Методические указания МУК 4.1.2113-06 "Определение массовой концентрации хлороформа, 1,2-дихлорэтана, тетрахлорметана в биосредах (моча) методом газохроматографического анализа равновесного пара" (утв. руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко 9 августа 2006 г.)

Хлороформ (трихлорметан) CHCl3

Молекулярная масса 119,38

Хлороформ - бесцветная жидкость с характерным сладковатым запахом. Температура кипения 61,15°С, температура плавления (- 63,5°С). Хлороформ растворим в органических растворителях и малорастворим в воде, наркотик [1].

Тетрахлорметан CCl4

Молекулярная масса 153,82

Тетрахлорметан - бесцветная жидкость. Температура кипения 76,75°С, температура плавления (-22,87°С). Тетрахлорметан растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. Тетрахлорметан - сильнейший наркотик [1].

1,2-Дихлорэтан С2Н4Сl2

Молекулярная масса 98,97

1,2-Дихлорэтан - бесцветная жидкость. Температура кипения 83,5°С, температура плавления (-35,3°С), 1,2-дихлорэтан растворим в органических растворителях и малорастворим в воде, является токсичным соединением [1].

2. Сущность метода

Методика основана на предварительном выделении алифатических хлорированных углеводородов из биологического материала (моча) путем нагревания объекта и последующем газохроматографическом анализе парогазовой пробы.

Выполнение измерений массовой концентрации алифатических хлорированных углеводородов проводят методом газовой хроматографии с детектором электронного захвата. Определению не мешают ацетон, ароматические углеводороды, алифатические спирты, трихлорэтилен, при содержании каждого из указанных веществ не более 0,5 мкг/.

Длительность анализа одной пробы мочи - 20 мин.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными или лучшими метрологическими и техническими характеристиками.

3.1. Средства измерений

Хроматограф газовый с детектором электронного захвата
Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические	ГОСТ 24104-01
Разновесы Г_2-210	ГОСТ 7328-01
Секундомер "Агат"	ТУ 25-1894.003-9
Микрошприцы МШ-10	ТУ 5Е2.833.106
Линейка измерительная	ГОСТ 427-75
Лупа измерительная	ГОСТ 25706-83
Шприцы медицинские стеклянные, вместимостью 5 см3	ТУ 64-1-378-83
Колбы мерные, вместимостью 25,50,100 и 1000 см3	ГОСТ 1770-74
Пробирки мерные со шлифом 10 см3	ГОСТ 1770-74
Пипетки мерные 5, 10 см3	ГОСТ 29227-91
Хлороформ фарм. Массовая доля основного вещества, % не менее 99,7	ГСО 7288-96
Тетрахлорметан, ч. Массовая доля основного вещества, % не менее 99,9	ГСО 7211-95
1,2-Дихлорэтан, хч. Массовая доля основного вещества, % не менее 99,6	ГСО 7332-96

3.2. Вспомогательные устройства

Хроматографическая колонка стальная длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм
Бидистиллятор стеклянный БС	ТУ 25-11.1592-81
Редуктор кислородный	ТУ 26-05-236-73

3.3. Материалы

Азот газообразный

ГОСТ 9293-74

3.4. Реактивы

Apiezon L на хроматоне N-супер фракции 0,16-0,20 мм - неподвижная фаза для заполнения хроматографической колонки
Калия дихромат, чда	ГОСТ 4220-75
Натрия хлорид, хч	ГОСТ 4233-77
Ацетон, осч	ТУ 2633-039-44493179-00
Серная кислота, осч	ГОСТ 14262-78

3.5. Растворы

Раствор калия дихромата, 3%-й

4. Требования к безопасности

4.1. При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76.

4.2. При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях" (Утверждены МЗ СССР 20.12.82) и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением" (Утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87).

4.3. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

4.4. При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика, опыт работы на газовом хроматографе и в химической лаборатории, прошедшие соответствующий инструктаж, освоившие метод в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности.

6. Условия измерений

6.1. При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:

- температура воздуха ()°С;

- атмосферное давление 630-800 мм рт. ст.;

- влажность воздуха не более 80% при температуре 25°С.

6.2. Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды, подготовка хроматографической колонки, приготовление аттестованных смесей, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка посуды

Используемую посуду замочить на 1 ч в свежеприготовленном 3%-м растворе дихромата калия в серной кислоте (3 г дихромата калия на 100 концентрированной серной кислоты), отмыть в проточной водопроводной воде, ополоснуть бидистиллированной водой и просушить при температуре 120°С.

7.2. Подготовка хроматографической колонки

Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают бидистиллированной водой, ацетоном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой, устанавливают в хроматограф и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (азота) с расходом 30 /мин при температуре 200°С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.

7.3. Приготовление аттестованных смесей

Для построения градуировочного графика собирают мочу, не содержащую определяемых компонентов, и готовят серию аттестованных растворов.

Исходный аттестованный раствор. В мерную колбу объемом 1000 , содержащую бидистиллированную воду в объеме 500 , вводят микрошприцем 4 хлороформа ГСО 7288-96, 1 тетрахлорметана ГСО 7211-95, 20 1,2-дихлорэтана ГСО 7332-96 и заполняют колбу до метки водой. Весовое содержание компонентов в исходной аттестованной смеси составляет (с учетом плотности) хлороформ - 5,95 мкг/, тетрахлорметан - 1,63 мкг/, 1,2-дихлорэтан -25,0 мкг/. Срок хранения - 12 ч.

Рабочий аттестованный раствор. В мерную колбу объемом 100 , содержащую 30 мочи, вносят 10 исходного аттестованного раствора и заполняют колбу до метки мочой.

7.4. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной калибровки на градуировочных смесях хлорированных углеводородов. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (мм3) от массы компонента (мкг) и строится по 6 сериям аттестованных растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 6 аттестованных растворов, готовят в мерных колбах объемом 100 , содержащих 30 мочи. В каждую колбу вносят исходное вещество в соответствии с табл. 1 и заполняют колбу до метки мочой. Срок хранения -12 ч.

Таблица 1

Аттестованные смеси для установления градуировочной характеристики при определении концентрации алифатических хлорированных углеводородов

Номер смеси для градуировки	1	2	3	4	5	6
Хлороформ, объем исходной аттестованной смеси (0,595 мкг/см3), см3	0,25	1,0	2,0	5,0	10,0	15,0
Содержание хлороформа, мкг/см3	0,0015	0,0060	0,0120	0,0300	0,0600	0,0890
Тетрахлорметан, объем исходной аттестованной смеси (0,163 мкг/см3), см3	0,25	1,0	2,0	5,0	10,0	15,0
Содержание тетрахлорметана, мкг/см3	0,0004	0,0016	0,0030	0,0080	0,0160	0,0240
1,2-Дихлорэтан, объем исходной аттестованной смеси (2,50 мкг/см3), см3	0,5	1,0	2,0	5,0	10,0	15,0
Содержание 1,2-дихлорэтана, мкг/см3	0,0125	0,0250	0,0500	0,1250	0,2500	0,3700

Во флаконы из-под пенициллина помещают по 5 мочи с аттестованной смесью, флаконы закрывают резиновой пробкой и ставят в металлические цилиндры с просверленными в стенках отверстиями и навинчивающейся крышкой (рис. 1). Первый цилиндр с флаконом погружают в кипящую, водяную баню. По истечении 5 мин отбирают нагретым в термостате при t = 60 °С шприцем из флакона 5 парогазовой пробы и вводят ее в хроматографическую колонку через испаритель. Процедуру повторяют аналогично для каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях:

температура термостата колонок - 90°С;

температура испарителя - 170°С;

температура детектора - 250°С;

расход газа-носителя (азота) - 30 /мин;

скорость диаграммной ленты - 240 мм/ч;

время удерживания хлороформа - 3 мин 05 с;

тетрахлорметана - 4 мин 20 с; 1,2-дихлорэтана - 5 мин 30 с.

На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 6 серий строят градуировочную характеристику. Градуировку проверяют 1 раз в квартал и при смене партии реактивов.

7.5. Отбор проб

Отбор проб мочи в объеме не менее 200 производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы.

8. Выполнение измерений

В два флакона из-под пенициллина помещают по 5 мочи, флаконы закрывают резиновой пробкой и ставят в металлические цилиндры с просверленными в стенках отверстиями и навинчивающейся крышкой. Первый цилиндр с флаконом погружают в кипящую водяную баню. По истечении 5 мин отбирают нагретым в термостате при t = 60°С шприцем из флакона 5 парогазовой пробы и вводят ее в хроматографическую колонку через испаритель. Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб мочи. Условия выполнения измерений аналогичны условиям при установлении градуировочной характеристики (п. 7.4).

9. Вычисление результатов измерений

На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной характеристике определяют концентрацию алифатических хлорированных углеводородов в моче. За результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений , , расхождение между которыми не должно превышать значения предела повторяемости (табл. 3).

Результат измерений представляют в виде мг/, где

- средний результат измерений, мкг/,

при условии: , где

- максимальный результат из 2-х параллельных измерений;

- минимальный результат из 2-х параллельных измерений;

- значение предела повторяемости, %;

- характеристика погрешности, мкг/ при Р = 0,95, равная:

, где - относительное значение характеристики погрешности, %.

10. Внутренний контроль качества результатов измерений

Внутренний контроль качества (ВКК) результатов измерений - повторяемость, внутрилабораторная прецизионность (воспроизводимость), точность - осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве измерений и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению в соответствии с нормативным документом МИ 2335-2003 "ГСОЕИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа". Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в табл. 2 и 3.

Таблица 2

Диапазон измерений, значения показателей точности, повторяемости, воспроизводимости

Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, 3 мкг/см	Показатель повторяемости (относительное среднеквадратиче- ское отклонение повторяемости), сигма , % r	Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратичес- кое отклонение воспроизводимос- ти), сигма R , % - X i	Показатель точности (границы относительной погрешности при вероятности P = 0,95, +-дельта, %
Хлороформ, от 0,0015 до 0,09	11,6	12,7	28,3
Тетрахлорметан, от 0,0004 до 0,03	11,4	15,2	15,6
1,2-Дихлорэтан, от 0,0125 до 0,37	10,6	13,9	9,1

Таблица 3

Значения пределов повторяемости и воспроизводимости при доверительной вероятности Р = 0,95

Наименование определяемого компонента и диапазон 3 измерений, мкг/см	Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r , % n	Предел внутрилабораторной воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории, но в разных условиях), R , % - X i
Хлороформ, от 0,0015 до 0,09 вкл.	32,1	35,1
Тетрахлорметан, от 0,0004 до 0,03 вкл.	21,6	24,4
1,2-Дихлорэтан, от 0,0125 до 0,37 вкл.	19,3	21,1

10.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят раз в квартал в анализируемой серии измерений. Определяют содержание исследуемых соединений в градуировочных растворах, которые соответствуют началу, середине и концу градуировочного интервала. Градуировка признается стабильной, если расхождение между заданными и измеренными значениями концентраций не превышает 5%.

10.2. Контроль повторяемости

Относительное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в соответствии с методикой одним оператором при измерении образцов одной и той же рабочей пробы, с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов, в течение возможно минимального интервала времени, не должно превышать значения предела повторяемости (табл. 3)

Повторяемость результатов параллельных измерений признают удовлетворительной, если

, где

- значение предела повторяемости, %;

- максимальный результат из 2-х параллельных измерений;

- минимальный результат из 2-х параллельных измерений;

Если условие не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном получении отрицательного результата выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

10.3. Контроль воспроизводимости

Внутренний контроль качества воспроизводимости проводят с использованием рабочей пробы. Пробу делят на две равные части и анализируют в соответствии с методикой, максимально варьируя условия проведения анализа (разные операторы, разное время, разные партии реактивов одного типа, разные наборы мерной посуды и т.д.). Воспроизводимость результатов контрольных измерений признают удовлетворительной, если выполняется условие:

, где

- средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных измерений, мкг/;

- средний результат анализа рабочей пробы из 2-х параллельных измерений, полученный в других условиях, мкг/;

- значение предела внутрилабораторной воспроизводимости, % (табл. 3).

Расхождение между результатами измерений и , полученных в разных условиях, не должно превышать значений показателя воспроизводимости при доверительной вероятности Р = 0,95, указанных в табл. 3.

10.4. Контроль точности

Контроль точности с использованием метода добавок состоит в сравнении результата контрольной процедуры, равного разности между результатом контрольного измерения содержания алифатических хлорированных соединений (хлороформ, тетрахлорметан, 1,2-дихлорэтан) в пробе с известной добавкой (), в рабочей пробе без добавки () и величиной добавки (добавка должна составлять не менее 40 % от содержания алифатических хлорированных соединений в рабочей пробе) с нормативом точности К.

Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:

, где

- средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе с известной добавкой из 2-х параллельных измерений, мкг/;

- средний результат контрольного измерения содержания определяемого компонента в рабочей пробе из 2-х параллельных измерений, мкг/;

- величина добавки к пробе, мкг/.

Качество контрольной процедуры признают удовлетворительной при выполнении условия: .

При превышении норматива контроля К эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

Периодичность ВКК регламентируют в руководстве по качеству лаборатории.

Литература

1. Бандман А.Л., Войтенко Г.А., Волкова Н.В. и др. Вредные химические вещества. Углеводороды. Галогенпроизводные углеводородов: Справ, изд. /Под ред. В.А. Филова и др. Л.: "Химия", 1990.

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас

Получить бесплатный доступ

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.