимостью 100 см3. Для этого в каждую колбу вносят исходное вещество в соответствии с таблицей. Срок хранения - 3 ч.
Таблица 1
Стандартные смеси для установления градуировочной характеристики при определении концентрации ацетона (фрагмент шкалы)
|
Номер смеси для градуировки
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
|
Объем исходной стандартной смеси (3,95 мкг/см3), см3
|
0,5
|
1,0
|
2,0
|
3,0
|
5,0
|
|
Содержание ацетона, мкг/см3
|
0,02
|
0,04
|
0,08
|
0,12
|
0,20
|
В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 5 см3 парогазовой пробы каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях:
|
температура термостата колонок
|
75°С;
|
|
температура испарителя
|
100°С;
|
|
температура детектора
|
150°С;
|
|
расход газа-носителя (гелия)
|
30 см3/мин;
|
|
расход водорода
|
30 см3/мин;
|
|
расход воздуха
|
300 см3/мин;
|
|
шкала измерителя тока
|
16 х 10(-10) А;
|
|
скорость диаграммной ленты
|
240 мм/ч;
|
|
время удерживания ацетона
|
1 мин 15 с.
|
На полученной хроматограмме определяют площади пиков ацетона и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику. Градуировку проверяют 1 раз в неделю и при смене партии реактивов.
Отбор проб
Отбор проб мочи в объеме 100 см3 производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы.
Выполнение измерений
Во флакон из-под пенициллина помещают 5 см3 исследуемой биопробы. Флакон закрывают резиновой пробкой и ставят в металлический цилиндр с просверленными в стенках отверстиями и навинчивающейся крышкой. Цилиндр с флаконом погружают на 2/3 высоты в кипящую водяную баню (прилож. А). П
