Вектогеп В-HBs-антиген (Диагностикум гепатита B)

Торговое название: Вектогеп В-HBs-антиген (Vectohep B-HBs-antigen)

Международное название: Диагностикум гепатита B&

Фармакологическая группа: МИБП-диагностикум

Фармакологическая группа по АТХ: V04CX. Другие диагностические средства

Описание:

Тест-система УВектогеп В-HBs-антигенФ (комплект 1) представляет собой набор реагентов для выявления HBsAg вируса гепатита В методом иммуноферментного анализа (ИФА). Принцип метода заключается во взаимодействии HBsAg с антителами, иммобилизованными на поверхности лунок полистиролового планшета. Комплекс Уантиген-антителоФ выявляют с помощью иммуноферментного конъюгата. Тест-система выпускается в виде набора, содержащего все необходимые для проведения ИФА реагенты, кроме дистиллированной воды. Один набор рассчитан на проведение 192 анализов, включая контроли. Минимальная концентрация HBsAg, выявляемая с помощью настоящей тест-системы, составляет 0,1 нг/мл по отраслевому стандартному образцу (ОСО) HBsAg.

СОСТАВ НАБОРА: планшет с иммобилизованными антителами к HBsAg - 2 шт.; положительный контрольный образец, инактивированный (К+; прозрачная жидкость красного цвета; содержит 20±10 нг/мл HBsAg ayw 2 субтипа) - 1 фл., 1 мл; слабоположительный контрольный образец, инактивированный (К+слаб), содержит 0,5±0,25 нг/мл HBsAg ayw 3 субтипа (лиофильно высушенная масса кремового цвета) - 1 фл.; отрицательный контрольный образец, инактивированный (К-; жёлтая прозрачная или с лёгкой опалесценцией жидкость) - 1 фл., 1 мл; конъюгат (концентрат, моноклональные антитела к HBsAg, меченые пероксидазой хрена; жидкость синего цвета) - 2 фл. по 0,5 мл; раствор для разведения конъюгата (РК) - 1 фл., 11 мл; цитратно-фосфатный буферный раствор с перекисью водорода (ЦФР) - 2 фл. по 11 мл; концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т) - 1 фл., 28 мл; орто-фенилендиамин (ОФД) в таблетках, 2 шт. с содержанием ОФД 6,0 мг в каждой - 1 фл.; стоп-реагент - 1 фл., 11 мл.

Показания к применению:

Тест-система УВектогеп В-HBs-антигенФ (комплект 1) предназначена для выявления HBsAg в сыворотке (плазме) крови человека и может быть использована в клинических и эпидемиологических исследованиях, а также службой крови.

Методы применения и принцип действия:

При работе с исследуемыми сыворотками и контрольными образцами следует соблюдать меры предосторожности, принятые при работе с потенциально инфекционным материалом: работать в резиновых перчатках; не пипетировать растворы ртом; все использованные материалы подвергать обработке 6% раствором перекиси водорода (не менее 6 часов). Внимание! Несоблюдение описанных ниже требований может привести к искаженному результату ИФА.

Для приготовления растворов и проведения ИФА следует использовать чистую мерную посуду и автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5%.

Желательно использовать свежеотобранные образцы сыворотки (плазмы) крови. Допускается использование образцов, хранившихся при 2-10 ‡С не более 5 суток, либо при минус (20 І 3)‡С не более 1 мес.

Нельзя использовать проросшие, гиперлипидные сыворотки или подвергавшиеся многократному замораживанию и оттаиванию.

Для скорейшего формирования фибринового сгустка (не превратившийся в фибрин фибриноген может быть источником ложнопозитивных реакций) выдержать пробирки с кровью в термостате при 37‡С 30 мин, а затем центрифугировать при 1000-1500 об./мин 20 мин или при 3000 об./мин 10 мин.

Старайтесь избегать пользоваться стеклянной палочкой или иными предметами для обведения сыворотки крови. Устраняйте образовавшуюся на поверхности сыворотки крови плёнку продолжительным встряхиванием пробирки! Если всё-таки используется стеклянная палочка (или наконечник для пипетки и др.), то только один раз на одну пробирку с последующим обеззараживанием 6% перекисью водорода в течение не менее 6 часов. Перед постановкой реакции все компоненты тест-системы необходимо выдержать не менее 30 мин при температуре (18-25) ‡С.

Сразу после постановки реакции плотно закрытые флаконы с исходными компонентами необходимо поместить в холодильник (2-10) ‡С, использовать в течение срока годности набора.

Растворы хромогена (ОФД, ТМБ) и конъюгата в рабочем разведении готовить непосредственно перед использованием. Исключить воздействие света на раствор хромогена.

При промывке стрипов лунки заполнять полностью (0,3 мл промывочного раствора) и не касаться лунок наконечниками пипетки. Время между заполнением и опорожнением лунок должно быть не менее 10 сек.

При использовании автоматического вошера или гребёнки необходимо следить за состоянием ёмкости для промывочного раствора и соединительных шлангов: в них не должно быть заростов. Раз в неделю желательно емкость для промывочного раствора и шланги промывать 70% спиртом.

При постановке ИФА нельзя использовать компоненты из наборов разных серий или смешивать их при приготовлении растворов.

Запрещается многократное использование планшета для предварительного нанесения сывороток.

Перекисью водорода (другие дезинфицирующие растворы не использовать) обрабатывать только наконечники для пипеток, используемые для работы с исследуемыми сыворотками и контрольными образцами. В случае их повторного использования, обеззараживать в 6% перекиси водорода (не менее 6 ч) с последующей 10-кратной промывкой в проточной воде, 3-кратной промывкой в дистиллированной воде и кипячением (40 мин) в последней из 3-х порций дистиллированной воды, чтобы избавиться от следов перекиси.

Посуду (ванночки), наконечники для пипеток, используемые для работы с остальными реагентами, не обрабатывать дезинфицирующими растворами и моющими средствами, т.к. они не содержат инфекционного агента. В случае повторного использования посуду (ванночки), наконечники для пипеток промыть проточной водой, тщательно и многократно ополаскивая дистиллированной водой.

Посуду (ванночки), наконечники для пипеток, используемые для работы с хромогеном, в случае повторного использования, сразу после работы необходимо промыть 50% раствором этилового спирта, а затем дистиллированной водой. Посуду (ванночки), наконечники для пипеток, предназначенные для работы с ОФД, не использовать при работе с ТМБ.

Пипетки и рабочие поверхности обрабатывать только 70% раствором этилового спирта. Не использовать перекись водорода, хлорамин и т.д.

1. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ. Для проведения ИФА на 1 планшете

1.1. Приготовление промывочного раствора. Использовать для промывки лунок планшетов. Взболтать содержимое флакона с концентратом ФСБ-Т. При выпадении осадка солей в концентрате прогреть его перед разведением до полного растворения осадка. Содержимое 1 флакона с концентратом ФСБ-Т развести дистиллированной водой до 700 мл. Хранение: при 2-10 ‡С до 72 ч.

1.2. Приготовление слабоположительного контрольного образца. Во флакон с К+слаб добавить 500 мкл дистиллированной воды и тщательно перемешать в течение 5 мин. Использовать в течение рабочего дня (8-10 часов). Слабоположительный контрольный образец К+слаб аттестован по ОСО ГИСК им. Л.А. Тарасевича и предназначен для контроля качества лабораторной постановки ИФА.

1.3. Приготовление раствора конъюгата. Внимание! Для работы с конъюгатом рекомендуем использовать одноразовые наконечники для пипеток. В 1 флакон с концентратом конъюгата добавить 5,0 мл раствора для разведения конъюгата и тщательно перемешать. Хранение: при 2-10 ‡С не более 24 ч.

1.4. Приготовление раствора хромогена. Готовить непосредственно перед использованием. Растворить в содержимом флакона с ЦФР, тщательно перемешивая в течение 5 мин, 1 таблетку ОФД (6 мг). После полного растворения раствор должен оставаться прозрачным и бесцветным.

2. ПРОВЕДЕНИЕ ИФА.

2.1. Приготовить промывочный раствор (п. 1.1), слабоположительный контрольный образец (п. 1.2) и раствор конъюгата (п. 1.3). Положительный (К+) и отрицательный (К-) контрольные образцы готовы к использованию и не требуют дополнительного разведения.

2.2. В лунки первого вертикального ряда планшета внести контрольные образцы: в лунки A-1, B-1, C-1 - по 0,1 мл К-, в лунки D-1, E-1 - по 0,1 мл К+слаб , а в лунки F-1, G-1 - по 0,1 мл К+. В остальные лунки внести по 0,1 мл исследуемых сывороток.

2.3. Во все лунки внести по 0,05 мл приготовленного раствора конъюгата. Внимание! Для внесения раствора конъюгата рекомендуем использовать только одноразовые наконечники. Планшет закрыть и поместить во влажную камеру. В качестве влажной камеры можно использовать полиэтиленовый пакет с вложенной в него обильно смоченной водой марлей или любую плотно закрывающуюся коробку, на дне которой есть немного воды. Инкубировать при 44‡С в течение 2 часов. Рекомендуем использовать шейкер (500 об/мин) для повышения показателей чувствительности теста.

2.4. По окончании инкубации содержимое лунок собрать в сосуд с дезинфицирующим раствором (6% раствор перекиси водорода). Лунки планшета промыть 5 раз промывочным раствором. Внимание! Каждую лунку необходимо заполнять полностью (вносить 0,3 мл промывочного раствора). Затем необходима однократная промывка лунок планшета дистиллированной водой для удаления остатков солевого буфера с твином. Воду из лунок тщательно удалить, постукивая перевернутым планшетом по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге и досушить на воздухе 3-5 мин.

2.5. Приготовить раствор хромогена (п. 1.4). Во все лунки внести по 0,1 мл свежеприготовленного раствора хромогена. Внимание! Для внесения раствора хромогена рекомендуем использовать только одноразовые наконечники. Инкубировать 25 мин при 20-25‡С в тёмном месте.

2.6. Реакцию остановить добавлением в лунки по 50 мкл стоп-реагента. Внимание! Следует избегать попадания стоп-реагента на одежду и открытые участки тела. При попадании - промыть большим количеством воды.

3.РЕГИСТРАЦИЯ И ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ

3.1. Результаты ИФА регистрировать с помощью спектрофотометра. Выведение спектрофотометра на нулевой уровень осуществлять по воздуху. Оптическую плотность измерять на длине волны 492 нм. Измерения проводить немедленно после остановки реакции.

3.2. Оценка отрицательных и положительных контролей

3.2.1. ОП К- не должна превышать 0,15. Исключить ОП К-, превышающие 0,15.

3.2.2. Вычислить ОПср К-.

3.2.3. Значения ОП К- должны быть в пределах от 0,6xОПсрК- до 1,4xОПсрК-. Исключить ОП К-, выходящие из этих пределов, и пересчитать ОПсрК-.

3.2.4. Реакцию учитывать, если осталось больше половины отрицательных контролей; среднее значение ОПсрК+ не менее чем в 4 раза превышает ОПсрК-.

3.3. Для оценки результатов анализа исследуемых сывороток вычислить критический уровень оптической плотности (ОПкрит):

ОПкрит = 0,04 + ОПср К-

Значение ОПсрК+слаб должно превышать ОПкрит.

3.4. ПРИМЕР УЧЁТА РЕЗУЛЬТАТОВ РЕАКЦИИ

ОП К- = 0,065; 0,060; 0,070

ОП К+ = 1,8; 1,7 ОП К+слаб = 0,170; 0,160

ОПср К- = (0,065 + 0,060 + 0,070) / 3 = 0,065

ОПср К+ = (1,8 + 1,7) / 2 = 1,75

ОПср К+слаб = (0,170 + 0,160) / 2 = 0,165

Оценка отрицательных контролей:

ОП К- = 0,065; 0,060; 0,070 < 0,15 (выбросов нет)

0,6 x ОПср К- < ОП К- < 1,4 x ОПср К- (0,6 x 0,065 = 0,039; 1,4 x 0,065 = 0,091; выбросов нет)

Реакцию учитывать, т.к. осталось больше половины отрицательных контролей (три из трёх) и:

ОПсрК+ / ОПсрК- = 1,75 / 0,065 = 26,9 > 4.

Расчёт ОПкрит:

ОПкрит = 0,065 + 0,04 = 0,105.

ОПср К+слаб больше ОПкрит.

3.5. Интерпретация результатов. Положительными считать образцы, показавшие ОП, превышающую или равную ОПкрит. Положительный результат означает, что тестируемая сыворотка содержит HBsAg или неспецифически реагирующий агент. Сыворотки, давшие первичный положительный результат, должны быть проверены повторно, и специфичность реакции должна быть подтверждена с помощью набора УВектогеп В - HBs-антиген - подтверждающий тест - стрипФ (комплект 5). Отрицательными считать образцы, имеющие ОП меньше ОПкрит. Отрицательный результат указывает, что тестируемая сыворотка не содержит HBsAg или содержит HBsAg в концентрации ниже определяемого тест-системой уровня. Если первично положительная сыворотка при повторном тестировании дала отрицательный результат и он подтвердился, то сыворотку признают отрицательной, не содержащей HBsAg. Первичный положительный результат может быть вызван: а) случайным заносом микроколичеств высокотитражной положительной по HBsAg сыворотки через пипетку или наконечник; б) свойством некоторых образцов сыворотки или плазмы неспецифически реагировать с поверхностью лунки; в) загрязнением реакционной смеси с субстратом для пероксидазы ионами металлов; г) некачественной промывкой лунок планшета; д) загрязнившимся дном планшета.

Срок годности:

6 месяцев со дня выпуска.

Условия хранения:

Наборы хранить и транспортировать при температуре 2-10 ‡С. Допускается транспортирование при температуре до 25 ‡С в течение 3 суток. Не допускать замораживания.

Дата актуализации инструкции 01.01.2005

Производитель: Вектор-Бест ЗАО, Россия

Владелец регистрационного удостоверения: Вектор-Бест ЗАО, Россия

Формы выпуска: набор диагностический многокомпонентный N2, упаковки комбинированные; набор диагностический многокомпонентный N1, упаковки комбинированные; набор диагностический многокомпонентный N4, упаковки комбинированные; набор диагностический многокомпонентный N5, упаковки комбинированные; набор диагностический многокомпонентный N6, упаковки комбинированные; набор диагностический многокомпонентный N3, уп; набор диагностический многокомпонентный N7, упаковки комбинированные; набор диагностический многокомпонентный N8, упаковки комбинированные

Условия отпуска: для лечебно-профилактических учреждений

Данные гос. регистрации: Р N003997/01 от 22.04.2005

Состояние регистрационного удостоверения: дата аннулирования 01.05.2010

Номер фармстатьи: ФСП 42-0117-5337-04