Методические указания МУК 4.1.2109-06 "Определение массовой концентрации 2-хлорфенола в биосредах (моча) газохроматографическим методом" (утв. руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко от 9 августа 2006 г.)

2-Хлорфенол

ClC6H4OH

Молекулярная масса 128,56

2-Хлорфенол - бесцветная жидкость с резким неприятным запахом.

Температура кипения - 175°С. Кумулятивные свойства выражены умеренно. Вызывает нарушения функции почек и печени, при периодическом попадании на кожу - новообразования [1].

2. Сущность метода

Методика основана на предварительном концентрировании анализируемого соединения из биологического материала (моча) экстракцией бутилацетатом и последующем газохроматографическом анализе экстракта.

Выполнение измерений массовой концентрации 2-хлорфенола выполняют методом газовой хроматографии с использованием детектора электронного захвата.

Определению не мешают хлороформ, тетрахлорметан и другие хлорфенолы (температура кипения 3-хлорфенола - 214°С) в количествах, не превышающих верхнюю границу измеряемой концентрации 2-хлорфенола.

Длительность анализа одной пробы мочи, включая экстракцию - 40 мин.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными или лучшими метрологическими и техническими характеристиками.

3.1. Средства измерений

Хроматограф газовый с детектором электронного захвата
Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические	ГОСТ 24104-01
Разновесы Г2-210	ГОСТ 7328-01
Секундомер "Агат"	ТУ 25-1894.003-90
Микрошприцы МШ-10	ТУ 2.833.106-00
Линейка измерительная	ГОСТ 427-75
Лупа измерительная	ГОСТ 25706-83
Колбы мерные, вместимостью 25, 50,100 и 1 000 см3	ГОСТ 1770-74
Пипетки мерные 5,10 см3	ГОСТ 29227-91

3.2. Вспомогательные устройства

Хроматографическая колонка стеклянная длиной 1,5 м и внутренним диаметром 3 мм
Бидистиллятор стеклянный БС	ТУ 25-11.1592-81
Редуктор кислородный	ТУ 26-05-236-73
Центрифуга СМ - 4,3 000 об./мин
Воронка делительная	ГОСТ 23932-90

3.3. Материалы

Азот газообразный

ГОСТ 9293-74

3.4. Реактивы

3% ХЕ-60 на хроматоне N-cynep фракции 0,16-0,20 мм - неподвижная фаза для заполнения хроматографической колонки (производство Германии)
2-хлорфенол, ч	ТУ 6-09-2875
Натрия хлорид, хч	ГОСТ 4233-77
Соляная кислота, хч	ГОСТ 3118-77
Бутилацетат, ч	ГОСТ 22300-76
Камфара фарм.
Серная кислота, осч	ГОСТ 14262-78
Калия дихромат, чда	ГОСТ 4220-75
Ацетон, осч	ТУ 2633-039-44493179-00

3.5. Растворы

Раствор калия дихромата, 3%-й

Раствор камфары, 20%-й

Соляная кислота раствор (1:3)

4. Требования к безопасности

4.1. При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76.

4.2. При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях" (Утверждены МЗ СССР 20.12.82) и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением" (Утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87).

4.3. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

4.4. При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы на газовом хроматографе и в химической лаборатории, прошедшие соответствующий инструктаж, освоившие метод в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности.

6. Условия измерений

6.1. При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:

- температура воздуха ()°С;

- атмосферное давление 630-800 мм рт. ст.;

- влажность воздуха не более 80% при температуре 25°С.

6.2. Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, подготовка хроматографической колонки, приготовление аттестованных смесей, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка посуды

Используемую посуду замочить на 1 ч в свежеприготовленном 3%-м растворе дихромата калия в серной кислоте (3 г дихромата калия на 100 концентрированной серной кислоты), отмыть в проточной водопроводной воде, ополоснуть бидистиллированной водой и просушить при температуре 120°С.

7.2. Подготовка хроматографической колонки

Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой, устанавливают в хроматограф и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (азота) с расходом 30 при температуре 250°С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.

7.3. Приготовление растворов и реактивов

7.3.1. Раствор соляной кислоты (1:3). В мерный стакан объемом 100 , содержащий 75 бидистиллированной воды, вводят 25 соляной кислоты (). Раствор переносят в стеклянную склянку с притертой пробкой.

7.3.2. Раствор камфары 20%-й. Растворяют 2 г кристаллической камфары в 10 бутилацетата. Раствор хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой не более 1 месяца.

7.3.3. Реагент для экстракции. К 100 бутилацетата прибавляют 0,4 20%-го раствора камфары.

7.4. Приготовление аттестованных смесей

Для построения градуировочного графика собирают мочу, не содержащую определяемого компонента, и готовят серию аттестованных растворов.

Исходный аттестованный раствор. В мерную колбу объемом 100 , содержащую 50 мочи, вводят 2 2-хлорфенола и заполняют колбу до метки мочой. Весовое содержание определяемого вещества в исходном аттестованном растворе составляет (с учетом плотности) 25,27 . Срок хранения - 12 ч.

7.5. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной калибровки. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме () от массы 2-хлорфенола (мкг) и строится по 5 сериям рабочих аттестованных растворов. Каждую серию, состоящую их# 5 рабочих аттестованных растворов, готовят в мерных колбах объемом 50 . В колбу объемом 50 , содержащую 30 мочи, добавляют исходную аттестованную смесь для градуировки в соответствии с табл. 1. Затем объем в колбе доводят мочой до метки.

Таблица 1

Рабочие аттестованные растворы для установления градуировочной характеристики при определении концентрации 2-хлорфенола

Номер смеси для градуировки	1	2	3	4	5
2-Хлорфенол, объем исходного аттестованного раствора (25,27 мкг/см3), см3	0,1	0,5	1,0	2,0	3,5
Содержание 2-хлорфенола, мкг/см3	0,05	0,25	0,5	1,0	1,77

Для построения градуировочной характеристики 2-хлорфенола аттестованный раствор в объеме 50 помещают в делительную воронку объемом 250 , добавляют 30 г высаливателя (хлорид натрия), подкисляют раствором соляной кислоты (1:3) до рН 2 и приливают 5 реагента для экстракции (раствор камфары в бутилацетате). Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10 мин, после отстаивания эфирный экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка 10 мин.

В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 2 каждого экстракта аттестованного раствора и анализируют в условиях:

температура термостата колонок - 110°С;

температура испарителя - 170°С;

температура детектора - 250°С;

расход газа-носителя (азот) - 30 ;

скорость диаграммной ленты - 240 мм/ч;

время удерживания 2-хлорфенола - 1 мин.

На полученной хроматограмме определяют площади пиков 2-хлорфенола и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику. Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии реактивов.

7.6. Отбор проб

Отбор проб мочи в объеме не менее 200 производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы.

8. Выполнение измерений

Для определения 2-хлорфенола мочу в объеме 50 помещают в делительную воронку объемом 250 , добавляют 30 г высаливателя (хлорид натрия), подкисляют раствором соляной кислоты (1:3) до рН 2 и приливают 5 реагента для экстракции (раствор камфары в бутилацетате). Содержимое воронки интенсивно встряхивают 10 мин, после отстаивания эфирный экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка 10 мин.

Полученный центрифугат хроматографируют и проводят количественное определение анализируемого соединения в подготовленной пробе по калибровочному графику. Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб мочи. Условия выполнения измерений аналогичны условиям при установлении градуировочной характеристики (п. 7.5).

9. Вычисление результатов измерений

На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной характеристике определяют концентрацию 2-хлорфенола в моче.

За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений , , расхождение между которыми не должно превышать значения предела повторяемости (табл. 3).

Расчет концентраций 2-хлорфенола ведут по формуле:

, где

А - количество компонента, найденное по калибровочному графику, мкг;

- объем экстрагента, ;

- объем экстрагируемой мочи, ;

- объем хроматографируемой пробы, .

Результат измерений представляют в виде , где

- средний результат анализа, ,

при условии:

, где

- максимальный результат из 2-х параллельных измерений;

- минимальный результат из 2-х параллельных измерений;

- значение предела повторяемости,%;

- характеристика погрешности, при Р = 0,95, равная:

, где

- относительное значение характеристики погрешности, %.

10. Внутренний контроль качества результатов измерений

Внутренний контроль качества (ВКК) результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость), точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".

Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в табл. 2 и 3.

Таблица 2

Диапазон измерений, значения показателей точности, повторяемости, воспроизводимости

Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мкг/см3	Показатель повторяемости (относительное среднеквадрати- ческое отклонение повторяемости), сигма , % r	Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратичес- кое отклонение воспроизводимости) сигма , % R_ Xl	Показатель точности (границы относительной погрешности при вероятности Р = 0,95), +-дельта,%
2-Хлорфенол, от 0,05 до 1,80 вкл.	11,7	12,3	23,0

Таблица 3

Значения пределов повторяемости и воспроизводимости при доверительной вероятности Р = 0,95

Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мкг/см3	Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r , % n	Предел внутрилабораторной воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории, но в разных условиях), R _ ,% Xl
2-Хлорфенол, от 0,05 до 1,80 вкл.	22,3	28,4

10.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочного графика проводят раз в квартал в анализируемой серии измерений, определяют содержание исследуемого соединения в градуировочных растворах, которые соответствуют началу, середине и концу градуировочного интервала. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданным и измеренным значением концентраций не превышает 5%.

10.2. Контроль повторяемости

Относительное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении образцов одной и той же рабочей пробы, с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов, в течение возможно минимального интервала, не должно превышать значения предела повторяемости (табл. 3).

Повторяемость результатов параллельных измерений признают удовлетворительной, если

, где

- значение предела повторяемости, %;

- максимальный результат из 2-х параллельных изменений;

- минимальный результат из 2-х параллельных изменений.

Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

10.3. Контроль воспроизводимости

Внутренний контроль воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и т. д.). Воспроизводимость результатов контрольных измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:

, где

- средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных измерений, ;

- средний результат анализа этой же пробы из 2-х параллельных измерений, полученный в других условиях, ;

-значение предела внутрилабораторной воспроизводимости, % (табл.3).

Расхождение между результатами измерений и , полученных в разных условиях, не должно превышать значений показателя воспроизводимости при доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 3.

10.4. Оперативный контроль точности

Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении результата контрольной процедуры, равного разности между результатом контрольного измерения содержания 2-хлорфенола в пробе с известной добавкой (), в рабочей пробе без добавки () и величиной добавки С (добавка должна составлять не менее 40% от содержания 2-хлорфенола в рабочей пробе) с нормативом точности К.

Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:

, где

- средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных измерений, ;

- средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, ;

- величина добавки к пробе, .

Качество контрольной процедуры признают удовлетворительной при выполнении условия: .

При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, устраняют их и процедуру контроля повторяют.

Периодичность ВКК регламентируется в Руководстве по качеству лаборатории.

Литература

1. Бандман А.Л., Войтенко Г.А., Волкова Н.В. и др. Вредные химические вещества. Углеводороды. Галогенпроизводные углеводородов: Справ. изд. /Под ред. В.А. Филова и др. Л.: "Химия", 1990.

Вы можете открыть актуальную версию документа прямо сейчас.

Открыть документ

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.