КомбиБест анти-ВИЧ-1+2 (Диагностикум ВИЧ)

Торговое название: КомбиБест анти-ВИЧ-1+2 (CombiBest anti-HIV-1+2)

Международное название: Диагностикум ВИЧ& (HIV diagnostics)

Фармакологическая группа: МИБП-диагностикум

Фармакологическая группа по АТХ: V04CX. Другие диагностические средства

Показания к применению:

Тест-система предназначена для выявления антител (IgG, IgM) к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в сыворотке или плазме крови человека.

Методы применения и принцип действия:

Диагностическая иммуноферментная тест-система УКомбиБест анти-ВИЧ-1+2Ф представляет собой набор, основой которого являются рекомбинантные антигены ВИЧ-1 и ВИЧ-2, иммобилизованные на поверхности лунок планшета и входящие в состав конъюгата. Основным свойством тест-системы является способность выявлять в сыворотке или плазме крови человека специфические антитела (IgG, IgM) к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 за счет их одновременного взаимодействия с рекомбинантными антигенами, иммобилизованными на поверхности лунок планшета и входящими в состав конъюгата. Набор содержит все необходимые для проведения анализа реагенты, кроме дистиллированной воды. Один набор рассчитан на проведение 192 анализов (по 5 лунок каждого планшета используют для постановки контролей).

1. НАЗНАЧЕНИЕ Тест-система предназначена для выявления антител (IgG, IgM) к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в сыворотке или плазме крови человека.

2. СОСТАВ НАБОРА планшет с иммобилизованными рекомбинантными антигенами ВИЧ-1, ВИЧ-2 - 2 шт.; положительный контрольный образец, инактивированный (К+) - 1 фл.; отрицательный контрольный образец, инактивированный (К-) - 1 фл.; конъюгат (рекомбинантные белки ВИЧ-1 и ВИЧ-2, конъюгированные с пероксидазой хрена) - 1 фл. или 2 фл.; раствор для предварительного разведения (РПР) - 1 фл., 3 мл; раствор для разведения конъюгата (РК) - 2 фл. по 13 мл; концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т) - 2 фл. по 28 мл; цитратно-фосфатный буферный раствор с перекисью водорода (ЦФР) - 2 фл. по 13 мл; тетраметилбензидин (ТМБ) - 1 фл., 1,5 мл; стоп-реагент - 1 фл., 21 мл; пластиковая ёмкость - 2 шт.; одноразовые наконечники - 16 шт.; клейкая пленка для планшет - 2 шт.

3. СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ При работе с исследуемыми сыворотками и контрольными образцами следует соблюдать меры предосторожности, принятые при работе с потенциально инфекционным материалом: работать в резиновых перчатках; не пипетировать растворы ртом; все использованные материалы подвергать обработке 6%-ным раствором перекиси водорода (не менее 6 часов).

Внимание! Несоблюдение описанных ниже требований может привести к искаженному результату ИФА.

Для приготовления растворов и проведения ИФА следует использовать чистую мерную посуду и автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5%. Желательно использовать свежеотобранные образцы сыворотки (плазмы) крови. Допускается использование образцов, хранившихся при (2-10)‡С не более 5 суток, либо при минус (20 І 3)‡С не более 1 мес. Сыворотки, содержащие осадок, могут дать неправильный результат. Такие образцы перед использованием следует центрифугировать 10-15 мин при 3000 об./мин. Нельзя использовать проросшие, гиперлипидные сыворотки или подвергавшиеся многократному замораживанию и оттаиванию. Перед постановкой реакции все компоненты тест-системы необходимо выдержать не менее 30 мин при комнатной температуре (18-25)‡С. Сразу после постановки реакции плотно закрытые флаконы с исходными компонентами необходимо поместить в холодильник (2-10)‡С, использовать в течение 1 месяца. Растворы хромогена и конъюгата в рабочем разведении готовить непосредственно перед использованием. Исключить воздействие света на раствор хромогена. При промывке планшета лунки заполнять полностью (300 мкл промывочного раствора) и не касаться лунок наконечниками пипетки. Время между заполнением и опорожнением лунок должно быть не менее 10 сек. При использовании автоматического вошера или гребёнки необходимо следить за состоянием ёмкости для промывочного раствора и соединительных шлангов: в них не должно быть заростов. Раз в неделю желательно емкость для промывочного раствора и шланги промывать 70% спиртом. Не допускать высыхания лунок планшета между отдельными операциями.

При постановке ИФА нельзя использовать компоненты из наборов разных серий или смешивать их при приготовлении растворов. Запрещается многократное использование планшета для предварительного нанесения сывороток. Перекисью водорода (другие дезинфицирующие растворы не использовать) обрабатывать только наконечники для пипеток, используемые для работы с исследуемыми сыворотками и контрольными образцами. В случае их повторного использования, обеззараживать в 6% перекиси водорода (не менее 6 ч) с последующей 10-кратной промывкой в проточной воде, 3-кратной промывкой в дистиллированной воде и кипячением (40 мин) в последней из 3-х порций дистиллированной воды, чтобы избавиться от следов перекиси.

Посуду (ванночки), наконечники для пипеток, используемые для работы с остальными реагентами, не обрабатывать дезинфицирующими растворами и моющими средствами, т.к. они не содержат инфекционного агента. В случае повторного использования посуду (ванночки), наконечники для пипеток промыть проточной водой, тщательно и многократно ополаскивая дистиллированной водой. Посуду (ванночки), наконечники для пипеток, используемые для работы с хромогеном (ОФД, ТМБ), в случае повторного использования, сразу после работы необходимо промыть 50% раствором этилового спирта, а затем дистиллированной водой. Посуду (ванночки), наконечники для пипеток, предназначенные для работы с ОФД, не использовать для работы с ТМБ. Пипетки и рабочие поверхности обрабатывать только 70% раствором этилового спирта. Не использовать перекись водорода, хлорамин и т.д.

3.1. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ Для постановки анализа на одном планшете

3.1.1. Приготовление промывочного раствора Взболтать содержимое флакона с концентратом ФСБ-Т. При выпадении осадка солей в концентрате прогреть его перед разведением до полного растворения осадка. Содержимое 1 флакона с концентратом ФСБ-Т развести дистиллированной водой до 700 мл. Хранение: при 2-10 ‡С до 72 ч.

3.1.2. Подготовка контрольных образцов Растворить контрольные образцы К+ и К- добавлением в каждый флакон по 300 мкл раствора для предварительного разведения (РПР). Хранение: при 2-10 ‡С до 1 месяца.

3.1.3. Приготовление раствора конъюгата Внимание! Для работы с конъюгатом рекомендуем использовать только одноразовые наконечники для пипеток. Приготовить предварительное разведение путем растворения содержимого флакона с конъюгатом в 1 мл РПР. Рабочее разведение конъюгата готовить непосредственно перед использованием! Для этого отобрать из флакона ________ мкл предварительно разведенного конъюгата, внести во флакон с раствором для разведения конъюгата и тщательно взболтать. Хранение: конъюгат в предварительном разведении хранить при 2-10 ‡С до 1 месяца.

3.1.4. Приготовление раствора хромогена Внимание! Раствор хромогена готовить непосредственно перед использованием! Рекомендуем выделить наконечники для пипеток, которые использовать только для работы с хромогеном. Во флакон с ЦФР добавить 0,65 мл концентрата ТМБ и тщательно взболтать.

3.2. ПРОВЕДЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА)

3.2.1. Приготовить промывочный раствор (п. 3.1.1), подготовить контрольные образцы (п. 3.1.2), раствор конъюгата (п. 3.1.3). Все растворы должны иметь комнатную температуру (18-25)‡С.

3.2.2. В 2 лунки планшета внести по 30 мкл К+, в 3 лунки - по 30 мкл К-) в остальные лунки - по 30 мкл цельных тестируемых сывороток. Затем во все лунки внести по 120 мкл раствора конъюгата. Внимание! Для внесения раствора конъюгата использовать пластиковую ёмкость и одноразовые наконечники, входящие в состав набора. При внесении раствора конъюгата ни в коем случае нельзя касаться наконечником пипетки сыворотки в лунках и стенки лунок планшета. Закрыть планшет клейкой пленкой и инкубировать 1 час при температуре (37 І 0,5) ‡С.

3.2.3. По окончании инкубации промыть лунки планшета 7 раз промывочным раствором с помощью вошера или вручную (используя многоканальную пипетку). Каждую лунку необходимо заполнять полностью (300 мкл промывочного раствора). Необходимо добиваться полного опорожнения лунок после каждого их заполнения. Время между заполнением и опорожнением лунок должно быть не менее 10 сек. По окончании промывки необходимо тщательно удалить влагу из лунок, постукивая перевернутым планшетом по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге.

3.2.4. Приготовить раствор хромогена (п. 3.1.4). Внимание! Для внесения раствора хромогена использовать пластиковую ёмкость и одноразовые наконечники, входящие в состав набора. В каждую лунку внести по 100 мкл раствора хромогена. Планшет поместить на 30 мин в защищённое от света место при температуре 18-25 ‡С.

3.2.5. Остановить реакцию добавлением в каждую лунку по 100 мкл стоп-реагента и немедленно измерить оптическую плотность (ОП). Следует избегать попадания стоп-реагента на одежду и открытые участки тела. При попадании - промыть большим количеством воды.

4. РЕГИСТРАЦИЯ И ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ Результаты ИФА регистрировать с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность (ОП) на длине волны 450 нм. Выведение спектрофотометра на нулевой уровень (УбланкФ) осуществлять по воздуху. Результаты исследований оценивать только в том случае, если значение ОП К- не более 0,2 о.е., а в контроле К+ значение ОП превышает 0,8 о.е.

Исследуемую сыворотку расценивать как положительную, если соответствующее ей значение ОП превышает ОПкрит, которую рассчитать по формуле: ОПкрит = ОП (К-) + 0,15 где ОП (К-) - среднее значение ОП для отрицательного контрольного образца.

Срок годности:

9 месяцев со дня выпуска.

Условия хранения:

Наборы хранить и транспортировать при температуре 2-10 ‡С. Допускается транспортирование при температуре до 25‡С в течение не более 3 суток. Не допускать замораживания.

Дата актуализации инструкции 18.10.2005

Производитель: Вектор-Бест ЗАО, Россия

Владелец регистрационного удостоверения: Вектор-Бест ЗАО, Россия

Формы выпуска: набор диагностический №1, упаковки комбинированные; набор диагностический №2, упаковки комбинированные; набор диагностический №3, упаковки комбинированные

Условия отпуска: для лечебно-профилактических учреждений

Данные гос. регистрации: Р N000304/01 от 14.04.2006

Состояние регистрационного удостоверения: окончание срока действия 14.04.2011

Номер фармстатьи: ФСП 42-0117-0494-05