Методические указания МУК 4.1.775-99 "Определение содержания железа, цинка, никеля в желчи методом атомной абсорбции" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 6 июля 1999 г.)

Методические указания МУК 4.1.775-99
"Определение содержания железа, цинка, никеля в желчи методом атомной абсорбции"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 6 июля 1999 г.)

Дата введения: 6 сентября 1999 г.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 "Методики выполнения измерений" и ГОСТа Р 1.5-92 "Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов". Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение в желчи железа в диапазоне концентраций 0,10-1,5мкг/см3, цинка - 1,00- 5,0 мкг/см3, никеля - 0,50-2,5 мкг/см3.

ГАРАНТ:

См. ГОСТ Р 1.5-2012 "Стандартизация в Российской Федерации. Стандарты национальные. Правила построения, изложения, оформления и обозначения", утвержденный приказом Росстандарта от 23 ноября 2012 г. N 1147-ст

ЖЕЛЕЗО (Fe)                                           Атом. масса - 55,85

Железо - серебристо-серый металл. Т_плавл - 1539°С, Т_кип - 3200°С, плотность - 7,87 г/см3. Реагирует с кислотами, с углеродом образует карбиды. Относится к 3 классу опасности.

ЦИНК (Zn)                                             Атом. масса - 65,37

Цинк - голубовато-серебристый металл. Т_плавл - 419,5 С, Т_кип - 906,2°С, плотность - 7,14 г/см3. Растворим в кислотах и щелочах. Относится к 3 классу опасности.

НИКЕЛЬ (Ni)                                           Атом. масса - 58,71

Никель - серебристый металл. Т_плавл - 1453°С, Т_кип - 2140°С, плотность - 8,9 г/см3. Растворим в воде за сутки 0,15 мг%. Растворим в разбавленных кислотах. Относится к 1 классу опасности.

Сущность метода

Методика основана на непосредственно прямом измерении содержания металлов в биологическом материале (желчи).

Определение элементов методом атомно-абсорбционной спектрофотометрии основано на поглощении света соответствующей длины волны исследуемого элемента в высоко-температурном пламени.

Для измерения используется поглощение с длиной волны, соответствующей максимуму поглощения определяемого металла при прохождении через содержащий пары атомов металлов слой воздуха: железо - 248,3 нм, цинк - 213,9 нм, никель - 232,0 нм.

На одно элементоопределение в среднем затрачивается 7 - 10 мин, с учетом прогрева лампы и юстировки аппаратуры, при этом выполняется 3 параллельных измерения.

Методика обеспечивает выполнение измерений с суммарной погрешностью результата измерений не более 25% при доверительной вероятности 0,95.

Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы

При выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными метрологическими характеристиками.

Средства измерений

Атомно-абсорбционные спектрофотометры С115-М, 2.851.034-04ТО, Perkin Elmer 3110
Весы аналитические ВЛР-200		ГОСТ 19491-74
Колбы мерные вместимостью 100, 200, 250, 500,1000 см3		ГОСТ 1770-74
Пипетки, вместимостью 1, 5, 10 см3		ГОСТ 20297-74
Пробирки с пришлифованными пробками П 4-5-14/23		ГОСТ 1770-74
Государственные образцы стандартов (ГСОРМ)ГСОРМ-24-1 мкг/см3		ГСО 4146-97

Вспомогательные устройства

Редуктор ацетиленовый ДАП-1-65		ГОСТ 5.1381-72
Аппарат для бидистилляции воды БД-06		ТУ 25-11-43-69
Сушильный шкаф ШСС-80		ГОСТ 13474-70
Холодильник для хранения проб
Воронки диаметром 2 и 5 см
Фильтры беззольные белая лента

Материалы

Баллон для ацетилена

ГОСТ 949-73

Реактивы

Хлороформ		ГОСТ 20015-74
Кислота азотная концентрированная, осч.		ГОСТ 4461-77

Требования к безопасности

Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям "Пожарных норм проектирования зданий и сооружений" (СНиП ПА-5-700) и "Санитарных норм проектирования промышленных предприятий" (СН-245-71) и СНиП-74.

При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76.

ГАРАНТ:

Взамен ГОСТ 12.1.004-85 постановлением Госстандарта СССР от 14 июня 1991 г. N 875 с 1 июля 1992 г. введен в действие ГОСТ 12.1.004-91

При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях", утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М.,1981), и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением", утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989).

При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.

При выполнении измерений на приборе соблюдают правила, указанные в "Руководстве по правилам эксплуатации спектрофотометра".

Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускаются лица, прошедшие обучение по работе на атомно-абсорбционном спектрофотометре. К обслуживанию допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера КИП и А, прошедшие инструктаж по технике безопасности на рабочем месте и ознакомленные с правилами обслуживания спектрофотометра.

Условия измерений

При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:

- температура воздуха (20+-10)°С;

- атмосферное давление 630-800 мм рт. ст.;

- влажность воздуха не более 80 % при температуре 25°С.

Выполнение измерений на атомно-абсорбционных спектрофотометрах С115-М и Perkin Elmer 3110 проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по приборам.

Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка атомно-абсорбционного спектрофотометра, приготовление стандартных растворов, построение калибровочной кривой.

Приготовление стандартных смесей

Для приготовления заданных концентраций стандартных растворов исследуемых металлов при измерении проб желчи используется бидистиллированная вода. Основной стандартный раствор готовят из стандартного образца с концентрацией по металлу 1,05- 0,95 г/см3 путем разведения 0,1 HNО3 в мерной колбе вместимостью 100 см3. Для приготовления рабочих стандартных растворов в каждую колбу вносят основной стандартный раствор с концентрацией по металлу 5 мкг/см3 в количестве, соответствующим таблице. Срок хранения - 3 дня.

Таблица

Стандартные смеси для установления градуировочной характеристики при определении концентрации железа, цинка и никеля (фрагмент шкалы)

Номер смеси для градуировки	1	2	3	4
Объем исходной стандартной смеси (5 мкг/см3), см3	2	5	10	20
Содержание металла, мкг/см3	0,10	0,25	0,50	1,00

Подготовка прибора к анализу

Атомно-абсорбционный спектрофотометр обеспечивается ацетиленом, сжатым воздухом, набором спектральных ламп, образцами стандартных растворов определяемых металлов и выводится на рабочий режим согласно инструкции. В качестве нулевого раствора используется 0,1 н HNCО3.

Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной градуировки на градуировочных смесях растворов металлов. Она выражает зависимость величины абсорбции от концентрации (мкг) и строится по 4 сериям стандартных растворов. Каждую серию, состоящую из 4 стандартных растворов, готовят непосредственно перед использованием путем разведения из основного стандартного раствора.

Отбор проб

Отбор проб желчи производится в стерильную химически чистую посуду при дуодональном зондировании. Для анализа берется порция С (печеночная) в объеме 5 см3 в химически чистую пробирку с пришлифованной пробкой. С целью консервирования пробы в пробирку с желчью вносится 0,05 см3 хлороформа. Пробы могут хранится в холодильнике в течение 3 суток.

Выполнение измерений

Измерение концентрации металлов в желчи производится прямым определением. Результаты измерений концентраций металлов регистрируют по показаниям прибора с цифровой индикацией, откалиброванного согласно рабочим стандартным растворам определяемого металла, и представляют в протоколе в виде:

                Х  +- ,25 х Х  , мкг/см3, где

                 ср          ср

     Х   - среднее значение замеренных концентраций.

      ср

Внутренний оперативный контроль

Внутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95).

ГАРАНТ:

Взамен МИ 2335-95 Госстандартом России введена в действие с 1 октября 2003 г. рекомендация МИ 2335-2003

Оперативный контроль воспроизводимости

Периодичность контроля воспроизводимости измерения зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.

Образцами для контроля являются представительные пробы. Отбирают 2 пробы желчи и каждую из них анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают 2 результата анализа, используя разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов и разные экземпляры ГСО для градуировки прибора. В работе должны участвовать 2 аналитика.

Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:

              _    _              _

             |Х  - Х | <= 0,01D х Х, где

               1    2

     _

     Х  - результат анализа рабочей пробы, мкг/см3;

      1

     _

     Х - результат анализа этой же пробы, полученной другим аналитиком  с

      2

использованием другого прибора,  другой мерной  посуды   и  другой партии

реактивов, мкг/см3;

     D - допустимые расхождения между результатами анализа одной и той же

пробы, % (D = 25%).

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

Оперативный контроль точности

Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.

Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50-150%. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы X и рабочей пробы с добавкой X'. Результаты анализа исходной рабочей пробы X и рабочей пробы с добавкой X' получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т. е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:

                  |Х' - Х - С| < К , где

                                  д

     С - добавка к пробе в виде раствора с концентрацией, мкг/см3;

     К  - норматив оперативного контроля погрешности, мкг/см3.

      д

При внешнем контроле (Р = 0,95) принимают

                                     2           2

                К  = кв.корень Дельта х' + Дельта х, где

                 д

           2           2

     Дельта х' и Дельта х - характеристики   погрешностей   для  исходной

пробы и пробы с добавкой, мкг/см3.

            Дельта х' = 0,165 х Х' и Дельта х  = 0,165 х X

При внутрилабораторном контроле (Р = 0,90) принимают, что

                   К'  = 0,84 х К

                    д            д

При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют.