Методические указания МУК 4.1.763-99 "Газохроматографический метод количественного определения ацетона в биосредах (моча)" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 6 июля 1999 г.)

Методические указания МУК 4.1.763-99
"Газохроматографический метод количественного определения ацетона в биосредах (моча)"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 6 июля 1999 г.)

Дата введения: 6 сентября 1999 г.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 "Методики выполнения измерений" и ГОСТа Р1.5-92 "Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов". Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение ацетона в диапазоне концентраций 0,01-0,20 мкг/см3.

ГАРАНТ:

См. ГОСТ Р 1.5-2012 "Стандартизация в Российской Федерации. Стандарты национальные. Правила построения, изложения, оформления и обозначения", утвержденный приказом Росстандарта от 23 ноября 2012 г. N 1147-ст

СН3СОСН3                                               Мол. масса - 58,08

Диметилкетон (ацетон) - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Т_кип - 56,24°С, Т_плавл - минус 95,35°С. Ацетон растворим в воде и органических растворителях. Ацетон - наркотик, относится к 4 классу опасности.

Общая погрешность метода определения ацетона - 16,5%.

Сущность метода

Методика основана на предварительном выделении ацетона из биологического материала путем нагревания объекта и последующего газохроматографического анализа парогазовой фазы.

Измерение концентрации ацетона выполняют методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием.

Определению не мешают этанол, бензол и др. ароматические углеводороды, метилэтилкетон.

Длительность анализа - 10 мин.

Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы

При выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными метрологическими характеристиками.

Средства измерений

Хроматограф газовый с пламенно-ионизационным детектором
Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические		ГОСТ 24104-80Е

ГАРАНТ:

См. ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания", утвержденный приказом Ростехрегулирования от 25 декабря 2008 г. N 739-ст

Секундомер "Агат"		ГОСТ 5072-79Е
Микрошприцы МШ-10		ТУ 5Е2.833.106
Шприцы медицинские стеклянные вместимостью 5 см3		ТУ 64-1-378-83
Колбы мерные вместимостью 100, 1000 см3		ГОСТ 1770-74Е
Пипетки вместимостью 1,5, 10 см3		ГОСТ 20292-74

Вспомогательные устройства

Хроматографическая колонка стеклянная длиной 3 м и внутренним диаметром 4 мм
Бидистилятор		ГОСТ 15150-69
Редуктор кислородный		ТУ 26-05-235-70

Материалы

Гелий в баллоне		ТУ 51-940-80
Водород технический		ГОСТ 3022-80

Реактивы

Полиэтиленгликоль - 1540 на хроматоне
N-cynep фракции 0,16-0,20 мм -неподвижная фаза для заполнения хроматографической колонки
Ацетон х. ч.		ТУ 6-09-1707-77
Вода дистиллированная		ГОСТ 6709-72

Требования к безопасности

Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям "Пожарных норм проектирования зданий и сооружений" (СНиП ПА-5-700) и "Санитарных норм проектирования промышленных предприятий"(СН-245-71) и СНиП-74.

При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76.

ГАРАНТ:

Взамен ГОСТ 12.1.004-85 постановлением Госстандарта СССР от 14 июня 1991 г. N 875 с 1 июля 1992 г. введен в действие ГОСТ 12.1.004-91

При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях", утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М., 1981), и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением", утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989).

При работе с реактивом соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.

При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора

Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускаются лица, прошедшие специализацию по работе на газовом хроматографе.

Условия измерений

При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:

- температура воздуха - (20 +- 5)°С;

- атмосферное давление 630-800 мм рт. ст.;

- влажность воздуха - не более 80 % при температуре 25°С.

Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.

Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка хроматографической колонки, приготовление стандартных смесей, установление градуировочной характеристики.

Приготовление стандартных смесей

Для построения градуировочного графика собирают мочу, не содержащую определяемый компонент, и готовят серию рабочих стандартных растворов. Исходный стандартный раствор для градуировки: в колбу вместимостью 1000 см3 вводят микрошприцем 5 мм3 ацетона. Весовое содержание ацетона в исходной стандартной смеси составляет (с учетом плотности ацетона и содержания основного вещества) - 3,95 мкг/см3. Срок хранения - 3 ч.

Подготовка хроматографической колонки

Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (гелия) с расходом 30 см3/мин при температуре 200°С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.

Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной градуировки на градуировочных смесях ацетона. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (мм2) от массы ацетона (мкг) и строится по 5 сериям стандартных растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 5 стандартных растворов, готовят в мерных колбах вместимостью 100 см3. Для этого в каждую колбу вносят исходное вещество в соответствии с таблицей. Срок хранения - 3 ч.

Таблица 1

Стандартные смеси для установления градуировочной характеристики при определении концентрации ацетона (фрагмент шкалы)

Номер смеси для градуировки	1	2	3	4	5
Объем исходной стандартной смеси (3,95 мкг/см3), см3	0,5	1,0	2,0	3,0	5,0
Содержание ацетона, мкг/см3	0,02	0,04	0,08	0,12	0,20

В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 5 см3 парогазовой пробы каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях:

температура термостата колонок	75°С;
температура испарителя	100°С;
температура детектора	150°С;
расход газа-носителя (гелия)	30 см3/мин;
расход водорода	30 см3/мин;
расход воздуха	300 см3/мин;
шкала измерителя тока	16 х 10(-10) А;
скорость диаграммной ленты	240 мм/ч;
время удерживания ацетона	1 мин 15 с.

На полученной хроматограмме определяют площади пиков ацетона и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику. Градуировку проверяют 1 раз в неделю и при смене партии реактивов.

Отбор проб

Отбор проб мочи в объеме 100 см3 производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы.

Выполнение измерений

Во флакон из-под пенициллина помещают 5 см3 исследуемой биопробы. Флакон закрывают резиновой пробкой и ставят в металлический цилиндр с просверленными в стенках отверстиями и навинчивающейся крышкой. Цилиндр с флаконом погружают на 2/3 высоты в кипящую водяную баню (прилож. А). По истечении 5 мин отбирают шприцем из флакона 5 см3 парогазовой фазы и вводят ее в колонку хроматографа.

Вычисление результатов измерений

На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной характеристике определяют концентрацию ацетона в биопробе.

Результат измерения содержания компонента в биопробе определяется путем трехкратного замера с учетом среднего квадратичного отклонения.

Результат анализа представляют в виде:

             Х  +- 0,165 х X  , где

              ср            ср

     X  - среднее значение замеренных концентраций, мкг/см3.

      ср

Внутренний оперативный контроль

Внутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95).

ГАРАНТ:

Взамен МИ 2335-95 Госстандартом России введена в действие с 1 октября 2003 г. рекомендация МИ 2335-2003

10.1.# Контроль сходимости выходных сигналов

Контролируемым параметром является относительный размах выходных сигналов хроматографа при вводах трех параллельных проб градуировочного раствора. Контроль осуществляется при проведении градуировки, при периодическом контроле градуировочных коэффициентов, а также при выполнении измерений.

Результат контроля признается положительным при выполнении условия:

            S    - S

             max    min

           ------------- x 100 <= 15%, где

                -

                S

     S - площадь пика, мм2;

     -

     S - среднее арифметическое  значение  площади  пиков   при   вводе 3

параллельных проб градуировочного раствора.

Оперативный контроль точности

Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.

Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50-150%. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы X и рабочей пробы с добавкой Х'. Результаты анализа исходной рабочей пробы X и рабочей пробы с добавкой X' получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:

                  |Х' - Х - С| < К , где

                                  д

     С - добавка к пробе в виде раствора с концентрацией, мкг/см3;

     К  - норматив оперативного контроля погрешности, мкг/см3.

      д

При внешнем контроле (Р = 0,95) принимают

                                     2           2

                К  = кв.корень Дельта х' + Дельта х, где

                 д

           2           2

     Дельта х' и Дельта х - характеристики   погрешностей   для  исходной

пробы и пробы с добавкой, мкг/см3.

            Дельта х' = 0,165 х Х' и Дельта х  = 0,165 х X

При внутрилабораторном контроле (Р = 0,90) принимают, что

                   К'  = 0,84 х К

                    д            д

При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют.