Методические указания МУК 4.1.767-99
"Газохроматографический метод количественного определения ароматических аминосоединений (анилин, N-метиланилин, о-толуидин, N,N-диметиланилин, N-этиланилин, N,N-диэтилaнилин) в биосредах (кровь)"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 6 июля 1999 г.)
Дата введения: 6 сентября 1999 г.
Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 "Методики выполнения измерений" и ГОСТа Р 1.5-92 "Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов".
Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение ароматических аминосоединений в крови в диапазоне концентраций:
анилин 0,035-0,2 мкг/см3,
N-метиланилин 0,030-0,3 мкг/см3,
о-толуидин 0,035-4,2 мкг/см3,
N,N-диметиланилин 0,040-0,6 мкг/см3,
N-этиланилин 0,045-0,3 мкг/см3,
N,N-диэтиланилин 0,075-0,3 мкг/см3.
Особенностью токсического действия ароматических аминосоединений являются функциональные нарушения центральной нервной системы, печени. Ароматические аминосоединения вызывают дерматиты, экземы и развитие аллергии.
АНИЛИН Мол. масса - 93,12
C6H5NH2
Анилин - маслянистая прозрачная светло-желтая жидкость со специфическим запахом. Т_кип - 184,4°С, Тплавл - минус 5,89°С. Анилин растворим в органических растворителях и труднорастворим в воде. Анилин относится ко 2 классу опасности.
N-МЕТИЛАНИЛИН Мол. масса - 107,50
C6H5NHCH3
N-метиланилин - маслянистая прозрачная жидкость желтого цвета со специфическим запахом. Т_кип - 195,7°С, Т_плавл - минус 57,0°С. N-метиланилин растворим в органических растворителях и труднорастворим в воде. N-метиланилин относится к 3 классу опасности.
О-ТОЛУИДИН Мол. масса - 107,15
C6H4NH2CH3
О-толуидин - маслообразная прозрачная жидкость от светло-желтого до красновато-коричневого. Т_кип - 199,7°С, Т_плавл - минус 24,4°С. О-толуидин растворим в органических растворителях и труднорастворим в воде. О-толуидин относится ко 2 классу опасности.
N,N-ДИМЕТИЛАНИЛИН Мол. масса - 121,18
C6H5N(CH3)2
N,N-диметиланилин - маслянистая прозрачная жидкость желтого цвета со специфическим запахом. Т_кип - 194,0°С, Тплавл - 2,45°С. N,N-диметиланилин растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. N,N-диметиланилин относится ко 2 классу опасности.
N-ЭТИЛАНИЛИН Мол. масса -121,1
C6H5NC2H5
N-этиланилин - маслянистая прозрачная жидкость с желтым оттенком со специфическим запахом. Т_кип - 204,7°С. N-этиланилин растворим в органических растворителях и труднорастворим в воде. N-этиланилин относится к 4 классу опасности.
N,N-ДИЭТИЛАНИЛИН Мол. масса - 149,23
C6H5N(C2H5)2
N,N-диэтиланилин - маслянистая прозрачная жидкость желтоватого цвета со специфическим запахом. Т_кип - 216,27°С. Т_плавл - минус 38,8°С. N,N-диэтиланилин растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. N,N-диэтиланилин относится к 4 классу опасности.
ХЛОРОФОРМ Мол. масса - 119,38
CHCl3
Хлороформ - бесцветная жидкость с характерным сладковатым запахом. Т_кип - 61,15°С, Т_плавл - минус 63,5°С. Хлороформ растворим в этаноле, эфире, бензоле, ацетоне и сероуглероде, малорастворим в воде. Хлороформ относится ко 2 классу опасности.
Методика обеспечивает выполнение измерений с суммарной погрешностью результата измерений:
анилин 18,1%,
N-метиланилин 14,8%,
о-толуидин 15,0%,
N,N-диметиланилин 12,9%,
N-этиланилин 13,5%,
N,N-диэтиланилин 14,5%
при доверительной вероятности 0,95.
Сущность метода
Методика основана на предварительном концентрировании анализируемых соединений из биологического материала экстракцией хлороформом и последующего газохроматографического анализа хлороформенного экстракта.
Измерение концентрации ароматических аминосоединений выполняют методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием.
Определению не мешают ацетон, ароматические углеводороды и алифатические спирты. Длительность анализа, включая экстракцию пробы, - 35 мин.
Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы
При выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.
Средства измерений
|
Хроматограф газовый с пламенно-ионизационным детектором
|
|
|
|
Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические
|
|
ГОСТ 24104-80Е
|
|
Секундомер "Агат"
|
|
ГОСТ 5072-79Е
|
|
Микрошприцы МШ-10
|
|
ТУ5Е2.833.106
|
|
Посуда лабораторная стеклянная
|
|
ГОСТ 1770-84
|
|
Колбы мерные вместимостью 1000 см3
|
|
ГОСТ 1770-74Е
|
|
Пипетки вместимостью 1, 5, 10 см3
|
|
ГОСТ 20292-74
|
|
Пробирки с притертыми пробками вместимостью 10 см3
|
|
ГОСТ 1770-74Е
|
Вспомогательные устройства
|
Хроматографическая колонка стальная длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм
|
|
|
|
Бидистиллятор
|
|
ГОСТ 15150-69
|
|
Редуктор кислородный
|
|
ТУ 26-05-235-70
|
|
Центрифуга ОП-8УХЛ42,7000 об/мин
|
|
|
Материалы
|
Гелий в баллоне
|
|
ТУ 51-940-80
|
|
Водород технический
|
|
ГОСТ 3022-80
|
|
Воздух в баллоне
|
|
ГОСТ 11882-73
|
Реактивы
|
3% OV-1 на хроматоне N-супер фракции 0,16-0,20 мм - неподвижная фаза для заполнения хроматографической колонки
|
|
|
|
Анилин ч. д. а.
|
|
ГОСТ 5810-78
|
|
N-метиланилин технический
|
|
ТУ 6-02-571- 81
|
|
N,N-диметиланилин ч. д. а.
|
|
ГОСТ 5855-78
|
|
О-толуидин ч. д. а.
|
|
ГОСТ 10205-73
|
|
N-этиланилин технический
|
|
ТУ 6214-12-37-77
|
|
N,N-диэтиланилин ч. д. а.
|
|
ГОСТ 10162-75
|
|
Хлороформ фарм.
|
|
ГОСТ 20015-88
|
|
Вода дистиллированная
|
|
ГОСТ 6709-72
|
Требования к безопасности
Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям "Пожарных норм проектирования зданий и сооружений" (СНиП ПА-5-700) и "Санитарных норм проектирования промышленных предприятий" (СН-245-71) и СНиП-74.
При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76.
При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях", утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М., 1981), и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением", утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989).
При работе с реактивом соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.
При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
Требования к квалификации оператора
К выполнению измерений допускаются лица, прошедшие специализацию по работе на газовом хроматографе.
Условия измерений
При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:
- температура воздуха (20+-5)°С;
- атмосферное давление 630-800 мм рт. ст.;
- влажность воздуха - не более 80 % при температуре 25°С.
Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.
Подготовка к выполнению измерений
Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка хроматографической колонки, приготовление стандартных смесей, установление градуировочной характеристики.
Приготовление стандартных смесей
Для построения градуировочного графика собирают кровь у контрольной группы и готовят серию рабочих стандартных растворов.
Исходный стандартный раствор для градуировки: в колбу вместимостью 1000 см3 вводят по 10 см3 каждого из аминосоединений. Весовое содержание аминосоединений в исходном стандартном растворе составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): анилин - 10,22 мкг/см3, N-метиланилин - 9,86 мкг/см3, о-толуидин - 9,99 мкг/см3, N,N-диметиланилин - 9,56 мкг/см3, N-этиланилин - 9,63 мкг/см3, N,N-диэтиланилин - 9,35 мкг/см3. Срок хранения -5 ч.
Подготовка хроматографической колонки
Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, гексаном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (гелия) с расходом 55 см3/мин при температуре 300°С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.
Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной калибровки. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (мм2) от массы аминосоединений (мкг) и строится по 5 сериям стандартных растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 5 стандартных растворов, готовят в мерных пробирках объемом 5 см3, добавляют по 1 см3 и вносят исходный стандартный раствор в соответствии с таблицей. Срок хранения - 3 ч.
Таблица
Стандартные растворы для установления градуировочной характеристики при определении концентрации аминосоединений (фрагмент шкалы)
|
Номер смеси для градуировки
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
|
АНИЛИН
Объем исходного стандартного раствора
(10,22 мкг/см3), мм3
|
2,0
|
4,0
|
6,0
|
8,0
|
10,0
|
|
Содержание анилина в I см3 крови, мкг/см3
|
0,024
|
0,040
|
0,060
|
0,080
|
0,10
|
|
N-МЕТИЛАНИЛИН
Объем исходного стандартного раствора
(9,863 мкг/см3), мм3
|
2,0
|
4,0
|
6,0
|
8,0
|
10,0
|
|
Содержание N-метиланилина в 1 см3 крови, мкг/см3
|
0,019
|
0,039
|
0,059
|
0,078
|
0,099
|
|
О-ТОЛУИДИН
Объем исходного стандартного раствора
(9,99 мкг/см3), мм3
|
2,0
|
4,0
|
6,0
|
8,0
|
10,0
|
|
Содержание о-толуидина в 1 см3 крови, мкг/см3
|
0,019
|
0,039
|
0,060
|
0,079
|
0,099
|
|
N,N-ДИМЕТИЛАНИЛИН
Объем исходного стандартного раствора
(9,56 мкг/см3), мм3
|
2,0
|
4,0
|
6,0
|
8,0
|
10,0
|
|
Содержание N,N-диметиланилина в 1 см3 крови, мкг/см3
|
0,019
|
0,038
|
0,057
|
0,076
|
0,095
|
|
N-ЭТИЛАНИЛИН
Объем исходного стандартного раствора
(9,626 мкг/см3), мм3
|
2,0
|
4,0
|
6,0
|
8,0
|
10,0
|
|
Содержание N-этиланилина в 1 см3 крови, мкг/см3
|
0,019
|
0,038
|
0,058
|
0,077
|
0,096
|
|
N,N-ДИЭТИЛАНИЛИН
Объем исходного стандартного раствора
(9,35 мкг/см3), мм3
|
2,0
|
4,0
|
6,0
|
8,0
|
10,0
|
|
Содержание N,N-диэтиланилина в 1 см3 крови, мкг/см3
|
0,019
|
0,037
|
0,056
|
0,075
|
0,094
|
В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 10 мм3 каждого стандартного раствора и анализируют в условиях:
