Эхинококк-IgG-стрип (Диагностикум эхинококкоза)

Торговое название: Эхинококк-IgG-стрип (Echinococcus-IgG-strip)

Международное название: Диагностикум эхинококкоза&

Фармакологическая группа: МИБП-диагностикум

Фармакологическая группа по АТХ: V04CX. Другие диагностические средства

Показания к применению:

Тест-система УЭхинококк-IgG-стрипФ предназначена: для серологической диагностики эхинококкоза однокамерного (эхинококк); контроля эффективности лечения и диагностики рецидива; для научных исследований при эхинококкозе.

Методы применения и принцип действия:

Тест-система УЭхинококк-IgG-стрипФ представляет собой набор реагентов для выявления антител к антигенам эхинококка однокамерного. Активными компонентами тест-системы являются антигены эхинококков, иммобилизованные в лунках стрипов; конъюгат антител против IgG человека с пероксидазой хрена; контрольные положительный и отрицательный образцы.

Способ выявления антител к антигенам эхинококка представляет собой твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА), в ходе которого при взаимодействии исследуемых образцов сыворотки крови с иммобилизованными в лунках планшетов антигенами гельминта происходит связывание специфических антител и образование комплекса Уантиген-антителоФ на поверхности лунок. После удаления несвязавшихся компонентов сыворотки и добавления в лунки стрипов конъюгата антител против иммуноглобулинов человека с пероксидазой происходит включение ферментной метки в иммунный комплекс. В результате ферментативной реакции, проведенной в лунках (отмытых от избытка конъюгата) с субстратным раствором для пероксидазы, содержащим перекись водорода и тетраметилбензидин (ТМБ), образуется окрашенный продукт. Интенсивность окраски этого продукта пропорциональна концентрации антител к антигенам эхинококка однокамерного в анализируемом образце сыворотки. Тест-система рассчитана на проведение 96 анализов, включая контроли, в одном разведении или 12 анализов в семи последовательных двукратных разведениях, начиная с разведения 1:100.

1. НАЗНАЧЕНИЕ Тест-система УЭхинококк-IgG-стрипФ предназначена: для серологической диагностики эхинококкоза однокамерного (эхинококк); контроля эффективности лечения и диагностики рецидива; для научных исследований при эхинококкозе.

2. СОСТАВ НАБОРА планшет разборный с иммобилизованными антигенами эхинококков - 1 шт.; конъюгат (антитела против IgG человека, меченные пероксидазой хрена) - 1 фл., 1,3 мл; контрольный положительный образец, инактивированный (К+) - 1 фл.,1,3 мл; контрольный отрицательный образец, инактивированный (К-) - 1 фл., 1,3 мл; концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (25хФСБ-Т) - 1 фл., 28 мл; раствор для разведения сывороток - 2 фл. по 28 мл; субстратный буферный раствор для ТМБ - 1 фл., 13 мл; тетраметидбензидин (ТМБ), концентрат - 1 фл., 1 мл; стоп-реагент - 1 фл., 12,0 мл; липкая плёнка - 2 шт.

3. СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ Образцы крови у обследуемых лиц в количестве не менее 0,5 мл отбирают из вены или из пальца натощак. Сыворотку крови тщательно отделяют от сгустка и примеси эритроцитов. Сыворотки хранят при температуре 2-10‡С или замораживают при температуре минус 20‡С, если они не могут быть исследованы в течение 48 ч. Не рекомендуется оттаивание и замораживание образцов более одного раза. Следует обратить внимание на точное дозирование и тщательное перемешивание сывороток с раствором, используемым для их разведения. Для внесения компонентов в лунки стрипов используют пипеточные дозаторы с погрешностью измерения объёмов не более 5%, для промывания лунок стрипов можно использовать ручные, автоматические промыватели, а также восьми- или двенадцатиканальные пипеточные дозаторы. Все растворы используются подогретыми до температуры (20І2)‡С. Внимание! В комплект набора входит липкая плёнка для планшета при инкубации в термостате растворов сывороток и конъюгата. При использовании одного или нескольких стрипов следует отрезать полоску плёнки нужного размера и клейкой стороной закрыть все лунки. При извлечении стрипов из термостата плёнку удалить и поместить в дезинфицирующий раствор. Липкая плёнка предназначена для одноразового использования.

3.1. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ (для проведения анализа на 1 стрипе)

3.1.1. Приготовление раствора 1 Раствор 1 готовить из концентрата ФСБ-Т. Для этого 2 мл концентрата развести до 50 мл дистиллированной водой. Хранение: не более 48 ч при 2-10‡С.

3.1.2. Приготовление раствора конъюгата Рабочий раствор конъюгата готовить непосредственно перед использованием. Для приготовления рабочего раствора конъюгата необходимо отобрать из флакона с конъюгатом 100 мкл концентрата, добавить его к 1 мл раствора 1 и тщательно перемешать. Для проведения анализа на 1 планшете готовить 10 мл рабочего раствора конъюгата. Хранение: рабочий раствор конъюгата хранению не подлежит.

3.1.3. Подготовка контрольных образцов Положительный контрольный образец дан в рабочем разведении 1:100 и не требует дополнительного разведения. Для приготовления рабочего раствора отрицательного контрольного образца указанный на этикетке соответствующего флакона объем контрольного образца добавляют к 1 мл раствора для разведения сывороток. Хранение: рабочие растворы контрольных образцов хранению не подлежат.

3.1.4. Подготовка исследуемых сывороток Исследуемые сыворотки развести раствором для разведения сывороток в соотношении 1:100, используя вспомогательные ряды пробирок или лунок дополнительного планшета для микротитрования (в комплект тест-системы не входит). При скрининге сывороток контрольные и исследуемые образцы используют в этом разведении. При тестировании проб сывороток в восьми последовательных двухкратных разведениях их готовят для всех сывороток на растворе для разведения сывороток в интервале от 1:100 до 1:12800, для чего используют вспомогательные ряды пробирок или лунок планшета для микротитрования. Хранение: разведённые образцы сывороток хранению не подлежат.

3.1.5. Приготовление раствора ТМБ Готовят непосредственно перед использованием. Для этого из флакона с концентратом ТМБ отобрать аликвоту 70 мкл и добавить к 1 мл субстратного буферного раствора для ТМБ, прогретого до температуры 20-25 ‡С, тщательно перемешать. При приготовлении раствора ТМБ следует исключить воздействие света (например, обернуть флакон фольгой). Хранение: до 20 мин при температуре 18-25 ‡С в темноте. Внимание! В состав набора входят кювета и наконечники для пипетки, которые следует использовать только для работы с раствором ТМБ. Посуду и пипетки (наконечники), контактирующие с раствором ТМБ, нельзя отмывать с применением синтетических моющих средств, поскольку даже их следы ведут к неконтролируемому разложению ТМБ в ходе реакции.

3.2. ПРОВЕДЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА

3.2.1. Подготовка стрипов Стрипы закрепить в рамке. В лунки стрипов, заполняя их до краёв, внести раствор 1, выдержать около 1-2 мин при температуре (20І2)‡С. Содержимое лунок слить, остатки влаги удалить постукиванием перевернутыми стрипами по фильтровальной бумаге.

3.2.2. Внесение контрольных и исследуемых образцов В лунки стрипов внести по 0,1 мл рабочих разведений контрольных образцов по следующей схеме: при использовании 1 стрипа - 1 лунка К+ и 2 лунки К- 2 стрипа и более - 2 лунки К+ и 2 лунки К- Согласно схеме в лунки стрипа, например, В-1 и С-1 внести по 100 мкл К-. В лунку А-1 - 100 мкл К+. В остальные лунки внести по 100 мкл исследуемых образцов. Н-1 использовать для контроля конъюгата (0,1 мл раствора для разведения сывороток). Стрипы закрыть липкой плёнкой и выдержать в течение 30 мин при температуре (37І1)‡С. Содержимое лунок удалить, лунки промыть 3 раза раствором 1 и 2 раза дистиллированной водой, добавляя в каждую лунку не менее чем 0,2 мл, остатки влаги удалить, постукивая по фильтровальной бумаге.

При определении титра антител приготовить двукратные разведения исследуемых сывороток. В лунки горизонтального ряда А внести по 200 мкл разведения 1:100 исследуемых сывороток, приготовленных, как описано выше. В лунки рядов B-H внести по 100 мкл раствора для разведения сывороток. Каждую сыворотку титровать, перенося по 100 мкл раствора из лунок предыдущего ряда в лунки последующего от A до H, тщательно перемешивая пипетированием. После раститровки из каждой лунки последнего ряда H удалить в дезраствор по 100 мкл раствора, оставляя в лунках по 100 мкл.

Контрольные образцы вносить в лунки стрипов аналогично скринингу. Стрипы закрыть липкой плёнкой и выдержать в течение 30 мин при температуре (37І1)‡С. Содержимое лунок удалить в дезраствор, лунки промыть 3 раза раствором 1 и дважды дистиллированной водой, каждый раз добавляя в лунки не менее, чем по 250 мкл раствора, остатки влаги удалить постукиванием перевёрнутыми стрипами по фильтровальной бумаге.

3.2.3. Внесение конъюгата Рабочий раствор конъюгата внести по 100 мкл во все лунки стрипов. Стрипы закрыть липкой плёнкой и выдержать в течение 30 мин при температуре (37І1)‡С. Содержимое лунок удалить, лунки промыть раствором 1 и дистиллированной водой, как описано в п. 3.2.2.

3.2.4. Внесение раствора ТМБ Во все лунки добавить по 100 мкл раствора ТМБ, приготовленного непосредственно перед использованием. Стрипы закрыть крышкой или фольгой и выдержать в защищённом от света месте при температуре 20-25‡С 15 мин до развития синего окрашивания субстратной смеси в лунках с К+. Ферментативную реакцию остановить, добавляя во все лунки по 100 мкл раствора стоп-реагента (при этом цвет в лунках меняется на желтый). В случае попадания на кожу раствора ТМБ или стоп-реагента необходимо немедленно смыть их водой с мылом.

4. РЕГИСТРАЦИЯ И ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ Учёт результатов проводят с помощью анализатора колориметрического иммуноферментного, регистрируя оптическую плотность (ОП) в лунках стрипов при длине волны 450 нм. Оценку результатов проводят только в том случае, если средний показатель ОП контроля конъюгата не превышает значения 0,2 о.е.; ОП в лунках с отрицательным контрольным образцом в рабочем разведении (ОП К-) не превышает значения 0,3 о.е.; а ОП в лунках рядов с разведением 1:100 положительного контрольного образца (ОП К+) имеет значение не ниже 0,8 о.е. Сыворотку считают положительной, если значение её ОП в разведении 1:100 равно или превышает величину, определяемую по формуле: ОПд = 2,02 х ОП К- + 0,06 При определении титра антител в исследуемой сыворотке за титр в ИФА к используемому антигену принимают то наибольшее разведение сыворотки при котором значение её ОП равно или превышает значение ОПд.

При использовании тест-системы УЭхинококк-IgG - стрипФ в некоторых случаях у больных описторхозом, трихинеллёзом и токсокарозом возможны ложноположительные результаты из-за иммунохимического перекрёста между антигенами эхинококков, описторхисов, трихинелл и токсокар.

Срок годности:

6 месяцев со дня выпуска.

Условия хранения:

Набор реагентов хранят при температуре 2-10‡С в сухом месте. Замораживание не допускается. Транспортирование осуществляется всеми видами крытого транспорта при температуре 2-10‡С. Допускается транспортирование при температуре до 25‡C не более 72 часов.

Дата актуализации инструкции 18.10.2005

Производитель: Вектор-Бест ЗАО, Россия

Владелец регистрационного удостоверения: Вектор-Бест ЗАО, Россия

Формы выпуска: набор диагностический многокомпонентный, упаковки комбинированные

Данные гос. регистрации: Р N001915/01 от 16.12.2005

Состояние регистрационного удостоверения: окончание срока действия 16.12.2010

Номер фармстатьи: ФСП 42-0117-3285-02