ХламиБест C. trachomatis-IgA-стрип (Диагностикум хламидиозов)

Торговое название: ХламиБест C. trachomatis-IgA-стрип (ChlamiBest C trachomatis-IgA-strip)

Международное название: Диагностикум хламидиозов&

Фармакологическая группа: МИБП-диагностикум

Фармакологическая группа по АТХ: V04CX. Другие диагностические средства

Описание:

Диагностическая иммуноферментная тест-система "ХламиБест C. trachomatis - IgА - стрип" представляет собой набор, основным реагентом которого являются очищенные рекомбинантные антигены Chlamydia trachomatis, сорбированные на поверхности лунок разборного полистиролового планшета. Один набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая контроли. Возможны 12 независимых постановок ИФА, при каждой из которых 3 лунки используют для постановки контролей. Набор комплектуют всеми необходимыми реагентами, кроме дистиллированной воды. Тест-система не содержит материалов, которые могут инфицировать персонал в процессе анализа.

Показания к применению:

Тест-система предназначена для выявления видоспецифических иммуноглобулинов класса А (IgА) к антигенам Chlamydia trachomatis в сыворотке (плазме) крови человека и может быть использована в клинических и эпидемиологических исследованиях.

Дополнительные сведения. При хламидийной инфекции очень важно выявлять не только IgG, но и IgA. В сыворотке (плазме) IgA появляются через 1-2 недели после начала заболевания, чуть опережая по времени IgG. Комплекс IgA-антиген активирует комплемент только в присутствии лизоцима, проявляя антибактериальную и нейтрализующую активность. IgA не проходят плаценту и не фиксируются в тканях. Скорость синтеза IgA составляет 24-30 мг/кг в день; содержание в крови - 140-420 мг/100 мл (95 мг/кг). Период полураспада - 5,8 дней. Частота встречаемости первичного селективного иммунодефицита IgA - 1/500-1/700 человек.

Методы применения и принцип действия:

При работе с исследуемыми сыворотками и контрольными образцами следует соблюдать МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ, принятые при работе с потенциально инфекционным материалом: работать в резиновых перчатках; не пипетировать растворы ртом; все использованные материалы подвергать обработке 6%-ным раствором перекиси водорода (не менее 6 часов). Внимание! Несоблюдение описанных ниже требований может привести к искаженному результату ИФА.

Для приготовления растворов и проведения ИФА следует использовать чистую мерную посуду и автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5%.

Желательно использовать свежеотобранные образцы сыворотки (плазмы) крови. Допускается использование образцов, хранившихся при 2-8 град. С не более 5 суток, либо при минус (20 +/- 3) град. С не более 1 мес.

Сыворотки, содержащие осадок или взвесь эритроцитов, могут дать неправильный результат. Такие образцы перед использованием следует центрифугировать 10-15 мин при 3000 об./мин.

Нельзя использовать проросшие, гиперлипидные сыворотки или подвергавшиеся многократному замораживанию и оттаиванию.

Перед постановкой реакции все компоненты тест-системы необходимо выдержать не менее 30 мин при температуре 18-25 град. С.

Отобрать необходимое количество стрипов. Оставшиеся - сразу упаковать в пакет с осушителем.

После постановки реакции плотно закрытые флаконы с исходными компонентами, упакованные стрипы поместить в холодильник (2-8 град. С), использовать в течение 1 мес.

Растворы хромогена (ТМБ, ОФД) и конъюгата в рабочем разведении готовить непосредственно перед использованием. Исключить воздействие света на раствор хромогена.

При промывке стрипов лунки заполнять полностью (300 мкл промывочного раствора) и не касаться лунок наконечниками пипетки. Время между заполнением и опорожнением лунок должно быть не менее 10 сек.

При использовании автоматического вошера или гребёнки необходимо следить за состоянием ёмкости для промывочного раствора и соединительных шлангов: в них не должно быть заростов. Раз в неделю желательно ёмкость для промывочного раствора и шланги промывать 70% спиртом.

Не допускать высыхания лунок планшета между отдельными операциями.

При постановке ИФА нельзя использовать компоненты из наборов разных серий или смешивать их при приготовлении растворов.

Запрещается многократное использование планшета для предварительного нанесения сывороток.

Перекисью водорода (другие дезинфицирующие растворы не использовать) обрабатывать только наконечники для пипеток, используемые для работы с исследуемыми сыворотками и контрольными образцами. В случае их повторного использования, обеззараживать в 6% перекиси водорода (не менее 6 ч) с последующей 10-кратной промывкой в проточной воде, 3-кратной промывкой в дистиллированной воде и кипячением (40 мин) в последней из 3-х порций дистиллированной воды, чтобы избавиться от следов перекиси.

Посуду (ванночки), наконечники для пипеток, используемые для работы с остальными реагентами, не обрабатывать дезинфицирующими растворами и моющими средствами, т.к. они не содержат инфекционного агента. В случае повторного использования посуду (ванночки), наконечники для пипеток промыть проточной водой, тщательно и многократно ополаскивая дистиллированной водой.

Посуду (ванночки), наконечники для пипеток, используемые для работы с хромогеном, в случае повторного использования, сразу после работы необходимо промыть 50% раствором этилового спирта, а затем дистиллированной водой. Посуду (ванночки), наконечники для пипеток, предназначенные для работы с ОФД, не использовать для работы с ТМБ.

Пипетки и рабочие поверхности обрабатывать только 70% раствором этилового спирта. Не использовать перекись водорода, хлорамин и т.д.

1.1. Приготовление реагентов. Внимание! Все используемые растворы должны иметь температуру 18-25 град. С. Промывочный раствор, контрольные образцы и предварительное разведение конъюгата должны быть приготовлены, как минимум, за 30 мин до начала реакции. От соблюдения этих требований зависит точность и воспроизводимость результатов анализа.

1.1.1. Приготовление промывочного раствора. Использовать для промывки лунок стрипов. Взболтать содержимое флакона с концентратом ФСБ-Т. При выпадении осадка солей в концентрате прогреть его перед использованием до полного растворения осадка. В соответствии с числом используемых стрипов отобрать необходимое количество концентрата ФСБ-Т (см. таблицу расхода реагентов - см. дополнительную информацию) и развести его дистиллированной водой до указанного в таблице объёма. Хранение: при 2-8 град. С в течение 72 ч.

1.1.2. Подготовка контрольных образцов Раствор для предварительного разведения (РПР) тщательно взболтать. Развести К+ в ___ мл, К- в ___ мл РПР. Хранение: при 2-8 град. С до 1 месяца.

1.1.3. Приготовление предварительного разведения конъюгата Содержимое флакона с конъюгатом растворить в 1 мл раствора для предварительного разведения (РПР). Хранение: при 2-8 град. С до 1 месяца .

1.1.4. Приготовление рабочего разведения конъюгата. Внимание! Раствор конъюгата в рабочем разведении готовить в пластиковой ёмкости, входящей в состав набора, непосредственно перед использованием. Для работы с конъюгатом рекомендуем использовать одноразовые наконечники для пипеток. Раствор для разведения конъюгата (РК) тщательно взболтать. В пластиковую ёмкость отобрать необходимое количество предварительно разведённого конъюгата и смешать с соответствующим количеством РК (см. таблицу - см. дополнительную информацию).

1.1.5. Приготовление раствора хромогена. Внимание! Раствор хромогена готовить в пластиковой ёмкости, входящей в состав набора, непосредственно перед использованием. Для работы с хромогеном рекомендуем выделить наконечники для пипеток, которые использовать только для работы с хромогеном. В пластиковую ёмкость отобрать необходимое количество ТМБ и смешать с соответствующим количеством ЦФР (см. таблицу), тщательно перемешать.

1.2. ПРОВЕДЕНИЕ ИФА.

1.2.1. Подготовка к работе.

Приготовить промывочный раствор (п. 1.1.1), контрольные образцы (п.1.1.2) и предварительное разведение конъюгата (п. 1.1.3). Подготовить необходимое количество стрипов к работе. Оставшиеся - сразу упаковать во избежание губительного воздействия влаги. Для этого стрипы необходимо снять с рамки, поместить в цефленовый пакет с влагопоглотителем и, свернув несколько раз край пакета, закрепить его канцелярскими скрепками с двух сторон. Упакованные таким образом стрипы хранить при 2-8 град. С до 1 месяца. Перед постановкой ИФА лунки используемых стрипов промыть однократно промывочным раствором в течение 5 мин при помощи автоматического промывателя или вручную. В каждую лунку необходимо вносить не менее 300 мкл раствора. По окончании промывки необходимо тщательно удалить влагу из лунок, постукивая перевёрнутыми стрипами по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. Не допускать высыхания лунок между отдельными операциями при постановке реакции.

1.2.2. Внесение контрольных образцов и испытуемых сывороток, инкубация.

Во все лунки стрипов внести по 80 мкл раствора для разведения сывороток (РС). Затем в любые 2 лунки внести по 20 мкл отрицательного контрольного образца (К-), в 1 лунку 20 мкл положительного контрольного образца (разведение К+ и К- 1:5). Во все остальные лунки внести по 20 мкл испытуемых сывороток, получая таким образом разведение 1:5. Для стандартизации условий внесения и перемешивания контрольных образцов и испытуемых сывороток, предлагаем при проведении этих операций наконечник пипетки держать опущенным в РС под углом приблизительно 45 град., не касаясь стенок лунки стрипа. Внесение сывороток должно сопровождаться тщательным перемешиванием с помощью пипетирования (не менее 5 раз). При этом происходит изменение цвета с желто-красного на розовый (степень изменения цвета зависит от индивидуальных химических свойств сыворотки). Стрипы заклеить клейкой плёнкой и инкубировать при 37 град. С в течение 30 мин. В это время приготовить раствор конъюгата в рабочем разведении (п. 1.1.4).

1.2.3. Отмывка от сывороток.

По окончании инкубации содержимое лунок слить в сосуд с дезинфицирующим раствором. Лунки стрипов промыть 5 раз промывочным раствором (не менее 300 мкл на лунку) и тщательно удалить влагу. Необходимо добиваться полного опорожнения лунок после каждого их заполнения.

1.2.4. Внесение конъюгата, инкубация.

Внимание! Для внесения раствора конъюгата использовать пластиковую ёмкость и одноразовые наконечники, входящие в состав набора. В каждую лунку внести по 100 мкл конъюгата в рабочем разведении. Стрипы заклеить клейкой плёнкой. Инкубировать при температуре 37 град. С в течение 30 мин. В это время приготовить раствор хромогена (п. 1.1.5).

1.2.5. Отмывка от конъюгата.

По окончании инкубации промыть стрипы 5 раз промывочным раствором (не менее 300 мкл на лунку) и удалить влагу, как описано выше.

1.2.6. Внесение раствора хромогена, инкубация.

Внимание! Для внесения раствора хромогена использовать пластиковую ёмкость и одноразовые наконечники, входящие в состав набора. Внести в каждую лунку по 100 мкл раствора хромогена. Раствор хромогена должен быть бесцветным. Стрипы поместить в защищённое от света место и оставить на 30 мин при температуре 18-25 град. С.

1.2.7. Остановка реакции.

Реакцию остановить добавлением в каждую лунку по 100 мкл стоп-реагента и немедленно измерить оптическую плотность (ОП). Внимание! Следует избегать попадания стоп-реагента на открытые участки тела и одежду. При попадании - промыть большим количеством воды!

2. Регистрация и оценка результатов.

Результаты ИФА регистрировать с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность (ОП) на длине волны 450 нм. Выведение спектрофотометра на нулевой уровень ("бланк") осуществлять по воздуху. Результаты исследований оценивать только в том случае, если среднее значение ОП в контроле К- (отрицательный контрольный образец) и контроле К+ (положительный контрольный образец) соответствуют требованиям, приведенным в таблице (см. дополнительную информацию).

Рассчитать значение ОПкрит по формуле:

ОПкрит = ОПср К- + 0,2

где ОПср К- - среднее значение оптической плотности К-.

2.1. ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ. Рекомендуем повторное исследование сомнительных сывороток. Для мониторинга иммунного профиля пациента сравнивают образцы сыворотки в острой и конвалесцентной стадиях заболевания. Простой серологический тест не может быть использован для постановки диагноза. Все клинические и лабораторные данные должны быть рассмотрены в совокупности. Проросшие и гиперлипидные сыворотки могут давать ошибочные результаты.

Срок годности:

6 месяцев со дня выпуска.

Условия хранения:

Набор хранить и транспортировать при 2-8 град. С. Допускается транспортирование при температуре до 25 град. С в течение 3-х суток. Не допускать замораживания.

Дата актуализации инструкции 01.01.2005

Производитель: Вектор-Бест ЗАО, Россия

Владелец регистрационного удостоверения: Вектор-Бест ЗАО, Россия

Формы выпуска: набор диагностический многокомпонентный, упаковки комбинированные

Условия отпуска: для лечебно-профилактических учреждений

Данные гос. регистрации: Р N003237/01 от 06.02.2004

Состояние регистрационного удостоверения: дата аннулирования 28.08.2009

Номер фармстатьи: ФСП 42-0117-4419-03